一种测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法
【专利摘要】本发明公开了一种测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，采用液质联用系统测定，先取待测样品，加入一定量的有机溶媒蛋白沉淀剂进行蛋白沉淀，预处理后，经色谱柱分离，用质谱检测器检测，本发明方法快速、准确、灵敏度高、操作简便，适合于测定血浆中球毛壳碱甲的浓度。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物检测【技术领域】，具体涉及一种测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方 法。 一种测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法
【背景技术】
[0002] 球毛壳碱甲（Chaetoglobins A)是从药用植物白茅的内生真菌球毛壳菌 (Chaetomium globosum)中分离得到的生物碱类新化合物。体外实验证明Chaetoglobins A具有显著的抗肿瘤作用，能抑制原癌基因表达及癌细胞扩散，对人乳腺癌细胞株MCF-7和 结肠癌细胞株SW1116均有明显抑制，是一种具有良好开发前景的新药源化合物。其结构式 如下：
[0003]
【权利要求】
1. 一种测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，血浆样品经预处理后经液质 联用系统检测其浓度，具体方法包括如下步骤： (1) 血浆样品预处理：取血浆样品，加入内标替硝唑甲醇溶液和乙酸水溶液，加入甲醇 或乙腈进行蛋白沉淀，离心后取上清液； (2) 将步骤（1)预处理后的血浆样品进行液相色谱分离：色谱条件中色谱柱为安捷伦 ZORBAX SB-C18柱；流动相：体积比为50:50的甲醇与水；流速：0. 2-0. 5mL · min-1 ;柱温： 30-40°C ;进样量10 μ L ;洗脱方式为等度洗脱； (3) 质谱测定，条件为：离子源：电喷雾离子化电离源ESI ;离子检测方式：多反应 监测MRM;离子极性：正离子；毛细管电压：3.0KV;离子源温度：80-120°C ;脱溶剂温度： 340-360°C ;脱溶剂气：400L/h ;锥孔电压：45V ;锥孔气：35L/h ;脱溶剂气和锥孔气均为高纯 氮气；检测对象的离子通道：球毛壳碱甲，[M_H]+，m/z637. 30 - 549. 20，Dwell0. 5，Cone45， Collision Energy35 ;内标替硝唑，[M-H]+，m/z248. 20 - 121. 00, DwellO. 5, Cone30， Collision Energyl5 ； (4) 计算：采用内标法，以球毛壳碱甲和内标替硝唑的峰面积比值代入标准曲线方程 计算球毛壳碱甲的浓度。
2. 根据权利要求1所述的测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，步骤（1) 中，取血浆样品50μ L，加入内标1000ng · ml/1替硝唑甲醇溶液10μ L和20v/v%乙酸水溶 液5 μ L，加入190 μ L甲醇或乙腈，振荡3min，12000rpm离心10min，离心后取上清液。
3. 根据权利要求1所述的测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，步骤（2) 中，色谱柱长度为150mm，内径为2. 1mm，填料粒径为5 μ m。
4. 根据权利要求1所述的测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，所述的血 浆为给予了含球毛壳碱甲药物的血浆。
5. 根据权利要求1所述的测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，所述血浆 为人或动物的血浆。
6. 根据权利要求1所述的测定血浆中球毛壳碱甲浓度的方法，其特征在于，所述血浆 为大鼠血浆。
【文档编号】G01N30/02GK104101665SQ201410380612
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年8月4日 优先权日:2014年8月4日
【发明者】储继红, 李长印, 居文政, 刘史佳, 张军, 许美娟, 吴婷 申请人:江苏省中医院