一种高效的maldi板上的糖基化抑制剂筛选方法
【专利摘要】本发明是一种MALDI板上反应的糖基化抑制剂的高效筛选方法。它是选取任意多肽与还原糖以一定比例的混合体系为作用底物，加入不同的待测物后直接点样在MALDI板上，干热条件下，烘箱60℃，反应4h，然后加入基质（α-Cyano-4-hydroxycinnamicacid）直接采用MALDI-TOF-MS进行分析评价。通过计算DSP，评价指标可为DSP，抑制率以及IC50。从而确定待测物的糖基化抑制性。采用本发明可以定性、定量的对待测物的抑制特性及抑制程度进行测定。此方法具有快速、高效、灵敏、分辨率高以及样品量需求小的优点。
【专利说明】—种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法。尤其是应用在功能性食品、生物医药行业等。
【背景技术】
[0002]美拉德反应在食品领域里起着非常重要的作用。然而，它能够改善食品色、香、味及功能性质，但是也会带来一些不利影响，如降低食品的消化性和营养性；也会产生具有危害作用的物质(丙烯酰胺、AGEs等)导致衰老、糖尿病、癌症等。因此，对美拉德反应的抑制剂的研究越来越引起重视。尤其是对新型的天然的具有美拉德反应抑制效果的物质的筛选更为关注。因而，急需一种高效、快速、简单、可信的美拉德反应抑制剂的筛选方法。目前，现有的有效的糖基化抑制剂筛选方法主要有免疫分析法(ELISA)和荧光光谱分析法等。但是这些方法低效、耗时、耗能、费用高。
【发明内容】
[0003]为了克服现有的分析方法的耗时、耗能等不足，本发明提供一种新型的筛选糖基化抑制剂的分析方法，该方法能够给快速的筛选出是否具有糖基化抑制效果，而且能够定量的比较不同抑制剂的抑制性。
[0004]本发明解决其 技术问题所采用的技术方案是:采用MALDI板上反应，高效筛选鉴定糖基化抑制剂。本方法选取具有任意(具有较多游离氨基的更好)多肽与还原糖(葡萄糖、半乳糖等)的一定比例的Tris-HCl混合体系为作用底物，加入不同的抑制剂后直接在MALDI板上，干热条件下，烘箱5(T65 °C，反应1~4 h，然后加入基质(a -Cyano-4-hydroxycinnamic acid 等)直接米用 MALD1-TOF-MS 进行检测分析评价。通过计算DSP，评价指标可为DSP，抑制率以及IC5(I。从而确定待测物的糖基化抑制性。
[0005]每分子肽的平均取代度(DSP)按以下公式计算:
【权利要求】
1.一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法，其特征是:采用任何肽与还原糖一定的比例混合的物质为反应底物，并以Tris-HCl缓冲液缓冲；将反应底物与一定浓度或一系列浓度的待测物混匀，点在MALDI板上，直接对MALDI板进行加热，在MALDI板上进行Maillard反应，然后通过MALD1-TOF-MS进行检测；采用MALD1-TOF质谱法，通过对肽的DSP计算，可以得到抑制率及IC5tl，筛选出具有糖基化抑制性的待测物。
2.根据权利要求1所述的一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法，其特征是所述加热方式为:空气挥发干后，采用烘箱50-60 1:直接加热MALDI板h，进行糖基化反应孵育过程。
3.根据权利要求1所述的一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法，其特征是Tris-HCl缓冲液的pH为8.0。
4.根据权利要求1所述的一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法，其特征是反应底物为多肽。
5.根据权利要求1、2或3所述的一种高效的MALDI板上的糖基化抑制剂筛选方法，其特征是采用D SP，抑制率以及IC5tl多指标评价、筛选待测物的糖基化抑制性。
【文档编号】G01N27/62GK103983684SQ201410147152
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年4月14日 优先权日:2014年4月14日
【发明者】张秋婷, 涂宗财, 肖辉, 黄小琴, 王辉, 樊亮亮, 包中宇 申请人:南昌大学