一种含有兔耳草制剂的含量检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种含兔耳草制剂的含量检测方法，通过脱脂处理、水饱和正丁醇提取、大孔树脂去杂浓缩等步骤得到供试品溶液，并进一步采用不同配比的甲醇和0.1%的磷酸为流动相进行梯度洗脱，对其中的松果菊苷予以分离检测，操作较简便，专属性强，干扰较小，分离度高，在一定浓度范围内线性较好，可用于含兔耳草制剂的含量检测。
【专利说明】一种含有兔耳草制剂的含量检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种制剂的含量检测方法，特别涉及一种含有兔耳草的制剂的含量检测方法。
【背景技术】
[0002]兔耳草为玄参科植物短管兔耳草Lagotis brevituba Maxim.或全缘兔耳草L.1ntegraff.Smith.的干燥全草。夏秋花盛期采收，除去杂质，洗净，阴干。本品为藏药制剂中常用药材，具有清热解毒、行血调经的功效。目前，兔耳草作为原料药材的成方制剂共有20多个,如二十五味大汤丸，二十五味大汤散，二十五味余甘子丸，二十五味余甘子散，二十五味竺黄散，二十五味獐牙菜散，二十五味肺病丸，二十五味獐牙菜丸，十味诃子汤散，八味主药散，八味獐牙菜丸，八味獐牙菜散，九味青鹏散，九味竺黄散，九味獐牙菜丸，三十五味沉香丸，大月晶丸，智托洁白丸等等。
[0003]兔耳草现行标准为藏药部颁标准，标准号:WS3-BC-0063-95。该标准只简单叙述了兔耳草的形状和鉴别。文章《藏药短管兔耳草中松果菊苷和麦角留苷的RP-HPLC分析》介绍了一种以甲醇-1%冰醋酸溶液(28:72，V:V)为流动相，同时测定短管兔耳草中松果菊苷和麦角甾的方法。药典2010年版记载了洪连(即兔耳草)以乙腈-甲醇-1%醋酸(10:15:75)为流动相的含量检测方法。但以上方法只适用于药材的含量检测，在用于含有兔耳草制剂的含量检测时，由于其他药味干扰严重，同时主要检测成分含量较少，均不能达到HPLC法含量检测要求。故现阶段急需一种具有通用性的含兔耳草制剂的含量检测方法。
【发明内容】
[0004]为克服现有技术的不足，本发明提供了一种含有兔耳草制剂的含量检测方法。
[0005]术语说明:
[0006]本发明所述的梯度洗脱方式为根据时间梯度性地改变A、B两种洗脱液的比例，以期将层析柱上不同的组分在合理的时间内洗脱出来的方法。
[0007]安儿宁颗粒、藏降脂胶囊、八味獐牙菜丸、九味青鹏散、九味竺黄散、智托洁白丸均为国家中成药标准汇编(中成药地方标准上升国家标准部分)记载的药品名称。标准编号如下:安儿宁颗粒:WS-10640(ZD-0640)-2002 ;藏降脂胶囊:WS_10864(ZD-0864)-2002 ;八味獐牙菜丸:WS3-BC-0241-95 ;九味青鹏散:WS3-BC-0247_95 ;九味竺黄散:WS3-BC-0248_95 ；智托洁白丸:WS3-BC-0334-95。
[0008]本发明的技术方案如下:
[0009]一种含有兔耳草制剂的含量检测方法，包括如下步骤:
[0010]A、色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长330-340nm ;理论板数按松果菊苷峰计算应不低于4000 ；
[0011]B、流动相:以甲醇为流动相A，以体积百分比0.1%的磷酸为流动相B ;按照梯度洗脱方式进行洗脱=Omin — 25min — 40min,上述时间段内，流动相A:20% — 35% — 60% ;流动相 B:80% — 65% — 40% ；
[0012]C、对照品溶液:取松果菊苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得；
[0013]D、供试品溶液:取相当于兔耳草0.2-lg的含有兔耳草制剂样品粉末，精密称定，滤纸包好，石油醚索氏提取法处理2-3h以除去脂溶性成分，处理后的样品粉末转移至棕色量瓶中，加入水饱和正丁醇40-60ml，浸泡20-40分钟，超声处理30-40分钟，放冷，过滤，滤液蒸干后加IOOml水溶解，注入柱体积IOOml的DlOl大孔树脂柱，以200_300ml的水冲洗，弃去冲洗液,再以体积百分比5%甲醇80-100ml冲洗，弃去冲洗液，加体积百分比80%甲醇IOOml冲洗，所得冲洗液在30-40°C蒸干，残渣加IOml体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得；
[0014]E、测定法:取对照品溶液及供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算松果菊苷的含量。
[0015]本发明优选的，一种含有兔耳草制剂的含量检测方法，包括如下步骤:
