一种半定量检测奶牛血钙的试剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种半定量检测奶牛血钙的试剂，它包括独立包装的试剂1、试剂2、试剂3；其中，试剂1是由体积百分比为20％的三乙醇胺10μL以及质量百分数为2％的硫化钠溶液2.5μL组成；试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液10μL以及浓度为2mol／L的氢氧化钠10μL组成；试剂3是由浓度为2.00-2.10mmol／L，体积为150μL的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.00-2.10mmol／L，体积为150μL的钙红以及浓度为2.00-2.10mmol／L，体积为300μL的柠檬黄组成。本发明试剂不需要专用的仪器设备，可以直接进行使用；同时，也克服了兽医临床上所存在的困难；同时本发明试剂不需要专门的技术人员便可操作，通过肉眼观察即可，普通工人也可使用。
【专利说明】一种半定量检测奶牛血耗的试剂
【技术领域】
[0001]本发明涉及的是一种半定量检测奶牛血钙的试剂。
【背景技术】
[0002]钙离子是机体内重要的阳离子，血液中的钙离子具有的重要生理活性，作为体内的常量矿物质元素，他不仅参与血液的凝固、神经冲动的传导、肌肉的收缩、致密毛细血管内皮的形成和维持细胞膜正常的通透性，而且还是许多酶的激活物，能促进胰岛素、儿茶酚胺、肾上腺皮质固醇以及唾液的分泌。正常血钙范围是受机体内维生素D3、甲状旁腺素和降钙素等构成的稳定的反馈系统相互作用来维持的。当钙离子的含量发生波动时相应的生理功能就会发生改变，会导致许多疾病。如当动物机体的血清钙含量下降时，会导致纤维素性骨营养不良、母牛趴窝不起综合征、佝偻病、骨软症、生产瘫痪等。而且奶牛难产、产后酮病、乳房炎、真胃移位、胎衣滞留发病率明显增加，造成的经济损失极为严重。据美国农业部(USDA) 2007年公布的数据显示，因低血钙直接导致的生产瘫痪已经成为影响奶牛健康的第五大类疾病,成母牛发病率为4.9%，整个泌乳期产奶量会降低1200-2000kg，造成4000-7000元的经济损失，且有13%的奶牛会死亡。因低血钙导致的其他疾病更是给美国奶牛养殖业造成了巨大的经济损失。临床常用的补钙方法有口服和输液两种。
[0003]目前检测血清钙离子较成熟的方法主要有:钙离子选择性微电极法、放射示踪法、核磁共振法、酶法分析等。虽然这些方法均属于定量的方法，但这些方法操作复杂，成本较高且需要专门的仪器设备和技术人员，很难在基层兽医临床上推广使用。
[0004]因此，在奶牛生产实践中，迫切需要一种快速、简便、低成本的血钙检测试剂和方法，本专利正是针对这个需求发明的。
【发明内容】
[0005]本发明的发明目的是针对上述问题提供一种半定量检测奶牛血钙的试剂，用于解决目前现用的定量检测血钙方法存在操作复杂、成本昂贵、且需要专门技术人员才能完成的问题。
[0006]本发明通过以下技术方案来实现:一种半定量检测奶牛血钙的试剂，包括独立包装的试剂1、试剂2、试剂3 ;其中所述的试剂I是由体积百分比为20%的三乙醇胺IOyL以及质量百分数为2%的硫化钠溶液2.5 μ L组成；试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液IOyL以及浓度为2mol / L的氢氧化钠10 μ L组成；试剂3是由浓度为
2.00-2.1Ommol / L，体积为150 μ L的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.00-2.1Ommol /L，体积为150 μ L的钙红以及浓度为2.00-2.1Ommol / L，体积为300 μ L的柠檬黄组成。
[0007]采用上述技术方案的积极效果:
[0008]1、本发明试剂不需要专用的仪器设备，可以直接进行使用，减少了专用仪器设备的费用，同时，也克服了兽医临床上所存在的困难；
[0009]2、本发明试剂不需要专门的技术人员便可操作，通过肉眼观察即可，普通工人也可使用；
[0010]3、本发明试剂成本低廉、操作方便、使用简捷，适合在兽医临床上推广使用。【具体实施方式】
