小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法
【专利摘要】本发明涉及一种小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法。首先制备对照品和供试品溶液，然后分别吸取对照品溶液，供试品溶液，点于同一块硅胶薄层板上，以展开剂上行展开，取出晾干，分别置紫外光灯下观察薄层色谱，再喷上硫酸乙醇溶液，并置于烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再分别置日光及紫外光灯下观察薄层色谱，若与对照品相同比移值处有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则判定样品结果为阳性。显然，本发明操作简便，快速，成本低，既解决了其中的假“阳性”干扰的问题，也避免了传统采用红外光谱、HPLC-MS等测定所产生的昂贵费用和大量时间，使有效监控小活络丸内是否非法添加化学药品成为可能。
【专利说明】小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药质量检测领域，具体涉及一种小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法。
【背景技术】
[0002]小活络丸是由胆南星、制川乌、制草乌、地龙、乳香(制)、没药(制)共6味中药饮片组成的中药制剂。主要功效是祛风散寒，化痰除湿，活血止痛。用于风寒湿邪闭阻、痰瘀阻络所致的痹病，症见肢体关节疼痛，或冷痛，或刺痛，或疼痛夜甚、关节屈伸不利、麻木拘挛。其制备方法是将胆南星、制川乌、制草乌、地龙、乳香(制)、没药(制)分别粉碎成细粉，过筛，混匀，每IOOg细粉加炼蜜120?130g制成大蜜丸。该中药制剂成分复杂，临床用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎及骨质增生所致的腰痛、腿痛、颈痛、上肢痛等痹证，坐骨神经痛，十二指肠壅积症等。属抗风湿类中成药。为了追求经济利益，一些不法分子在小活络丸中非法添加具有解热、抗炎、止痛作用的廉价化学药品，以达到快速显效的效果。而患者在不知情的情况下过多摄入这些化学药品后，会对身体造成极大的危害。
[0003]抗风湿类中成药内非法添加化学药品主要有两大类:解热镇痛类和糖皮质激素类。目前，检测抗风湿类中成药内非法添加化学药品的方法均为不限定中成药具体种类的通用方法。该通用方法涉及所有抗风湿类中成药，范围广，但抗风湿类中成药种类繁多，而每一种中成药的组方都各不相同，极易产生假“阳性”干扰，无法明确地判定结果，因此通用方法仅能做到粗筛。而且由于假“阳性”的干扰，所检测的化学药品仅限于解热镇痛类或糖皮质激素类中有限的几种。如张鹤等“关于抗风湿类中药制剂中非法添加化学药品的检测方法研究”(亚太传统医药.2010.6 (6):31-32)先采用薄层色谱法进行粗筛，而后必须再进一步对其中的阳性样品采用红外光谱或高效液相色谱法进行验证。但由于红外光谱仪、HPLC-MS、GC-MS仪器昂贵，且必须由专业的技术人员操控，维护费用也极高，无法实现快速筛查达到监控的目的。显然，完全针对小活络丸内非法添加多种化学药品构建起能进行快速筛查的方法是非常必要的。因此，为了使在小活络丸内非法添加化学药品的违法行为得到有效扼制，保障人民群众用药安全有效，亟需建立小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法，以克服现有技术的不足。
[0005]本发明的另一目的是排除小活络丸和非法添加化学药品的假“阳性”干扰，实现多种非法添加化学药品的快速筛查，达到监控的普及可行。
[0006]小活络丸是一个中药制剂，虽然组方药味不多，但化学成分十分复杂，加之非法添加化学药品，测定时极易出现假“阳性”干扰。通常假“阳性”干扰必须采用红外光谱仪、HPLC-MS,GC-MS进行成分确证。研究发现，由于小活络丸中所需筛查的15种化学药品成分均有溶于甲醇的性质，且甲醇对大蜜丸中的炼蜜溶解度低，因此利用该性质，选用甲醇作为提取溶剂。考虑到小活络丸是大蜜丸，如不进行分散，该提取溶剂无法渗入到样品中，不能充分提取待测的化学药品。因此取小活络丸一丸(3g)，剪碎后，加硅藻土研磨，即可将大蜜丸充分分散。再加入甲醇，将样品全部浸泡，并采用超声处理，以有效地将这15种成分提取出来。既可避免小活络丸中炼蜜的溶出，便于点样，又可大大减少小活络丸中其他成分对测定的干扰。又因非法添加的化学药品在薄层板上吸附能力上的不同，再分别以展开剂筛查出中成药小活络丸中是否非法添加了 15种分为3组的化学药品。
[0007]本发明的快速筛查方法如下
[0008](I)对照品溶液的制备:分别取醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和双氯芬酸钠对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液A ;另分别取泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德和醋酸氢化可的松对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液B;再分别取对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松对照品各IOmg,用甲醇IOml溶解,制成对照品溶液C。
[0009](2)供试品溶液的制备:取小活络丸3g，剪碎，加硅藻土 2g，研匀，加甲醇，超声处理，滤过，取滤液作为供试品溶液。
[0010](3)进行筛查测定:分别吸取对照品溶液Al μ 1，供试品溶液5 μ 1，点于同一块硅胶GF254薄层板上，以展开剂I上行展开，取出，晾干，分别置紫外光灯(波长254nm)和紫外光灯(波长365nm)下观察薄层色谱，然后再喷上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱。上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。
