用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，采用同一色谱条件下同时测定原儿茶酸和原儿茶醛的含量，供试品溶液经甲醇回流提取，在酸性条件用乙醚萃取制得。如此有效消除了阴性干扰，又能提高原儿茶酸和原儿茶醛的提取率。本发明的方法稳定性佳、重现性好、专属性强且操作简单，据此建立伊血安颗粒新的质量控制标准，可帮助有效控制伊血安颗粒生产中的成品质量并并提高其质量水平，保证生产工艺可控，确保临床使用疗效，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。
【专利说明】用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药含量检测【技术领域】，尤其涉及一种用于治疗妇科血症的中药复方 颗粒的含量检测方法。
【背景技术】
[0002] 伊血安颗粒、伊血安（无糖型）颗粒是用于治疗妇科血症的中药复方颗粒，由滇桂 艾纳香、益母草、延胡索、甘草等药味组成，具有活血止血，行气止痛功效。用于产后恶露不 绝、人工流产后子宫出血不净，中医辨证属血瘀证者。可缩短出血持续时间，减轻小腹疼痛。 国家食品药品监督管理局标准YBZ00292008中，伊血安颗粒的含测方法采用恒速的流动相 只测定原儿茶酸的含量，供试品溶液是采用水饱和正丁醇溶液提取制备。该法对主要有效 成分原儿茶酸存在较大的阴性干扰，测定不准确，不能有效控制成品中原儿茶酸的含量。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种稳定性佳、重现性好、专属性强且操作简单 的用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，消除了阴性干扰，实现主要有效成 分含量的准确检测。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：用于治疗妇科血症的中药复方 颗粒的含量检测方法，采用高效液相色谱测定方法（《中国药典》2010年版一部附录VI B)， 以甲醇和1 %冰醋酸混合液对伊血安颗粒或伊血安无糖型颗粒进行梯度洗脱，同时检测中 药复方颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量；其中，中药复方颗粒供试品溶液经甲醇回流提 取，在酸性条件用乙醚萃取制得。
[0005] 上述用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，按以下操作进行：
[0006] A、色谱条件与系统适用性试验
[0007] 用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；流动相由甲醇和1 %冰醋酸组成，进行梯 度洗脱，在〇-611^11，甲醇体积分数为10%，6-1〇1^11，甲醇体积分数为由10%变为22%， 1〇-2〇11^11，甲醇体积分数维持22%，2〇-251^11，甲醇体积分数由22%变为55%，25-4〇1^11， 甲醇体积分数维持55% ;检测波长为280腹，流速1.〇1111/1^11，柱温251：;理论板数按原儿茶 酸和原儿茶醛峰计算分别不低于3000 ;
[0008] B、对照品溶液的制备
[0009] 分别取原儿茶酸和原儿茶醛适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含原儿茶酸 25 μ g、原儿茶醛10 μ g的混合溶液；
[0010] C、供试品溶液的制备方法
[0011] 取中药复方颗粒研细，取约4g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤 液蒸干，残渣加lmol/L盐酸20ml溶解，滤过，滤液用乙醚萃取3次，每次15ml，合并乙醚液， 置盛有4g无水硫酸钠的锥形瓶中静置30min，分取乙醚液蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转 移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得；
[0012] D、测定法
[0013] 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1〇μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0014] 针对目前伊血安颗粒（或伊血安无糖型颗粒）中有关含量检测存在的问题，发明 人对其进行了改进，采用同一色谱条件下同时测定原儿茶酸和原儿茶醛的含量，供试品溶 液经甲醇回流提取，在酸性条件用乙醚萃取制得。其中，乙醚萃取后的乙醚液用无水硫酸 钠静置，是为了除去乙醚提取过程中携带的水分，以提高两种有效成分的提取率；而以甲醇 和1%冰醋酸混合液作为流动相进行梯度洗脱，能对供试品中不同极性的物质进行有效地 分离，从而消除了阴性干扰，并且前一针对后一针几乎没有影响，对实际质量分析有很大帮 助。本发明的方法稳定性佳、重现性好、专属性强且操作简单，据此建立伊血安颗粒新的质 量控制标准，可帮助有效控制伊血安颗粒生产中的成品质量并并提高其质量水平，保证生 产工艺可控，确保临床使用疗效，为产品疗效稳定确切提供了可靠保障。
【专利附图】
【附图说明】
[0015] 图1是旧方法原儿茶酸对照色谱图。
[0016] 图2是旧方法阴性色谱图。
[0017] 图3是为旧方法样品色谱图。
[0018] 图4是本发明对照品混合溶液色谱图，图中Α、原儿茶酸对照，Β、原儿茶醛对照。
[0019] 图5是本发明阴性样色谱图。
[0020] 图6是本发明样品的色谱图，图中Α、原儿茶酸对照，Β、原儿茶醛对照。
【具体实施方式】
[0021] 以下实施例中用到的仪器和试药：
[0022] AgilentllOO高效液相色谱仪（包括G1311A四元泵，G1313A自动进样器，G1314A VWD检测器，G1316A柱温箱，AgilengtllOO色谱工作站（美国安捷伦科技公司））；电子分 析天平：BP211D(德国赛多利斯）；PS-60AL超声波清洗仪（40kHz，360W);
