一种参芪扶正注射液核磁共振质量控制方法
【专利摘要】本发明提供一种采用质子核磁共振指纹图谱结合多成分含量测定的方法来控制参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类的质量。本发明采用定性、定量的质子核磁共振指纹图谱技术，建立一种针对参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的质量控制方法，在工业生产中可与HPLC指纹图谱联合使用，实现对参芪扶正注射液产品的全面质量控制。
【专利说明】一种参苗扶正注射液核磁共振质量控制方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及参芪扶正注射液的质量控制方法，特别涉及采用质子核磁共振指纹图谱结合多成分含量测定的方法来控制参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类的质量。
【背景技术】
[0002]参芪扶正注射液是丽珠集团利民制药厂研制开发成功的国家二类中药新药参芪扶正注射液，该药为国内首创的纯中药澄明大输液，1999年11月获国家药品监督管理局正式生产批文。参芪扶正注射是由传统补气药党参、黄芪组成的复方制剂，具有益气扶正之功效，用于肺脾气虚引起的神疲乏力，少气懒言，自汗眩晕；肺癌、胃癌见上述症候者的辅助治疗。
[0003]在2009年I月28日公开的200710136382.0号中国专利申请中报道了有关参芪扶正注射液的质量控制方法，按照该专利公开中记载的方法，建立起了参芪扶正注射液的HPLC指纹图谱。该专利申请公开中记载的方法据尽管有许多优点，但仍存在不足，采用高效液相色谱法(HPLC)分析方法对天然产物进行研究，需要经过提取、精制等预处理，操作较烦琐，且效率低。而且ODS色谱柱在分离过程中，性较大的水溶性成分损失被。因此，HPLC指纹图谱技术不能检测到参芪扶正注射液中的氨基酸、有机酸和糖类化合物。
[0004]近年来由于现代超导高磁场的脉冲Fourier变换核磁共振谱仪的应用，核磁共振技术应用于天然产物分析已日趋成熟。核磁共振定量分析法操作简便，样品用量少，定性鉴定和定量分析同步完成，无须被测物的标准对照品，只须一般标准品(内标)即可完成定量分析，分析速度和精密度可以接近HPLC法。
[0005]所以，本发明采用定性、定量的质子核磁共振指纹图谱技术，建立一种针对参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的质量控制方法，在工业生产中可与HPLC指纹图谱联合使用，实现对参芪扶正注射液产品的全面质量控制。
【发明内容】
[0006]本发明提供了一种参芪扶正注射液的1H-NMR指纹图谱质量控制方法，可以有效解决参芪扶正注射液中氨基酸、有机酸和糖类化合物的含量测定问题，为参芪扶正注射液全面质量控制奠定基础。
[0007]本发明是通过下列步骤实现的:
[0008](I)参芪扶正注射液1H-NMR指纹图谱的建立和定性鉴别
[0009]①参芪扶正注射液样品溶液的制备
[0010]参芪扶正注射液样品冻干后精密称取10mg，加入0.6ml D20(含内标TSP0.0Olg /ml),转移至5mm核磁管中,加封直接用于1H-NMR测试。
[0011]②1H-NMR指纹图谱的测定
[0012]将核磁管置于核磁共振仪中，采用水峰抑制脉冲序列测定参芪扶正注射液样品溶液的1H-NMR指纹图谱和对照品溶液的1H-NMR图谱。[0013]优化的测试参数及条件为:抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度298K，谱宽7211.5Hz, 90°脉冲宽度13.87 μ s，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间2s，接受增益114。
[0014]③质子信号峰的定性鉴别
[0015]参芪扶正注射液对照品溶液的1H-NMR图谱上质子信号峰分布在δ 0-5.5之间，其中δ 0.0-3.2是氨基酸和有机酸质子特征信号区，δ 3.3-5.5是糖基质子特征信号区(图1)。根据质子信号峰的化学位移值和偶合裂分情况，结合参芪扶正注射液的二维核磁图谱信息和标准品溶液的1H-NMR图谱，共鉴定出17个氨基酸类、有机酸类和糖类化合物，分别
为:
[0016]
【权利要求】
1.一种参芪扶正注射液的1H-NMR指纹图谱质量控制方法，包括以下步骤: a.称取冻干参芪扶正注射液样品，加入含内标TSP0.0Olg / ml的D2O,转移至核磁管中后，加封用于1H-NMR测试，1H-NMR测试是采用水峰抑制脉冲序列测定参芪扶正注射液样品溶液的1H-NMR指纹图谱和对照品溶液的1H-NMR图谱； b.质子信号峰的定性鉴别； c.选择各个化合物中独立的特征质子信号峰作为定量峰，TSP为内标化合物，应用以下公式测定参芪扶正注射液中蔗糖、葡萄糖、焦谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、琥珀酸、苏氨酸、苹果酸的含量:
2.根据权利要求1所述的参芪扶正注射液的IH-NMR指纹图谱质量控制方法，其特征在于:所述步骤a中称取IOmg的冻干参芪扶正注射液样品，加入含内标TSP0.0Olg / ml的0.6ml D2O,转移至5mm核磁管测定。
3.根据权利要求2所述的参芪扶正注射液的IH-NMR指纹图谱质量控制方法，其特征在于:所述步骤b中质子信号峰的定性鉴别为:根据质子信号峰的化学位移值和偶合裂分情况，结合参芪扶正注射液对照样品的二维核磁图谱信息和标准品溶液的IH-NMR图谱鉴定出蔗糖、葡萄糖、果糖、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苏氨酸、丙氨酸、乙酸、脯氨酸、焦谷氨酸、苹果酸、琥珀酸、天门冬氨酸、丙二酸、氨基丁酸和甲酸共17个化合物。
4.根据权利要求3所述的参芪扶正注射液的IH-NMR指纹图谱质量控制方法，其特征在于:所述步骤d中采用MetresNova软件对得到的1H-NMR指纹图谱进行数据处理，数据处理包括相位调整、基线校正、分段积分。
5.根据权利要求4所述的参芪扶正注射液的IH-NMR指纹图谱质量控制方法，其特征在于:所述步骤d中采用MetresNova软件对全谱进行分段积分，以0.04为最小间隔积分，得到500个数据点，即每段化学位移值下的相对峰面积积分值，与制定的标准指纹图谱进行比较，采用相关系数法和夹角余弦值法计算定性相似度，相似度大于0.95则认为注射液合格。
6.根据权利要求5所述的参芪扶正注射液的IH-NMR指纹图谱质量控制方法，其特征在于:所述步骤a中1H-NMR的测试参数及条件为:抑水峰序列zgcppr，观测频率600.23MHz，测定温度298K，谱宽7211.5Hz, 90。脉冲宽度13.8700 μ S，采样数据点65536，扫描次数16次，延迟时间2s，接受增益114。
【文档编号】G01N24/08GK103884731SQ201310756866
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2013年12月28日 优先权日:2013年12月28日
【发明者】曹晖, 姜苗苗, 许磊, 黄文华, 刘东来, 谢海燕 申请人:丽珠集团利民制药厂, 珠海现代中药高科技有限公司