[0011]另分别吸取对照品溶液BI μ I,供试品溶液5 μ I,点于同一块娃胶GF254薄层板上，以展开剂II上行展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长254nm)下观察薄层色谱，然后再喷上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱。上述二种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。
[0012]再分别吸取对照品溶液Cl μ I,供试品溶液5 μ I,点于同一块娃胶GF254薄层板上，以展开剂III上行展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长254nm)下观察薄层色谱，然后再喷以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再分别置日光及紫外光灯(波长365nm)下观察薄层色谱。上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。
[0013]上述的展开剂I为正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: I (体积比)。
[0014]上述的展开剂II为三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液=18: 6: 2: 0.1 (体积比)。
[0015]上述的展开剂III为正己烷-乙酸乙酯-甲醇=32: 18: 5 (体积比)。
[0016]上述超声处理的条件为30分钟，功率250W，频率50kHz。
[0017]该方法从对照品溶液的制备到对样品结果进行判定，全过程仅需I小时，而且能在同一块硅胶GF254薄层板上筛查多个厂家的产品。显然，本发明方法操作简便，快速，成本低，既解决了小活络丸成药因成分复杂所导致的假“阳性”干扰的问题，也避免了采用红外光谱、HPLC-MS、GC-MS测定所产生的昂贵费用和大量时间，因此是有效监控中成药小活络丸内是否非法添加化学药品成为可能。
【专利附图】
【附图说明】
[0018]图1:本发明的小活络丸和醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠对照品在展开剂I及紫外光灯(波长254nm)条件下的TLC色谱图；其中的，1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液A (斑点a:醋酸泼尼松；斑点b:醋酸地塞米松；斑点c:Π引哚美辛；斑点d:萘普生；斑点e:双氯芬酸钠)。
[0019]图2:本发明的小活络丸和醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠对照品在展开剂I及紫外光灯(波长365nm)条件下的TLC色谱图；其中的，1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液A (斑点d:萘普生)。
[0020]图3:本发明的小活络丸和醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠对照品在展开剂I及日光条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液A (斑点a:醋酸泼尼松；斑点b:醋酸地塞米松；斑点c:Π引哚美辛；斑点d:萘普生；斑点e:双氯芬酸钠)。
[0021]上述的图1、图2、图3中的小活络丸阴性样品的供试品溶液为不含醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。小活络丸阳性样品的供试品溶液为含有醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。
[0022]图4:本发明的小活络丸和泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德、醋酸氢化可的松在展开剂II及紫外光灯(波长254nm)条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液B (斑点a:泼尼松龙；斑点b:氢化可的松；斑点c:泼尼松；斑点d:曲安奈德；斑点e:醋酸氢化可的松)。
[0023]图5:本发明的小活络丸和泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德、醋酸氢化可的松在展开剂II及日光条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；
2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液B (斑点a:泼尼松龙；斑点b:氢化可的松；斑点c:泼尼松；斑点d:曲安奈德；斑点e:醋酸氢化可的松)。
[0024]上述的图4、图5中的小活络丸阴性样品的供试品溶液为不含泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德、醋酸氢化可的松的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。小活络丸阳性样品的供试品溶液为含有泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德、醋酸氢化可的松的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。
[0025]图6:本发明的小活络丸和对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展开剂III及紫外光灯(波长254nm)条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液C (斑点a:对乙酸氨基酚；斑点b:地塞米松；斑点c:醋酸可的松；斑点d:醋酸曲安奈德；斑点e:保泰松)。
[0026]图7:本发明的小活络丸和对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展开剂III及紫外光灯(波长365nm)条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液C (斑点b:地塞米松；斑点c:醋酸可的松；斑点d:醋酸曲安奈德；斑点e:保泰松)。