[0016]Α、色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长334nm ；理论板数按松果菊苷峰计算应不低于4000 ；
[0017]B、流动相:以甲醇为流动相A，以体积百分比0.1%的磷酸为流动相B ;按照梯度洗脱方式进行洗脱=Omin — 25min — 40min,上述时间段内，流动相A:20% — 35% — 60% ;流动相 B:80% — 65% — 40% ；
[0018]C、对照品溶液:取松果菊苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得；
[0019]D、供试品溶液:取相当于兔耳草0.5g的含有兔耳草制剂样品粉末，精密称定，滤纸包好，石油醚索氏提取法处理3h以除去脂溶性成分，处理后的样品粉末转移至棕色量瓶中，加入水饱和正丁醇50ml，浸泡30分钟，超声处理40分钟，放冷，过滤，滤液蒸干后加IOOml水溶解，注入柱体积IOOml的DlOl大孔树脂柱，以300ml的水冲洗，再以体积百分比5%甲醇IOOml冲洗，弃去冲洗液，加体积百分比80%甲醇IOOml冲洗，所得冲洗液在30_40°C蒸干，残渣加IOml体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得；
[0020]E、测定法:取对照品溶液及供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算松果菊苷的含量。
[0021]本发明所述的兔耳草为短管兔耳草或全缘兔耳草，优选短管兔耳草。
[0022]本发明所述的含有兔耳草的制剂是指含有兔耳草的原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括胶囊剂、丸剂、微丸、滴丸、片剂、软胶囊、颗粒、口服液。
[0023]本发明优选的含有兔耳草的制剂包括安儿宁颗粒、藏降脂胶囊、八味獐牙菜丸、九味青鹏散、九味竺黄散或智托洁白丸。更为优选安儿宁颗粒或藏降脂胶囊。
[0024]有益效果
[0025]与现有技术相比，本发明的优点如下:
[0026]现有技术中无直接用于含兔耳草制剂的含量检测方法，仅有针对兔耳草药材的检测方法，而该方法无法用于复方制剂的检测。本发明的检测方法通过脱脂处理、水饱和正丁醇提取、大孔树脂去杂浓缩等步骤得到供试品溶液，并进一步采用不同配比的甲醇和体积百分比0.1%的磷酸为流动相进行梯度洗脱，对其中的松果菊苷予以分离检测，操作较简便，专属性强，干扰较小，分离度高，在一定浓度范围内线性较好，可用于含兔耳草制剂的含量检测。
【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1是安儿宁颗粒样品溶液高效液相色谱图；
[0028]图2是松果菊苷对照品溶液高效液相色谱图；
[0029]图3是松果菊苷线性关系图；
[0030]其中，图1、图2的横坐标是时间，单位:分钟(分钟min);纵坐标是电压，单位:伏特(Volts)。
【具体实施方式】
[0031 ] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0032]实验例1:安儿宁颗粒中短管兔耳草的含量检测
[0033]1.仪器、试药和供试样品
[0034]仪器:Agilentl260Infinity型高效液相色谱仪；岛津AUW220D电子天平。
[0035]对照品:松果菊苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111670-200503)。
[0036]样品:安儿宁颗粒(青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号分别为:20121110、20121114、201211 19)。
[0037]2.检测波长的选择
[0038]取松果菊苷对照品溶液，于190~500nm波长范围内进行扫描,在334nm波长处有最大吸收，故根据紫外吸收图谱选定334nm为检测波长。
[0039]3.流动相选择
[0040]研究发现，以甲醇为流动相A，以体积百分比0.1%的磷酸为流动相B，按表1方式进行洗脱，松果菊苷能达到很好的色谱分离效果。
[0041]表1洗脱方式I
[0042]
【权利要求】