[0023] 原儿茶酸对照品（购于中国药品生物制品检定所）批号110809-200604 ;原儿茶 醛对照品（购于中国药品生物制品检定所）批号110810-200506 ;甲醇、冰醋酸为色谱纯， 其它试剂都是分析纯。
[0024] 实施例1供试品溶液的制备
[0025] 取中药复方颗粒研细，取约4g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤 液蒸干，残渣加lmol/L盐酸20ml溶解，滤过，滤液用乙醚萃取3次，每次15ml，合并乙醚液， 置盛有4g无水硫酸钠的锥形瓶中静置30min，分取乙醚液蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转 移至l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得。
[0026] 实施例2筛选中药复方颗粒中原儿茶酸、原儿茶醛的含量的检测条件
[0027] 色谱条件的筛选：考察了甲醇-冰醋酸：水（10 :90:1)、甲醇-1 %冰醋酸（90: 10)、甲醇-水（20:80,用冰醋酸调PH = 2. 8)、乙腈-1 %冰醋酸以及甲醇（A)、1 %冰醋酸 (B)梯度洗脱等流动相系统，经试验比较，最终确定甲醇（A)、l%冰醋酸（B)梯度洗脱完成 上述两种成分的含量测定。
[0028] 考察了 25°C、30°C、40°C不同柱温；以及0.8、L0、1.2mL/min不同流速对各有效成 分分离的影响，试验结果表明25°C，流速1. OmL/min时分离效果最好。
[0029] 全波长扫描的筛选
[0030] 对原儿茶酸、原儿茶醛对照品溶液进行全波长扫描（200-400nm)，发现原儿茶酸在 256nm处有最大吸收，而原儿茶醛在280nm有最大吸收。因原儿茶醛含量相对较低，且在 260nm处样品干扰峰相对较多，故确定检测波长为280nm。
[0031] 色谱柱的选择：考察了 PhenomenexC18柱、依利特C18柱、KromasilC18柱、 ，结果试验表明，依利特C18柱（4·6Χ250_，5μηι)分离效果最佳。
[0032] 实施例3中药复方颗粒（伊血安颗粒）中原儿茶酸、原儿茶醛的含量检测
[0033] 色谱条件与系统适用性试验
[0034] 用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；流动相由甲醇和1 %冰醋酸组成，进行梯 度洗脱，在〇-611^11，甲醇体积分数为10%，6-1〇1^11，甲醇体积分数为由10%变为22%， 1〇-2〇11^11，甲醇体积分数维持22%，2〇-251^11，甲醇体积分数由22%变为55%，25-4〇1^11， 甲醇体积分数维持55 % ;检测波长为280nm，流速1. Oml/min，柱温25°C，进样量：10 μ 1理 论板数按原儿茶酸和原儿茶醛峰计算分别不低于3000 ;
[0035] 对照品溶液的制备
[0036] 分别精密称取原儿茶酸对照品6. 26mg、原儿茶醒对照6. 68mg分别置于50ml的容 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为原儿茶酸、原儿茶醛对照品储备液；分别精密 量取上述储备液原儿茶酸5ml、原儿茶醛2ml，置25ml的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇 勻，即得每lml含原儿茶酸（25. 04μ g/ml)和原儿茶醒（10. 688μ g/ml)的混合对照品溶 液。
[0037] 供试品溶液的制备方法
[0038] 按实施例1中所述方法制备，伊血安颗粒批号分别为131001、131002、131101。结 果如下：
[0039] 表 1
[0040]
【权利要求】
1. 一种用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，采用高效液相色谱测定方 法，其特征在于：以甲醇和1 %冰醋酸混合液对伊血安颗粒或伊血安无糖型颗粒进行梯度 洗脱，同时检测中药复方颗粒中原儿茶酸和原儿茶醛的含量；其中，中药复方颗粒供试品溶 液经甲醇回流提取，在酸性条件用乙醚萃取制得。
2. -种用于治疗妇科血症的中药复方颗粒的含量检测方法，其特征在于按以下操作进 行： A、 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷化键合硅胶为填充剂；流动相由甲醇和1 %冰醋酸组成，进行梯度 洗脱，在0-611^11，甲醇体积分数为10%，6-101^11，甲醇体积分数为由10%变为22%， 1〇-2〇11^11，甲醇体积分数维持22%，2〇-251^11，甲醇体积分数由22%变为55%，25-4〇1^11， 甲醇体积分数维持55% ;检测波长为280腹，流速1.〇1111/1^11，柱温251：;理论板数按原儿茶 酸和原儿茶醛峰计算分别不低于3000 ; B、 对照品溶液的制备 分别取原儿茶酸和原儿茶醛适量，精密称定，加甲醇制成每lml含原儿茶酸25 μ g、原 儿茶醛10 μ g的混合溶液； C、 供试品溶液的制备方法 取中药复方颗粒研细，取约4g，精密称定，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸 干，残渣加lmol/L盐酸20ml溶解，滤过，滤液用乙醚萃取3次，每次15ml，合并乙醚液，置盛 有4g无水硫酸钠的锥形瓶中静置30min，分取乙醚液蒸干，残渣用甲醇适量使溶解，转移至 l〇ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0. 45 μ m的微孔滤膜滤过，即得； D、 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各?〇μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
【文档编号】G01N30/02GK104215708SQ201410452215
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2014年9月5日 优先权日:2014年9月5日
【发明者】蒋冰清, 罗盛东, 李修善 申请人:广西万寿堂药业有限公司