一种番茄花粉活力的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种番茄花粉活力的测定方法，属于植物花粉活力研究【技术领域】。本发明是在现有番茄花粉培养基离体检验法基础上的改进。本发明方法包括培养基的处理、培养基分装、番茄花朵合理采集时期的确定、花药筒的剥离、花粉的播种、及花粉活力的测定法。本发明方法的有益效果在于：方法步骤简易，试验所需为实验室常规的药品和工具，而且能够有效避免因取花时机不科学和未能全面考察整朵花粉对番茄花粉真正萌发率造成的影响；参考多种肉眼可以识别的番茄花的表型来判断花粉是否已经生理成熟，避免了因采集的花粉成熟度不同而造成的误差，测定结果科学、准确、快速。
【专利说明】一种番茄花粉活力的测定方法
【技术领域】:
[0001]本发明涉及一种番茄花粉活力的测定方法，属于植物花粉活力研究【技术领域】。
技术背景:
[0002]番茄作为世界上重要的园艺作物，在我国蔬菜生产和供应中占有举足轻重的地位。番茄营养丰富，用处广泛，既可炒食做蔬菜，也可生食做水果，另外，番茄还是一种保健食品。因此，番茄对改善人们的生活质量，提高健康水平，促进农民增收，增加社会经济效益及调整农业产业结构具有重要意义。番茄具有明显的杂种优势，生产中使用的番茄种子绝大多数为杂种一代。番茄为两性花，属自花授粉作物，花粉活力易受内部和外界多种因素的影响。如何鉴定、收集高纯度和高生活力的花粉对保证杂交种子的产量和质量具有至关重要的作用。植物花粉活力的检测方法主要有形态检验法、染色法、培养基发芽检验法等。形态学观察法简单省工，但有些花粉形态正常，但是已经失去活力；染色法在染色时也会有误差，在显微镜下不易分辨；培养基花粉离体发芽检验法是普遍使用的方法，检验效果最为理想。测定番茄花粉活力最常用的方法是培养基离体检验法，具体的操作是先在载玻片的平面或凹面滴加液体或固体培养基，之后将番茄的花粉撒播在培养基上，盖上盖玻片，保温保湿一段时间，显微镜下观察花粉萌发情况。由于载玻片上的培养基表面积太小，容易脱水干枯，所以在花粉的培养过程中还要注意保湿，操作较为繁琐。而且培养基上只能播种一朵花中的部分花粉，不能科学、一致地反应一整朵花中所有花粉粒的活力。
[0003]目前，关于番茄花粉活力鉴定方法研究已有报道。但经文献检索，未发现与本
【发明内容】
相同文献的公开报道。
【发明内容】
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[0004]本发明的目的在于提供一种科学、准确、快速测定番茄花粉活力的方法。
[0005]本发明是在现有番茄花粉培养基离体检验法基础上的改进。本发明的具体步骤如下:
[0006]a.培养基的处理:将按常规方法配置的培养基用电炉或微波炉加热使之完全溶解，调节pH为5.5，分装培养基至50ml组培瓶中，121°C、20min高压蒸汽灭菌备用；
[0007]b.培养基分装:将经a步骤处理的培养基按每个60mm培养皿分装4ml培养基，一个培养皿用于测定一朵花的花粉活力；
[0008]c.番茄花朵合理采集时期的确定:番茄花的采收时间为晴天早上或阴天中午、番茄花上的露水已干时；采收番茄花的条件为:当天开放，花瓣展开角度180°，花瓣颜色鲜黄，药筒顶端淡黄色，药筒金黄且饱满、膨大；
[0009]d.花药筒的剥离:用左手拇指、食指和中指夹住药筒，右手食指和拇指捏住花瓣和萼片，将它们一一摘除；之后右手食指和拇指夹持花柄，左手将药筒从花柄上拔出；