[0011]下面对本发明作进一步说明:一种半定量检测奶牛血钙的试剂，包括独立包装的试剂1、试剂2、试剂3。其中所述的试剂I是由体积百分比为20%的三乙醇胺10 μ L以及质量百分数为2 %的硫化钠溶液2.5 μ L组成。试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液1(^1^以及浓度为211101 / L的氢氧化钠10 μ L组成。试剂3是由浓度为2.00-2.1Ommol /L，体积为150 μ L的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.00-2.1Ommol / L，体积为150 μ L的钙红以及浓度为2.00-2.1Ommol / L，体积为300 μ L的柠檬黄组成。
[0012]作为本发明的进一步改进，一种半定量检测奶牛血钙的试剂包括独立包装的试剂
1、试剂2、试剂3。其中所述的试剂I是由体积百分比为20%的三乙醇胺10 μ L以及质量百分数为2%的硫化钠溶液2.5 μ L组成。试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液10 μ L以及浓度为2mol / L的氢氧化钠10 μ L组成。试剂3是由浓度为2.05mmol / L，体积为150 μ L的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.05mmol / L，体积为150 μ L的钙红以及浓度为2.05mmol / L，体积为300 μ L的柠檬黄组成。
[0013]具体使用方式如下:
[0014]首先，采取待检奶牛血清300 μ L。
[0015]然后，将血清中加入12.5μ L的试剂I，20 μ L的试剂2。
[0016]最后，再加入600 μ L的试剂3。
[0017]观察颜色变化，由绿色变成橙色时，为阴性，表明不缺钙；颜色仍为绿色时，为阳性，表明缺钙。
[0018]反应原理:在碱性环境中，乙二胺四乙酸二钠盐，以下简称为EDTA，EDTA与钙红均可以和血清中的钙离子结合，但是EDTA与钙离子结合常数远大于与钙红的结合常数，柠檬黄为惰性染料不与钙离子结合，EDTA本身没有颜色，与钙离子结合后也没有颜色。钙红本身为紫色，与柠檬黄共同作用变为绿色，当钙红与钙离子结合后呈现酒红色，与柠檬黄作用变为橙色。另外血清中还存在其他金属阳离子也可以与EDTA结合，会干扰钙离子的测定。所以应首先加入试剂I掩蔽血清中的亚铁离子、铜离子、钴离子和锌离子。再加入试剂2形成碱性环境的同时也使镁离子形成白色沉淀。最后在反应管中加入绿色的试剂3。实际以EDTA、钙红和柠檬黄的浓度均为2.05mmol / L为例进行描述，具体描述如下:
[0019]选取大庆市周边3家奶牛养殖场对围产期奶牛进行检测，同时运用半自动生化分析仪进行对比(2.05-2.69mmol / L)。统计如下:
[0020]牛场一对比检测统计表
[0021]
【权利要求】
1.一种半定量检测奶牛血钙的试剂，其特征在于:该试剂包括独立包装的试剂1、试剂2、试剂3 ;其中所述的试剂I是由体积百分比为20%的三乙醇胺10 μ L以及质量百分数为2%的硫化钠溶液2.5 μ L组成；试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液10 μ L以及浓度为2mol / L的氢氧化钠10 μ L组成；试剂3是由浓度为2.00-2.1Ommol / L，体积为150 μ L的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.00-2.1Ommol / L，体积为150 μ L的钙红以及浓度为2.00-2.1OmmOl / L，体积为300 μ L的柠檬黄组成。
2.根据权利要求1所述的一种半定量检测奶牛血钙的试剂，其特征在于:该试剂包括独立包装的试剂1、试剂2、试剂3 ;其中所述的试剂I是由体积百分比为20%的三乙醇胺10 μ L以及质量百分数为2%的硫化钠溶液2.5 μ L组成。试剂2是由pH为10的氨水-氯化铵混合缓冲溶液10 μ L以及浓度为2mol / L的氢氧化钠10 μ L组成。试剂3是由浓度为2.05mmol / L，体积为150 μ L的乙二胺四乙酸二钠盐以及浓度为2.05mmol / L，体积150 μ L的钙红以及浓度为2.05mmol / L，体积为300 μ L的柠檬黄组成。
【文档编号】G01N21/78GK103837531SQ201410111461
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2014年3月25日 优先权日:2014年3月25日
【发明者】武瑞, 贺显晶, 宋国希, 郝丹丹, 王建发, 赵雅婧, 赵微微, 陈允, 王翠媛, 曲艳鹏, 于德斌, 梁建斌 申请人:黑龙江八一农垦大学