一种蚜虫室内生物测定的方法
【专利摘要】本发明提供一种蚜虫室内生物测定的方法，步骤如下：1）在细胞培养板每孔底部铺入琼脂；2）将大小一致的叶片浸入待测杀虫剂片刻，取出晾干，背面朝上平铺于细胞培养板中；3）在细胞培养板的每孔内接入若干头无翅成年蚜虫，接入蚜虫的细胞培养板顶部用宣纸条封口；4）将细胞培养板置于恒温室内，24h检查死亡率，计算毒力测定结果。本发明提供一种蚜虫室内生物测定的方法，操作简便，节省空间，减少了生物测定过程中操作对蚜虫产生的损伤及误差，宣纸封口不仅防止蚜虫逃逸，且提高了透气性，有效提高生物测定结果的准确性，从而较为全面准确的了解蚜虫种群抗性水平，为合理使用农药、制定抗性治理方案较为准确的提供依据。
【专利说明】一种蚜虫室内生物测定的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物保护领域，具体涉及一种蚜虫室内生物测定的方法。
【背景技术】
[0002]蚜虫是农业生产中一种重要的害虫，其中桃蚜、棉蚜等是其中危害较为严重的几种。其中，桃蚜是世界上分布最广最为重要的农业和园艺害虫之一，可以在50多个科400多种植物上取食，不仅能够直接刺吸植物营养，造成植物严重失水和营养不良，还可以传播病毒，对植物造成更大的间接伤害，对农业生产造成巨大的经济损失。桃蚜寄主范围广泛，年发生代数多，繁殖能力强，长期以来，对桃蚜的防治主要以化学防治为主。棉蚜也是中国最严重的农业抗性害虫之一，同时也是一种世界性的农业害虫，主要通过取食和传播病毒来危害作物。棉蚜寄主范围广泛，年发生代数多，繁殖能力强，又有“苗蚜”和“伏蚜”两种温度适应类型，因此常发生猖獗，现阶段对棉蚜的防治也主要依靠化学防治。化学杀虫剂的大量、持续及单剂的不合理使用，致使许多国家和地区的蚜虫对一些常用杀虫剂产生了不同程度的抗药性。
[0003]室内生物测定是一种能够较全面、较准确了解蚜虫田间种群抗性水平的手段，也是一种较为传统的了解抗性的方法，目前广泛使用的各种生物测定方法，如带叶浸苗法、点滴法，对供试蚜虫损伤大，对照死亡率大，影响生测结果的准确性。目前使用的叶片药膜法是一种较为理想的蚜虫生物测定方法，但一般都使用玻璃培养皿或一次性培养皿，空间密闭、蚜虫容易逃逸，且占用空间大，无法准确确定生物测定所用的叶片的大小，影响生物测定结果准确性。
【发明内容】
[0004]针对目前广泛使用的各种生物测定方法在供试虫逃逸及生物测定透气性的问题，本发明的目的在于提供一种蚜虫室内生物测定的方法。
[0005]本发明提供一种蚜虫室内生物测定的方法，包括如下步骤:
[0006]I)在细胞培养板每孔底部铺入1%的琼脂Iml ；
[0007]2)将大小一致的叶片浸入待测杀虫剂片刻，取出晾干，背面朝上平铺于步骤I)的细胞培养板中；
[0008]3)在完成步骤2)的细胞培养板的每孔内接入若干头无翅成年蚜虫，接入蚜虫的细胞培养板顶部用宣纸条封口；
[0009]4)将完成步骤3)的细胞培养板置于恒温室内，24h检查死亡率，计算毒力测定结果O
[0010]其中，步骤I)所述细胞培养板为十二孔细胞培养板或六孔细胞培养板。
[0011]其中，步骤I)所述细胞培养板预先洗净烘干。
[0012]其中，步骤I)所述大小一致的叶片为以打孔工具从平展叶片上取得的叶片。
[0013]其中，步骤2)所述打孔工具优选为打孔器，打孔器直径优选2cm。[0014]其中，步骤2)所述片刻为10-20秒，优选15秒。
[0015]其中，步骤2 )所述晾干为置阴凉通风处晾干。
[0016]其中，步骤3)所述宣纸条为2.5cmX 12cm的长方形宣纸条。
[0017]其中，步骤3)所述若干头为15-25头，优选20头。
[0018]其中，步骤3)所述蚜虫为田间蚜虫种群室在内培育多代得到的蚜虫。
[0019]其中，步骤4)所述检查死亡率的标准为轻触蚜虫，足不动视为死亡。
[0020]其中，步骤4)所述计算毒力测定结果，为计算LC5tl (Lethal Concentration of50%)。
[0021]本发明还提供所述一种蚜虫室内生物测定的方法在植物保护领域的应用。
[0022]所述应用主要为所述一种蚜虫室内生物测定的方法在蚜虫防治中的应用。
[0023]本发明的有益效果在于:
[0024]本发明所涉及的蚜虫室内生物测定方法，采用宣纸封口的细胞培养板、1%的琼脂保湿、控制叶片大小一致的方法，操作简便，节省空间，更重要的是减少生物测定过程中操作对供试蚜虫产生的损伤及误差，宣纸封口不仅防止供试蚜虫逃逸，而且提高生测器皿的透气性，有效提高生物测定结果的准确性，从而较为全面准确的了解蚜虫种群抗性水平，为合理使用农药、制定抗性治理方案较为准确的提供依据。【专利附图】
