一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法，该方法包括HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法。该方法通过HPLC法和简单的梯度洗脱建立一组特征峰，并将检测结果与标准特征峰进行对比。该方法还公开了黄香药物组合物及其制剂的TLC色谱鉴别。本发明的检测方法操作简便、快速、检测成本低、重现性好、信息量大，所得样品的HPLC特征峰明显，比对容易，且能较全面反映黄香药物组合物及其制剂的配方组成。
【专利说明】-种黄香药物组合物及其制剂的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法，属于医药【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 现代药理研究发现，大黄有显著地降血脂作用；广蕾香是临床上常用的芳香化湿 药，其味辛、微温，具有芳香化浊的功效，特别是其挥发油成分有极其显著地药理活性，依据 传统古方的黄香颗粒在临床用于高血脂证取得了良好的疗效。黄香颗粒收载于国家药品标 准部分（内科也系分册），标准编号；WS-10902狂D-0902)-2002-2012Z，黄香颗粒的组成为 大黄200g、广蕾香200g及藏糖。
[0003] 目前该制剂质量标准只有大黄及百秋李醇的鉴别和大黄素含量测定项，其检测结 果不能完全体现黄香制剂整体质量，且操作繁琐，检索现有技术中也未发现对于黄香颗粒 的进行整体测定的方法及技术。
[0004] HPLC特征图谱检测方法具有操作简便、快速、检测成本低、重现性好和信息量大等 优点，对于药物组合物的检测具有重要的意义。现有技术中未发现同时检测大黄和广蕾香 的特征图谱检测方法，但对大黄或广蕾香的特征图谱检测方法很多，如《大黄不同炮制品的 HPLC特征图谱比较研究》（2011年3月第31卷第3期的《湖南中医药大学学报》）也W甲 醇-0. 05%磯酸水溶液为流动相建立了大黄的特征图谱检测方法，但其梯度变化变化复杂， 甲醇比例从10%逐渐变到90%，总时间80min，对照品多达8种，实验操作繁琐。《HPLC建 立广蕾香特征图谱的方法学研究》（《中成药》2005年27卷12期）也建立了广蕾香的特征 图谱检测方法，也W甲醇-0. 05%磯酸水溶液为流动相，W 26个检测峰为指标，比对困难， 实验操作繁琐，要求较高。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术的不足，本发明公开了一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法， 该方法包括HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法。
[000引术语说明：
[0007] 黄香颗粒是国家药品标准部分（内科也系分册）记载的药品名称。
[0008] 黄香药物组合物及其制剂包括黄香颗粒药物组合物及用黄香颗粒原料药配方制 备的制剂。
[0009] 本发明的技术方案如下：
[0010] 一种原料药组成为大黄200重量份、广蕾香200重量份的黄香药物组合物及其制 剂的检测方法，该方法包括如下HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法：
[0011] HPLC特征图谱检测法：
[0012] a)色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W甲醇-体 积份数比0. 5 %磯酸水溶液为流动相，按如下条件梯度洗脱；0 - 30分钟甲醇体积比例 40% - 80%，30 - 60分钟甲醇体积比例保持80%;检测波长为280?300皿；流速；0. 8? I. 2ml/min ;分析时间；60分钟；理论板数按大黄素峰计算不低于2000 ;
[0013] b)对照品溶液的制备；取大黄素对照品，加甲醇制成每Iml含大黄素0. 2mg的溶 液，即得；
[0014] C)供试品溶液的制备；取黄香药物组合物或其制剂研细后粉末l-5g，加入甲醇 IO-SOml，超声处理30-40分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
[0015] d)检测；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5?15U 1，注入高效液相色谱 仪，记录60分钟内的色谱图；所得图谱包含黄香药物组合物或其制剂的特征峰，各特征峰 相对保留时间误差不超过10% ;
[001引 TLC鉴别检测法：
[0017] 取黄香药物组合物或其制剂2-5g，加沸程60-9(TC石油離10-30ml，超声处理 30min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加沸程60-9(TC石油離2ml使溶解，作为供试品溶液；取 大黄对照药材Ig,同法制得大黄对照药材溶液；取广蕾香对照药材Ig,同法制得广蕾香对 照药材溶液；照中国药典薄层色谱法，吸取上述H种溶液各10 U 1，分别点于同一娃胶G薄 层色谱板上，W体积份数比为3-5:0. 5-2:0. 2-1的沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上 清液为展开剂，展开，取出，瞭干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的英光斑点。
[0018] 本发明优选的，一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法，其中HPLC特征图谱检 测法中黄香药物组合物或其制剂的特征峰为11个，其中9号峰大黄素为标准峰，11个峰的 相对保留时间分别为 0. 195, 0. 208, 0. 271，0. 428, 0. 505, 0. 531，0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114 ,1. 335。
[0019] 本发明优选的，一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法，其中HPLC特征图谱检 测方法中的检测波长为290nm ;流速为1. Oml/min ;进样量为10 y 1。
[0020] 本发明优选的，一种黄香药物组合物及其制剂的检测方法，其中TLC鉴别检测法 展开剂沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上清液体积份数比为4:1:0. 5。
[0021] 进一步优选的，一种原料药组成为大黄200重量份、广蕾香200重量份的黄香颗粒 的检测方法，该方法包括如下HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法：
