一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，所述的检测方法包括使用高效液相色谱法检测盐酸戊乙奎醚中副产物的含量，所述的副产物为1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇，包含以下步骤：制备供试品溶液，待用；制备对照品溶液，待用；测定三个步骤，在实际检测过程中，本方法的检测限可达0.16μg/ml，即可以检出盐酸戊乙奎醚原药液中高于0.008%的1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇，原理十分简单，其专属性、定量限与检测限、线性、精密度、准确度、溶液稳定性、耐用性等方面均经详细认证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
【专利说明】一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法
【技术领域】
[0001]本发明是一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，具体涉及盐酸戊乙奎醚原料药中副产物的定量检测方法，属于药物检测领域。
【背景技术】
[0002]盐酸戊乙奎醚是我国研制的具有自主知识产权的新药，其原料药的现有剂型主要为注射液，即盐酸戊乙奎醚注射液(长托宁)，具有选择性胆碱受体拮抗作用，不仅能有效避免阿托品产生的心动过速等不良反应，还具有药效长、不良反应少等优势，其适应症包括:用于麻醉前给药以抑制唾液腺和气道腺体分泌、用于有机磷毒物(农药)中毒急救治疗和中毒后期或胆碱酯酶(ChE)老化后维持阿托品化等。目前，该药已在麻醉前用药、有机磷农药中毒抢救、休克、呼吸系统疾病、心血管疾病及戒毒治疗等临床领域中开始应用，如:专利文献CN02134118.4披露的一种药物化合物及其组合物和在制药中的应用、专利文献CN200510088052.X披露的盐酸戊乙奎醚在制药中的应用以及专利文献CN200910058142.2披露的盐酸戊乙奎醚在制备治疗失血性休克疾病药物中的应用等。
[0003]现有情况是，随着我国对药品研发中杂质研究要求的日益严格和明确，尤其是对药品副产物、降解产物等的研究已进入了一个全新阶段的今天，药品在临床使用中是否会产生不良反应日益重要。当然，我们还清楚的知道，在实际临床领域中，药品在临床使用过程中产生的不良反应，除了与药品主成分的药理活性有关外，还与药品中存在的杂质有关系，在临床实验中，往往通过药品副产物的方式存在，因此，为不断提高盐酸戊乙奎醚注射液的安全性和有效性，本发明建立了一种能准确定量检测盐酸戊乙奎醚(如:盐酸戊乙奎醚原药液)中的副产物的方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，本检测方法是采用高效液相色谱法，用1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇作为对照品进行定位，对盐酸戊乙奎醚中1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇进行的定量检测，其专属性、定量限与检测限、线性、精密度、准确度、溶液稳定性、耐用性等方面均经详细认证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
[0005]本发明通过下述技术方案实现:一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，所述的检测方法包括使用高效液相色谱法检测盐酸戊乙奎醚中副产物的含量，所述的副产物为1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇，包含以下步骤:
A:制备供试品溶液:取盐酸戊乙奎醚50mg置于量瓶中，加流动相溶解并定容至25ml，摇匀，作为供试品溶液，待用；
B:制备对照品溶液:取1-环戍基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇对照品适量,用流动相配制成每Iml含2.0 μ g的溶液，作为对照品溶液，待用；
C:测定:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:主要由甲醇-水相或乙腈-水相组成；
流速:0.5 ?1.5ml/min ；
柱温:20?40°C ；
检测波长:208?216nm，
本方法检测限达0.16μ g/ml,即可以检出盐酸戊乙奎醚中高于0.008%的1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇，实用性强。
[0006]为更好的实现本发明，所述的流动相为:体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺，并用磷酸溶液调节所述流动相的pH值为4.0?6.0。
[0007]在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0008]在实际检测过程中，对于本发明采用的高效液相色谱法而言，其测定条件中各参数在进行适当调整后，也能准确的检测出盐酸戊乙奎醚中1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量，以上述情况为基准，我们可对流速进行调整，如下所示:
(I)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.5ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0009](2)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:0.5ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0010]对柱温进行调整，如下所示:
(I)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；流速:1.0ml/min ；
柱温:25°C ；
检测波长:210nm。
[0011](2)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；
检测波长:210nm。
[0012]对流动相的PH值进行调整，如下所示:
(I)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为4.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；
检测波长:210nm。
[0013](2)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为6.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；
检测波长:210nm。
[0014]对检测波长进行调整，如下所示:
(I)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:208nm。
[0015](2)在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ； 检测波长:216nm。
[0016]本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果:
(I)本发明是对盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的定量检测，原理十分简单，采用高效液相色谱法，用1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇作为对照品进行定位，其专属性、定量限与检测限、线性、精密度、准确度、溶液稳定性、耐用性等方面均经详细认证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
[0017](2)本发明实用性强，在实际检测过程中，其检测限可达0.16yg/ml，即可以检出盐酸戊乙奎醚中高于0.008%的1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量，检测过程简单、快捷。
[0018](3)本发明所述的高效液相色谱法，其测定条件所包含的范围均为有效值，即:在各参数范围内取任意值后，也能准确的检测出盐酸戊乙奎醚中1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量，在实际检测过程中，便于检测员对参数的调整和避免人工误差对检测结果产生的影响，适宜广泛推广使用。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1为本发明盐酸戊乙奎醚的化学式。
[0020]图2为本发明1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的化学式。
[0021]图3为本发明对照品溶液的液相色谱图。
[0022]图4为本发明供试品溶液的液相色谱图。
[0023]图5为本发明实施例10所得盐酸戊乙奎醚杂质1-苯基-1-环戊基-2-甲氧基乙醇的HPLC纯度图谱。
【具体实施方式】
[0024]下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
[0025]实施例1:
为不断的提高盐酸戊乙奎醚药品的安全性和有效性，本发明提出了一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，主要是对盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的定量检测，该方法经详细的方法学验证，具有良好的使用价值，其验证内容包括有:专属性、定量限与检测限、线性、精密度、准确度、溶液稳定性、耐用性等，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求。在实际检测过程中，本方法的检测限可达0.16 yg/ml,即可以检出盐酸戊乙奎醚中高于0.008%的1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇，实际检测效果良好。