[0027]图8:本发明的小活络丸和对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松在展开剂III及日光条件下的TLC色谱图；其中的1:小活络丸阴性样品的供试品溶液；2:小活络丸阳性样品的供试品溶液；3:对照品溶液C (斑点b:地塞米松；斑点c:醋酸可的松；斑点d:醋酸曲安奈德；斑点e:保泰松)。
[0028]上述的图6、图7、图8中的小活络丸阴性样品的供试品溶液为不含对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。小活络丸阳性样品的供试品溶液为含有对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德、保泰松的小活络丸样品按照供试品溶液的制备方法制备的供试品溶液。
【具体实施方式】
[0029]下面给出详细的实施例。
[0030]本发明采用:仪器与试药:SartorisBP211D 电子天平；AUTO SCIENCEAS10200BT型超声波清洗器；P/G2007型恒温烘箱；薄层板:硅胶GF254薄层板(德国MERCK批号:HX929689规格:20X20cm);试剂均为分析纯；醋酸泼尼松对照品(批号:100012-200706)、醋酸地塞米松对照品(批号:100122-201206)、吲哚美辛对照品(批号:100258-200904)、萘普生对照品(批号:100198-201205)、双氯芬酸钠对照品(批号:100334_200302)、泼尼松龙对照品(批号:100153-201004)、氢化可的松对照品(批号:100152_200206)、泼尼松对照品(批号:100199-201002)、曲安奈德对照品(批号:100055_201103)、醋酸氢化可的松对照品(批号:100013-200607)、对乙酰氨基酚对照品(批号:100018-200408)、地塞米松对照品(批号:100129-201105)、醋酸可的松对照品(批号:100123_200303)、醋酸曲安奈德对照品(批号:100125-201105)、保泰松对照品(批号:100481-200601 )，以上对照品均由中国食品药品检定研究院提供；小活络丸(标示批号:130110,20130715,130401,120801,20121201,120012、2111105)。
[0031]色谱条件:展开剂1:正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸=15: 5: 1(体积比)；展开齐IJI1:三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液=18: 6: 2: 0.1 (体积比)；展开剂II1:正己烷-乙酸乙酯-甲醇=32: 18: 5(体积比);展开条件:温度:23°C ;相对湿度:59% ;展距:10cm。
[0032]对照品溶液的制备:分别取醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和双氯芬酸钠对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液A ;另分别取泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德和醋酸氢化可的松对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液B ;再分别取对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液C。
[0033]供试品溶液的制备:取小活络丸成品3g，剪碎，加硅藻土 2g，研匀，加甲醇10ml，进行超声处理，滤过，取滤液作为供试品溶液。
[0034]上述的超声处理条件为30分钟，功率250W，频率50kHz。
[0035]进行筛查测定:分别吸取对照品溶液Al μ 1，供试品溶液5 μ 1，点于同一块硅胶GF254薄层板上，以展开剂I上行展开，取出，晾干，分别置紫外光灯(波长254nm)和紫外光灯(波长365nm)下观察薄层色谱，然后再喷上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱。上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。检出了 5种化学药品是醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和双氯芬酸钠。对应的色谱图如图1、图2、图3。
[0036]另分别吸取对照品溶液BI μ I,供试品溶液5 μ I,点于同一块娃胶GF254薄层板上，以展开剂II上行展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长254nm)下观察薄层色谱，然后再喷上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱。上述二种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。又检出了 5种化学药品是泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德和醋酸氢化可的松。对应的色谱图如图4、图5。
[0037]再分别吸取对照品溶液Cl μ I,供试品溶液5 μ I,点于同一块娃胶GF254薄层板上，以展开剂III上行展开，取出，晾干，置紫外光灯(波长254nm)下观察薄层色谱，然后再喷以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再分别置日光及紫外光灯(波长365nm)下观察薄层色谱。上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处如有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性。再检出了 5种化学药品是对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松。对应的色谱图如图6、图7、图8。
