一种检测新型睾酮兴奋剂的方法
【专利摘要】本发明涉及一种检测新型睾酮兴奋剂的方法，包括：取尿样，在恒温水浴中酶解，萃取雄酮，将雄酮分子中标记在碳3位上的13C除去，得到ANAD。用叔丁基甲醚溶解ANAD后进入同位素比质谱仪分析，得到ANAD的δ值。雄酮的δ值与ANAD的δ值的差值的绝对值如果大于1.2个δ值单位，则此样品为阳性。本方法可以用于竞技体育中兴奋剂的检测，简便易行，能够快速检测大量样品，检测灵敏，准确性高。
【专利说明】一种检测新型睾酮兴奋剂的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种检测新型睾酮兴奋剂的方法，属于医学检测领域。
【背景技术】
[0002]睾酮(Testosterone)JljS:睾甾酮；睾丸甾酮；睾丸激素；17 β-Hydroxy-S-oxo-d-androstene-U β-ol-3-one, 分子式:C19H28O2,睾酮对照品δ值的平均值为-28%。，结构
如下:
[0003]
【权利要求】
1.一种检测新型睾酮兴奋剂的方法，其特征在于，包括: 取尿样20mL，加入ImL pH = 7.0的磷酸盐缓冲液和100 μ L β -葡萄糖醛酸甙酶溶液混匀，在55°C恒温水浴中酶解3小时，取出，加入IOmL叔丁基甲醚振荡萃取，离心，吸取上层有机溶液，在65°C加热下用氮气吹干，加入50 μ L100%甲醇溶剂溶解残渣，转入样品瓶中，封盖，以HPLC纯化，收集13-14分钟含有雄酮的流出液，在60°C加热的情况下，用氮气吹干，用IOOyLlOO^甲醇溶解雄酮，备用； 取5yL上述制备的雄酮，进入同位素比质谱仪分析其同位素比，得到雄酮的δ值； 取95 μ L上述制备的雄酮，氮气吹干，加入15 μ L冰醋酸及50 μ L氧化剂，在60°C保持.2小时，反应液用100 μ L CH2Cl2提取，提取液氮气吹干后，加入40mg无水醋酸钠及50 μ L醋酐在120°C保持2小时，氮气吹干，加入水分散残渣，用50 μ L CH2Cl2提取，有机层在60°C氮气吹干得到ANAD，用50μ L叔丁基甲醚溶解ANAD后进入同位素比质谱仪分析，得到ANAD的δ值，雄酮的δ值与ANAD的δ值的差值的绝对值如果大于1.2个δ值单位，则此样品为阳性。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC纯化的步骤为进样量为50μ L，色谱柱为ZORBAX SB-C18,规格为4.6mmX250mmX5 μ m,流动相为甲醇-水系统，洗脱起始流动相比例为:40%甲醇-60%水，等梯度洗脱，于20分钟内完成至流动相为100%甲醇，流速.0.QmT ,/mi η η
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氧化剂由14g的Cr03、120mL的H2O和40mL 的 70% H2SO4 组成。
【文档编号】G01N30/02GK104007197SQ201410222016
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年5月23日 优先权日:2014年5月23日
【发明者】王静竹 申请人:王静竹