一种稳定的脂肪酶试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开的稳定的脂肪酶试剂盒，包括试剂R1:缓冲液10-200mmOl/L;脱氧胆酸钠0.05-5g/L;牛磺脱氧胆酸钠0.05-10g/L;辅脂肪酶0.1-5mg/L;氯化I丐1-20mmol/L;防腐剂0.01-1%;表面活性剂0.01-1%;试剂R2:酒石酸10-200mmol/L;牛黄脱氧胆酸钠0.l-10g/L;防腐剂0.01-1%;助溶剂0.01-2%;乳化剂0.01-2%；稳定剂0.01-2%；6-甲基试卤灵0.1-0.5mmol/L?本发明的试剂盒，灵敏度高，误差小，质量稳定，便于保存，对底物有很强的保护作用，提高了试剂的稳定性，检测效果好，有较大的临床应用价值。
【专利说明】一种稳定的脂肪酶试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生物检测试剂，特别是一种稳定的脂肪酶试剂盒。
[0002] 举例说明本申请中部分符号的含义：
[0003] 防腐剂0.01-1%表示每100毫升溶液中添加防腐剂0.01-lg。
[0004] 本申请中类似之处，均表示此类含义，另有说明的除外。
【背景技术】
[0005] 脂肪酶（Lipase EC3. 1. 1. 3.，LPS，甘油酯水解酶）是一类水解油酯的酶类。月旨 肪酶的水解底物一般是天然油脂，其水解部位是油脂中脂肪酸和甘油相连接的酯键。它 不同于其它水解酶，脂肪酶催化作用系统是一种非均相体系，水溶性的酶催化作用发 生在水不溶性底物和水的界面上，这种界面上的催化作用机制不甚清楚，不能简单用 MichaelidMenten学说解释酶与底物间的反应机制。有人提出了脂肪酶在油-水界面上定 位的假设，提出了"超底物"的模型，该模型能解释脂肪酶的一些行为，但还需要进一步的实 验证明和修正。此外，脂肪酶兼具有逆向催化甘油和游离脂肪酸合成甘油脂活性。脂肪酶 在临床的意义：正常人血液LPS含量极少，但在急性胰腺炎时，2?12h血液LPS显著升高， 24h至峰值，可达正常值上限的10倍，甚至50倍，至48?72h可能恢复正常，但随后又可持 续升高8?15天。由于血液LPS在急性胰腺炎时活性升高的时间早，上升的幅度的大，持 续的时间长，故其诊断价值优于淀粉酶。临床观察发现，凡血液AMY升高的病例，其LPS均 升高；而LPS升高者AMY不一定升高，约有2/3AMY正常的胰腺炎病人，其LPS正常；非胰腺 炎的急腹症有血液AMY升高而LPS不升高。酗酒、乙醇性胰腺炎、慢性胰腺炎、胰腺癌、肝胆 疾患等血液LPS可有不同程度的升高。迄今测定LPS的方法可分为3类：①测定产物（游 离脂肪酸）的增加（如滴定法、比色法、分光光度法、荧光法和pH电极法等）；②测定底物 的减少量（如比浊法、扩散法等）；③测定LPS的实际质量（双抗体夹心免疫分析法、乳胶 凝集法）。目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主。分光光度法目 前有两类比较常用：①酶偶联显色比色法，多用1，2_甘油二酯为底物，在LPS和单酸甘油酯 脂肪酶的催化下，水解生成甘油和脂肪酸，甘油通过甘油激酶作用生成3-磷酸甘油，再通 过甘油磷酸氧化酶/过氧化物酶体系和4-AAP色素原体系产生紫红色。于550nm波长连续 监测吸光度的变化即可计算LPS活性。此类方法特异性高，通过双试剂也基本可解决内源 性甘油的干扰问题。②1，2-0-二月桂外消旋甘油-3-戊酸-(6-甲基试卤灵）酯设计的连 续监测法。该底物在碱性环境中，在LPS和辅脂肪酶作用下，水解生成1，2-0_二月桂基甘 油和戊二酸_6'_甲基试卤灵。后者不稳定，可自发分解生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试 卤灵在581nm波长处有吸收峰，连续监测其吸光度变化可定量测定LPS活性。此法具有简 便、快速、灵敏、稳定和抗干扰能力强等特点。但是酶偶联显色法，工具酶的价格昂贵，而且 酶来源少且不稳定，很少有厂家用这种方法。底物水解法，底物极不稳定，试剂的本底升高 的极快，造成试剂要每天定标。浪费试剂也浪费校准品。而且会造成结果的不准确。因此 亟待寻求更好的检测方法。并且现有的试剂不便于保存，极易发生水解、破乳，并且长期放 置会发生沉淀，质量不稳定，不便于保存，成本高昂。
【发明内容】