[0010]e.花粉的播种:右手捏住一把尖头镊子，将镊子的尖端插入药筒基部，放松对镊子挟持力，把药筒从一侧撑开，然后换一把圆头镊子，右手食指和拇指夹住展开药筒的基部，左手捏住药筒顶部，将花药向上下折翻几下，之后换左手食指和拇指握住圆头镊子，夹住展开的药筒的基部，将药筒放在装有培养基的培养皿上方，右手食指和拇指夹住尖头镊子，敲打夹有花药的镊子，同时在培养皿上方匀速平移，使花粉粒均匀的铺满培养基表面；
[0011]f.花粉活力的测定:将播种过花粉的培养皿放入28°C培养箱，2h后放在光学显微镜下观察，统计花粉萌发率，每个培养皿随机选取5个视野，计算花粉萌发率的平均值及标准偏差。
[0012]本发明方法所需药品和工具为常规的市购品。
[0013]本发明方法的有益效果在于:方法步骤简易，试验所需为实验室常规的药品和工具，而且能够有效避免因取花时机不科学和未能全面考察整朵花粉对番茄花粉真正萌发率造成的影响；参考多种肉眼可以识别的番茄花的表型来判断花粉是否已经生理成熟，避免了因采集的花粉成熟度不同而造成的误差，测定结果科学、准确、快速。
【具体实施方式】:
[0014]本发明方法的具体测定步骤同
【发明内容】
部分的描述。实施例所需药品和工具为常规的市购品。
[0015]实施例:5#番茄自交系花粉活力的测定
[0016]5#番茄自交系为本课题组经多年自交选育的纯系。本试验选取3株生长势一致，处于盛花期的5#番茄自交系，从2013年10月I日开始取花，每隔一天取花一次，每次每株取花3朵，共取花5次，时间持续到2013年10月9日，被采花朵需满足c步骤中的各项标准，三株番茄每次共取花9朵，每朵花需4ml培养基，共需准备36ml培养基重新融化，分装于9个60mm培养皿中。花药的剥离和花粉的播种同步骤d和步骤e。花粉活力的测定同步骤f，即:将放入28°C培养箱，2h后的培养皿放在10倍光学显微镜下观察，统计花粉萌发率，每个培养皿随机选取5个视野，计算花粉萌发率的平均值及标准偏差，结果见表1。
[0017]表1:5 #番茄自交系花粉萌发率的平均值及标准偏差
[0018]
【权利要求】
1.一种番茄花粉活力的测定方法，其特征在于该方法的步骤如下: a.培养基的处理:将配置好的培养基用电炉或微波炉加热使之完全溶解，调节PH为5.5，分装培养基至50ml组培瓶中，12rC、20min高压蒸汽灭菌备用； b.培养基分装:将经a步骤处理的培养基按每个60mm培养皿分装4ml培养基，一个培养皿用于测定一朵花的花粉活力； c.番茄花朵合理采集时期的确定:番茄花的采收时间为晴天早上或阴天中午、番茄花上的露水已干时；采收番茄花的条件为:当天开放，花瓣展开角度180°，花瓣颜色鲜黄，药筒顶端淡黄色，药筒金黄且饱满、膨大； d.花药筒的剥离:用左手拇指、食指和中指夹住药筒，右手食指和拇指捏住花瓣和萼片，将它们 摘除；之后右手食指和姆指夹持花柄，左手将药筒从花柄上拔出； e.花粉的播种:右手捏住一把尖头镊子，将镊子的尖端插入药筒基部，放松对镊子挟持力，把药筒从一侧撑开，然后换一把圆头镊子，右手食指和拇指夹住展开药筒的基部，左手捏住药筒顶部，将花药向上下折翻几下，之后换左手食指和拇指握住圆头镊子，夹住展开的药筒的基部，将药筒放在装有培养基的培养皿上方，右手食指和拇指夹住尖头镊子，敲打夹有花药的镊子，同时在培养皿上方匀速平移，使花粉粒均匀的铺满培养基表面； f.花粉活力的测定:将播种过花粉的培养皿放入28°C培养箱，2h后放在光学显微镜下观察，统计花粉萌发率，每个培养皿随机选取5个视野，计算花粉萌发率的平均值及标准偏差。
【文档编号】G01N21/84GK103983644SQ201410084015
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年3月10日 优先权日:2014年3月10日
【发明者】朱海山, 赵凯, 张宏, 杨正安, 邓明华, 王梓然, 左志梅 申请人:云南农业大学