【附图说明】
[0025]图1是实施例1中生物测定所用十二孔细胞培养板的照片；
[0026]图2是实施例1中生物测定时投放蚜虫后十二孔细胞培养板的照片；
[0027]图3是实施例1中生物测定所用的宣纸条和封口用固体胶的照片；
[0028]图4是实施例1中生物测定时完全封口十二孔细胞培养板的照片。
【具体实施方式】
[0029]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0030]若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
[0031]实施例1
[0032]1.研究对象
[0033]研究对象为实验室饲养多代的桃蚜田间种群。
[0034]2.方法
[0035]供试药剂批虫啉，采用十二孔细胞培养板(Corning Costar牌)进行室内毒力测定。
[0036]2.1原药母液的配制及稀释
[0037]将吡虫啉原药溶解于丙酮，定容后存放于药剂瓶中，封口膜封口，4°C冰箱保存。毒力测定前，用含0.05% (v/v) TritonX-1OO的蒸馏水稀释至各浓度，备用。毒力测定时药剂浓度设定为5到7个，并设三个简单重复。
[0038]2.2生测叶片的选择及使用
[0039]选用新鲜包菜叶片，清水洗涤晾干，打孔器打孔(直径d=2cm)。将打孔的包菜叶碟浸入各稀释浓度的药剂15秒，取出后晾干后，背面朝上，置于预先洗净烘干的十二孔细胞培养板(见图1)的孔内，每孔底部铺有Iml的1%的琼脂(琼脂购自国药集团化学试剂有限公司)。
[0040]2.3毒力测定供试蚜虫的选择
[0041]选用室内饲养的桃蚜田间种群(采集桃蚜田间种群，室内以无虫萝卜苗培育饲养多代，所述萝卜苗为在恒温培养箱内种植的无虫萝卜苗)，挑取健康一致的无翅成蚜进行实验，每孔放置20头蚜虫(见图2)，宣纸条封口(2.5cmX 12cm的长方形宣纸条，采用固体胶封口，见图3)，封好的十二孔细胞培养板(见图4)在室内正常条件下(温度20?25°C，相对湿度50%?75%，光照16L:8D)饲养。
[0042]2.4结果检查及死亡标准判断
[0043]24h后检查结果，以毛笔轻触蚜虫，足不动记为死，以对照死亡率小于10%为有效测定，并用对照死亡率进行校正。数据处理采用POLO分析软件，计算LC5tlt5
[0044]利用其他生测方法，如带虫浸液法，因不能保证浸液的完全性而影响实验结果；点滴法只能测定触杀毒性，不能测定胃毒抗性；利用其他工具的叶片药膜法，操作比本发明方法繁琐，无法保证叶片大小一致，且供试蚜虫容易逃逸，无法解决生测器皿透气性问题，从而影响生物测定结果的准确性。
[0045]由图1-图4可以看出，利用本发明的生物测定方法，宣纸封口有效解决了供试蚜虫逃逸及透气性问题，生测叶片大小一致，生测药剂定量，且节省空间，提高结果准确性。
[0046]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种蚜虫室内生物测定的方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)在细胞培养板每孔底部铺入1%的琼脂Irnl； 2)将大小一致的叶片浸入待测杀虫剂片刻，取出晾干，背面朝上平铺于步骤I)的细胞培养板中； 3)在完成步骤2)的细胞培养板的每孔内接入若干头无翅成年蚜虫，接入蚜虫的细胞培养板顶部用宣纸条封口； 4)将完成步骤3)的细胞培养板置于恒温室内，24h检查死亡率，计算毒力测定结果。
2.如权利要求1所述蚜虫室内生物测定的方法，其特征在于，所述细胞培养板为十二孔细胞培养板或六孔细胞培养板。
3.如权利要求1所述蚜虫室内生物测定的方法，其特征在于，所述大小一致的叶片为以打孔工具从平展叶片上取得的叶片。
4.权利要求1-3任一项所述的蚜虫室内生物测定的方法在植物保护领域的应用。
【文档编号】G01N33/50GK103675255SQ201310689948
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月16日 优先权日:2013年12月16日
【发明者】高希武, 刘晓岚, 郭慧琳, 汤秋玲, 常静 申请人:中国农业大学