[0006] 为解决上述问题，本发明公开了一种稳定的脂肪酶试剂盒，有效解决了试剂稳定 性，降低了脂肪酶检测试剂的使用成本，提高了使用便利性，提高了检测效率和检测精度。
[0007] 本发明公开的稳定的脂肪酶试剂盒包括
[0008] 试剂R1:缓冲液 10-200mmol/l. 脱〇.〇5-%/1. 卞满脱KP.酸钠0.05 10g/】. mWjlfj 0.卜5mg/L 2化钙 l-20mmol L 防腐剂 ami% 0.01 1% i式綱R2: 丨酸 丨0-20〇|)臟+)1」. 脱VU丨I碰納 0. I-1%/1.+ 防腐剂 0.01-1% 勘溶剂 0.01-? 乳化 Μ 0.01-2% IS/iiW 0.01-2% (Η μ -试 |il·乂 0. 1-0. r>mmol/L9
[0009] 作为一种优选，缓冲液为tris缓冲液、Good' s缓冲液、mops缓冲液、hepes缓冲 液中的一种。
[0010] 作为一种优选，防腐剂为叠氮钠、proclin300、mit中的一种。
[0011] 作为一种优选，表面活性剂为TritonX-100、吐温80、brij-35、二月桂甘油硫酸酯 中的一种。
[0012] 作为一种优选，助溶剂为丙酮、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇中的一种。
[0013] 作为一种优选，乳化剂为二月桂甘油硫酸酯、TritonX-100、Triton-114、吐温80、 brij-35中的一种。
[0014] 作为一种优选，稳定剂为DMS0、甘露醇、巯基乙酸中的一种。
[0015] 作为一种优选，试剂R2采用如下方法配置，依次将酒石酸、牛黄脱氧胆酸钠、防腐 齐U、乳化剂、稳定剂加入水中溶解，加热到37°C即可，其中水为去离子水或二次蒸馏水。
[0016] 本发明试剂盒检测机理为：
[0017]
【权利要求】
1. 一种稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述稳定的脂肪酶试剂盒包括 试剂R1:缓冲液200麵〇丨/!, 脱氣职敵钠0. i)5-5g/L ?脱氣胸變钠0, 〇δ-10g/L 辅脂胁 _ 〇· 1-5mg/L 氣化例 1 -20inmo 1/L 防腐剂 0.01-1% 农而活性剂0. 01-1X 试剂R2: ?酸 10-20Qminol/L Φ黄脱氣》4〖變钠〇. 1-l〇g/L 防腐剂 0.01-1% 助溶剂 0.01-2% 乳化剂 0,01 -2% 稳定剂 a 01-2% 6-甲基试 灵 0· 1-0· 5mmo 1 /+L〇
2. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述缓冲液为tris缓冲 液、Good' s缓冲液、mops缓冲液、hepes缓冲液中的一种。
3. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为叠氮钠、 proclin300、mit 中的一种。
4. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述表面活性剂为 TritonX-100、吐温80、bri j-35、二月桂甘油硫酸酯中的一种。
5. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述助溶剂为丙酮、甲 醇、乙醇、丙醇、丁醇中的一种。
6. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述乳化剂为二月桂甘 油硫酸酯、1'1'；11:〇11)(-100、1'1'；[1:〇11-114、吐温80、131'；!〇_-35中的一种。
7. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述稳定剂为DMS0、甘露 醇、巯基乙酸中的一种。
8. 根据权利要求1所述的稳定的脂肪酶试剂盒，其特征在于：所述试剂R2采用如下 方法配置，依次将酒石酸、牛黄脱氧胆酸钠、防腐剂、乳化剂、稳定剂加入水中溶解，加热到 37°C即可。
【文档编号】G01N21/78GK104215632SQ201410433105
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年8月28日 优先权日:2014年8月28日
【发明者】谢蒙, 张闻, 周海滨, 王建飞 申请人:宁波瑞源生物科技有限公司