1.一种含有兔耳草制剂的含量检测方法，特征在于，包括如下步骤: A、色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长330-340nm；理论板数按松果菊苷峰计算应不低于4000 ； B、流动相:以甲醇为流动相A，以体积百分比0.1%的磷酸为流动相B ;按照梯度洗脱方式进行洗脱:0min — 25min — 40min,上述时间段内，流动相A:20% — 35% — 60% ;流动相B:80% — 65% — 40% ； C、对照品溶液:取松果菊苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得； D、供试品溶液:取相当于兔耳草0.2-lg的含有兔耳草的制剂样品粉末，精密称定，滤纸包好，石油醚索氏提取法处理2-3h以除去脂溶性成分，处理后的样品粉末转移至棕色量瓶中，加入水饱和正丁醇40-60ml，浸泡20-40分钟，超声处理30-40分钟，放冷，过滤，滤液蒸干后加100ml水溶解，注入柱体积100ml的DlOl大孔树脂柱，以200_300ml的水冲洗，弃去冲洗液,再以体积百分比5%甲醇80-100ml冲洗，弃去冲洗液，加体积百分比80%甲醇100ml冲洗，所得冲洗液在30-40°C蒸干，残渣加IOml体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得； E、测定法:取对照品溶液及供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算松果菊苷的含量。
2.根据权利要求1所 述的含量检测方法，特征在于，检测波长为334nm。
3.根据权利要求1或2所述的含量检测方法，特征在于，供试品溶液由如下方法制备:取相当于兔耳草0.5g的含有兔耳草的制剂样品粉末，精密称定，滤纸包好，石油醚索氏提取法处理3h以除去脂溶性成分，处理后的样品粉末转移至棕色量瓶中，加入水饱和正丁醇40-60ml，浸泡30分钟，超声处理40分钟，放冷，过滤，滤液蒸干后加100ml水溶解，注入柱体积100ml的DlOl大孔树脂柱，以300ml的水冲洗，再以体积百分比5%甲醇100ml冲洗，弃去冲洗液，加体积百分比80%甲醇100ml冲洗，所得冲洗液在30-40°C蒸干，残渣加IOml体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得。
4.根据权利要求1或3所述的含量检测方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制剂是指含有兔耳草的原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床可接受的任何一种剂型，包括胶囊剂、丸剂、微丸、滴丸、片剂、软胶囊、颗粒、口服液。
5.根据权利要求4所述的含量检测方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制剂为安儿宁颗粒、藏降脂胶囊、八味獐牙菜丸、九味青鹏散、九味竺黄散或智托洁白丸。
6.根据权利要求1或3所述的含量检测方法，特征在于，所述的兔耳草为短管兔耳草。
7.根据权利要求5所述的含量检测方法，特征在于，所述的含有兔耳草的制剂为安儿宁颗粒或藏降脂胶囊。
8.根据权利要求1所述的含量检测方法，特征在于，包括如下步骤: A、色谱条件与系统适用性:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长334nm;理论板数按松果菊苷峰计算应不低于4000 ； B、流动相:以甲醇为流动相A，以体积百分比0.1%的磷酸为流动相B ;按照梯度洗脱方式进行洗脱:0min — 25min — 40min,上述时间段内，流动相A:20% — 35% — 60% ;流动相B:80% — 65% — 40% ；C、对照品溶液:取松果菊苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸溶液制成每Iml中含有0.25mg的溶液，即得； D、供试品溶液:取含有相当于短管兔耳草0.5g的安儿宁颗粒粉末Sg，精密称定，滤纸包好，石油醚索氏提取法处理3h以除去脂溶性成分，处理后的样品粉末转移至棕色量瓶中，加入水饱和正丁醇50ml，浸泡30分钟，超声处理40分钟，放冷，过滤，滤液蒸干后加100ml水溶解，注入柱体积100ml的DlOl大孔树脂柱，以300ml的水冲洗，弃去冲洗液,再以体积百分比5%甲醇100ml冲洗，弃去冲洗液，加体积百分比80%甲醇100ml冲洗，所得冲洗液在30-40°C蒸干，残渣加IOml体积比20:80的甲醇-0.1%磷酸混合溶液溶解，过滤，取续滤液，即得； E、测定法:取对照品溶液及供试品溶液各10μ 1，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算松果菊苷的`含量。
【文档编号】G01N30/02GK103822993SQ201410096039
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2014年3月14日 优先权日:2014年3月14日
【发明者】孙山, 刘军田, 任松鹏, 孙绪丁, 魏爱云 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司