一种荧光检测三价铁离子的方法
【专利摘要】本发明提供了一种基于香豆素衍生物(分子式：C14H5NO3)定量检测三价铁离子的荧光检测方法，香豆素衍生物7-二乙氨基香豆素-4-甲醛根据文献合成。具体是在pH为7.0的HEPES缓冲溶液中，利用Fe3+与7-二乙氨基香豆素-4-甲醛结构中两个羰基进行配位，发生荧光淬灭，实现三价铁离子的检测。该检测方法对三价铁离子显示了高的灵敏性和选择性，检测试剂廉价、过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。此外，共焦荧光图像进一步表明该探针可以用来识别活细胞内的Fe3+。
【专利说明】—种荧光检测三价铁罔子的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及三价铁离子的检测技术，具体属于一种以7-二乙氨基香豆素-4-甲醛为荧光试剂，快速、定量荧光检测三价铁离子的方法。
【背景技术】
[0002]铁元素是一种非常重要的微量元素，具有重要的生物学意义。例如铁元素是大脑中最丰富的过渡金属元素，大脑组织利用他作为酶的重要组成成分参与氧气的传递和代谢；铁元素也是许多金属蛋白不可缺少的组分；铁元素还是许多酶的催化剂参与有氧代谢和电子转移等等。另外，人体内的铁元素是构成血红蛋白，肌红蛋白的原料，而且还是维持人体正常生命活动最重要的一些酶的组分，与能量代谢关系密切。同时，铁离子的转运，储存以及平衡都与有机体紧密相关，铁离子的缺乏和过量都会导致各种各样的机体功能紊舌L。因此，准确检测铁离子对有效诊断某些疾病显得非常重要。在目前已知的检测铁离子的方法中，由于荧光分析法有快速响应和高灵敏度的特点，荧光探针被广泛研究。[0003]近几年来，人们开始关注设计合成对Fe3+具有特异性响应的荧光探针，并合成了几类有机荧光探针，具有代表性的主要有:香豆素类，罗丹明类，荧光素类，荧光染料B0DIPY，萘腙衍生物，本探针化合物与Fe3+作用后，荧光强度显著降低，其他一些常见金属阳离子几乎没有显著地荧光响应。因此本发明可以作为选择性检测生物体内Fe3+的荧光探针，也可用于荧光标记细胞内Fe3+，为临床医学中相关疾病的诊断提供帮助。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种定量检测三价铁离子的荧光检测方法，该方法灵敏度高、选择性好、廉价、方便。
[0005]本发明根据文献合成香豆素衍生物7- 二乙氨基香豆素-4-甲醒，并将此作为荧光试剂用于Fe3+的检测。7- 二乙氨基香豆素-4-甲醛的结构式及合成方法如下如下:
[0006]结构式:
[0007]
【权利要求】
1.香豆素衍生物7-二乙氨基香豆素-4-甲醛作为荧光试剂在检测三价铁离子中的应用。
2.一种荧光检测三价铁离子的方法:其特征在于，步骤为: (1)配制pH= 7.0浓度为IOmM的HEPES缓冲溶液，并用乙腈配制ImM的7- 二乙氨基香豆素-4-甲醛探针储备液； (2)按体积比1000:1将HEPES缓冲溶液和7-二乙氨基香豆素_4_甲醛探针储备液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，494nm处的荧光强度逐渐减弱； (3)用蒸馏水配制IOmM的Fe3+溶液，把2000μ L的HEPES缓冲溶液和2 μ L7- 二乙氨基香豆素-4-甲醛探针储备液加到荧光比色皿中，每隔IOs加入I μ L Fe3+进行荧光滴定实验，共加18 μ L，以Fe3+浓度为横坐标，以相对荧光强度Ftl-F为纵坐标绘制图，得到Fe3+浓度的工作曲线，线性回归方程为=AF = 0.7597C+1.8785，c的单位为10_6mol/L ； (4)将HEPES缓冲溶液2000μ L和7- 二乙氨基香豆素_4_甲醛探针储备液2 μ L加到干净的荧光比色皿中，用移液枪吸取V μ L待测样品溶液，加入到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度计上检测，将测得的荧光强度代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c =.2000 μ LXcX 10-6/νμ L,即可求得 Fe3+ 的浓度。
【文档编号】G01N21/64GK103983765SQ201410223124
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月23日 优先权日:2014年5月23日
【发明者】钞建宾, 刘瑜红, 张永斌, 张艳 申请人:山西大学