[0026]图1为盐酸戊乙奎醚的化学式，为对其副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇进行定量检测，1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的化学式如图2所示，本发明提出了高效液相色谱法的检测方案，包括采用1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇作为对照品进行定位，对盐酸戊乙奎醚中的1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇进行检测，具体操作步骤可概括如下:
A:制备供试品溶液:取批号为090701的盐酸戊乙奎醚50mg置于量瓶中，加流动相溶解并定容至25ml，摇匀，作为供试品溶液，待用； B:制备对照品溶液:取1-环戍基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇对照品适量，用流动相配制成每Iml含2.0 μ g的溶液，作为对照品溶液，待用；
C:测定:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪中进行测定，图3和图4分别为本发明1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇对照品溶液和盐酸戊乙奎醚供试品溶液的液相色谱图，其中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺，且用磷酸溶液调节PH值至5.0 ;
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0027]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.041%。
[0028]实施例2:
在实际使用时，我们还可以对色谱条件的各参数进行适当的调整，如:用磷酸溶液调节流动相的PH值的范围为4.0?6.0、流速调整范围为0.5?1.5 ml/min、柱温的调整范围为25?40°C，因此，本实施例与实施例1的区别仅在于:色谱条件中流速的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.5ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0029]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.040%ο
[0030]实施例3:
本实施例与实施例2相同，与实施例1的区别也仅在于:色谱条件中流速的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:0.5ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:210nm。
[0031]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.039%。
[0032]实施例4:
本实施例与实施例1的区别仅在于:色谱条件中柱温的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:25°C ；
检测波长:210nm。
[0033]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.041%。
[0034]实施例5:
本实施例与实施例4相同，与实施例1的区别也仅在于:色谱条件中柱温的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；
检测波长:210nm。
[0035]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.040%ο
[0036]实施例6:
本实施例与实施例5的区别仅在于:色谱条件中流动相的PH值的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为4.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；
检测波长:210nm。
[0037]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.039%。
[0038]实施例7:
本实施例与实施例6相同，与实施例5的区别也仅在于:色谱条件中流动相的PH值的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂；
流动相:PH值为6.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:40°C ；检测波长:210nm。
[0039]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.041%。
[0040]实施例8:
本实施例与实施例1的区别仅在于:色谱条件中检测波长的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相:pH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:208nm。
[0041]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.039%。
[0042]实施例9:
本实施例与实施例8相同，与实施例1的区别也仅在于:色谱条件中检测波长的参数不同。在本实施例中，高效液相色谱法的测定条件包括:
色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
流动相:pH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙
胺；
流速:1.0ml/min ；
柱温:35°C ；
检测波长:216nm。
[0043]经检测可知，盐酸戊乙奎醚中副产物1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇的含量为 0.039%。
[0044]对上述实施例1~9的检测结果进行统计,如图表1所示:
表1
【权利要求】
1.一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:所述的检测方法包括使用高效液相色谱法检测盐酸戊乙奎醚中副产物的含量，所述的副产物为1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基_乙醇，包含以下步骤: A:制备供试品溶液:取盐酸戊乙奎醚50mg置于量瓶中，加流动相溶解并定容至25ml，摇匀，作为供试品溶液，待用； B:制备对照品溶液:取1-环戊基-2-甲氧基-1-苯基-乙醇对照品，用流动相配制成每1ml含2.0 μ g的溶液，作为对照品溶液，待用； C:测定:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪中进行测定，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:主要由甲醇-水相或乙腈-水相组成； 流速:0.5 ~1.5ml/min ； 柱温:20~40°C ； 检测波长:208~216nm。
2.根据权利要求1所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:所述的流动相为:体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺，并用磷酸溶液调节所述流动相 的pH值为4.0~6.0。
3.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:35°C ； 检测波长:210nm。
4.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.5ml/min ； 柱温:35°C ； 检测波长:210nm。
5.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙 胺； 流速:0.5ml/min ；柱温:35°C ； 检测波长:210nm。
6.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:25°C ； 检测波长:210nm。
7.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为5. 0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:40°C ； 检测波长:210nm。
8.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为4.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:40°C ； 检测波长:210nm。
9.根据权利要求2所述的一种对盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基键合硅胶为填充剂； 流动相:PH值为6.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:40°C ； 检测波长:210nm。
10.根据权利要求2所述的一种盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相:pH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙 胺；流速:1.0ml/min ； 柱温:35°C ； 检测波长:208nm。
11.根据权利要求2所述的一种盐酸戊乙奎醚中副产物的检测方法，其特征在于:在所述步骤C中，所述高效液相色谱法的测定条件包括: 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 流动相:pH值为5.0、体积比为80:20:0.5的甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺； 流速:1.0ml/min ； 柱温:35°C ； 检测波长:216nm。
【文档编号】G01N30/02GK104034818SQ201410278362
【公开日】2014年9月10日 申请日期:2014年6月20日 优先权日:2014年6月20日
【发明者】黄绍渊, 张 浩, 张玲, 吴金伟 申请人:成都力思特制药股份有限公司