[0038]结果表明，3组混合对照品分离效果良好，小活络丸自身的所有成分对测定无干扰，即供试品在对照品相同比移值处无干扰成分存在。
[0039]综上，本发明所建立的薄层色谱法可快速检测中成药小活络丸中是否非法添加了醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸钠、泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德、醋酸氢化可的松、对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松这15种化学药品，具有操作简便，快速，低成本的特点，可以作为小活络丸中成药质量监控的普及方法。
【权利要求】
1.一种小活络丸内非法添加化学药品的快速筛查方法，其特征是首先分别制备各对照品溶液(I)和供试品溶液(2)，然后进行筛查测定(3): (1)对照品溶液的制备:分别取醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和双氯芬酸钠对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液A ;另分别取泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德和醋酸氢化可的松对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液B ;再分别取对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松对照品各10mg，用甲醇IOml溶解，制成对照品溶液C ； (2)供试品溶液的制备:取小活络丸一丸，剪碎，加硅藻土，研匀，加甲醇，超声处理，滤过，取滤液作为供试品溶液； (3)进行筛查测定:分别吸取对照品溶液A，供试品溶液，点样于同一块硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸作为展开剂上行展开，取出，晾干，分别置紫外光灯254nm和365nm下观察薄层色谱，然后再喷上10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱；若上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性，检出了 5种化学药品是醋酸泼尼松、醋酸地塞米松、吲哚美辛、萘普生和双氯芬酸钠； 另，分别吸取对照品溶液B，供试品溶液，点样于同一块硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液作为展开剂上行展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下观察薄层色谱，再喷以10%硫酸乙醇溶液，并置于105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再置日光下观察薄层色谱；若上述二种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处有相同颜色的荧光淬灭斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性，又检出了 5种化学药品是泼尼松龙、氢化可的松、泼尼松、曲安奈德和醋酸氢化可的松； 再分别吸取对照品溶液C，供试品溶液，点样于同一块硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇作为展开剂上行展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下观察薄层色谱，再喷以10%硫酸乙醇溶液，并置于`105°C烘箱中恒温加热至薄层板上的斑点显色清晰，再分别置日光及紫外光灯365nm下观察薄层色谱；若上述三种观察方式的色谱中，与对照品相同比移值处有相同颜色的荧光淬灭斑点、荧光斑点或斑点同时出现，则可判定样品结果为阳性，再检出了 5种化学药品是对乙酰氨基酚、地塞米松、醋酸可的松、醋酸曲安奈德和保泰松。
2.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述展开剂正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸的体积比为15: 5:1。
3.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述展开剂三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液的体积比为18: 6: 2: 0.1。
4.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述展开剂正己烷-乙酸乙酯-甲醇的体积比为32: 18: 5。
5.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述硅藻土重量为2g。
6.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述权利要求1中的(2)的甲醇体积为 IOmlo
7.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述各对照品溶液的点样体积为Iμ I。
8.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述供试品溶液的点样体积为5μ I。
9.如权利要求1所述的快速筛查方法，其特征是上述超声处理的条件为30分钟，功率250W，频率 50kHz。`
【文档编号】G01N30/90GK103760294SQ201410042620
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2014年1月28日 优先权日:2014年1月28日
【发明者】张春辉, 吴爱英, 李新荣, 楚敏 申请人:青岛市药品检验所