[0022] HPLC特征图谱检测法：
[0023] a)色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W甲醇-体 积份数比0. 5 %磯酸水溶液为流动相，按如下条件梯度洗脱；0 - 30分钟甲醇体积比例 40%-80%，30 - 60分钟甲醇体积比例保持80%;检测波长为290皿；流速；1.01111/111111; 分析时间；60分钟；理论板数按大黄素峰计算不低于2000 ;
[0024] b)对照品溶液的制备；取大黄素对照品，加甲醇制成每Iml含大黄素0. 2mg的溶 液，即得；
[00巧]C)供试品溶液的制备；取黄香颗粒研细后粉末4g，加入甲醇50ml，超声处理30分 钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
[0026] d)检测；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各IOy 1，注入高效液相色谱仪， 记录60分钟内的色谱图；所得图谱包含黄香药物组合物或其制剂的特征峰，各特征峰相对 保留时间误差不超过10% ;
[0027] TLC鉴别检测法：
[0028] 取黄香颗粒3g，加沸程60-9(TC石油離25ml，超声处理30min，放冷，滤过，滤液蒸 干，残渣加沸程60-9(TC石油離2ml使溶解，作为供试品溶液；取大黄对照药材Ig,同法制得 大黄对照药材溶液；取广蕾香对照药材Ig,同法制得广蕾香对照药材溶液；照中国药典薄 层色谱法，吸取上述H种溶液各10 U 1，分别点于同一娃胶G薄层色谱板上，W体积份数比 为4:1:0. 5的沸程60-9(TC石油離-甲酸己醋-甲酸上清液为展开剂，展开，取出，瞭干，置 365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的英 光斑点。
[0029] 本发明所述的制剂是指取黄香颗粒原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临 床可接受的任何一种剂型，包括但不限于丸剂、微丸、滴丸、片剂、胶囊、饮片、分散片。
[0030] 本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/ml或kg/1。
[0031] 发明的有益效果：
[0032] 本发明的检测方法操作简便、快速、检测成本低、重现性好、信息量大，所得样品的 HPLC特征峰明显，比对容易，且能较全面反映黄香药物组合物及其制剂的配方组成。
【专利附图】
【附图说明】
[0033] 图1为黄香颗粒的HPLC标准特征图谱；
[0034] 图2为大黄素标准品的HPLC图谱；
[0035] 图3为黄香颗粒的TLC鉴别图谱。
[003引其中，图1、图2的横坐标是时间，单位：分钟（min);纵坐标是电压，单位：伏特 (Volts)。图3中1为大黄对照药材，2为黄香颗粒，3为广蕾香对照药材。
【具体实施方式】
[0037] 下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
[0038] 实验例1 ;黄香药物组合物特征图谱的建立
[0039] 试验仪器；高效液相色谱仪；日立心2100粟心2400紫外检测器
[0040] 电子天平：岛津AUW-220D型
[0041] 紫外分光光度计；岛津UV-2450型
[004引对照品；大黄素对照品（中国药品生物制品检定所）批号：110756-200110
[0043] 供试品：黄香颗粒（金巧藏药股份有限公司）批号；20100105、20100806、 20110204、20110902、20120103、20120704、20130207、20130906、20140102、20140503
[0044] 色谱条件与系统适用性试验；W十八焼基娃焼键合娃胶为填充剂；W甲醇（A)-体 积份数比0. 5%磯酸水溶液炬）为流动相，梯度洗脱；0?30分钟甲醇由40%升至80%， 30?60分钟甲醇保持80% ;检测波长为290nm ;柱温；35°C ;流速；1. Oml/min ;分析时间： 60分钟。理论板数按大黄素峰计算应不低于2000 ;
[0045] 对照品溶液的制备；取大黄素对照品适量，加甲醇制成每Iml含大黄素0. 2mg的溶 液，即得；
[0046] 供试品溶液的制备；取黄香药物组合物或其制剂研细后粉末2g，加入甲醇25ml， 超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
[0047] 检测波长选择：按按供试品溶液的制备方法得到供试品溶液，190-400nm波长范 围内进行扫描，根据紫外吸收图谱，选定290nm为检测波长。
[0048] 高效液相色谱法测定标准特征图谱：取10批黄香颗粒按供试品溶液的制备方法 得到供试品溶液，按上述色谱条件获得10批黄香颗粒制剂的高效液相色谱图，W该10批黄 香颗粒的HPLC图谱进行对比评价，建立黄香颗粒的标准特征图谱，具体为特征峰11个，其 中9号峰大黄素为标准峰，11个峰的相对保留时间分别为0. 195, 0. 208, 0. 271，0. 428, 0. 50 5, 0. 531，0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114, 1. 335。
[0049] 实验例2 ;特征图谱检测方法的适应性考察
[0050] 1、精密度试验
[0051] 取批号为20140503批黄香颗粒样品，按实验例1供试品溶液的制备方法得到供试 品溶液一份，在实验例1色谱条件下连续进样5次测定，结果表明；本发明提供的特征图谱 检测方法精密度良好。测定结果见表1。
[0052] 表1黄香颗粒液相特征图谱精密度考察结果（相对保留时间）
[0053]
【权利要求】
1. 一种原料药组成为大黄200重量份、广藿香200重量份的黄香药物组合物及其制剂 的检测方法，特征在于，该方法包括如下HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法： HPLC特征图谱检测法： a) 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积 份数比0. 5%磷酸水溶液为流动相，按如下条件梯度洗脱：0 - 30分钟甲醇体积比例40% -80 %，30 - 60分钟甲醇体积比例保持80 % ;检测波长为280?300nm ;流速：0. 8? 1. 2ml/min ;分析时间：60分钟；理论板数按大黄素峰计算不低于2000 ; b) 对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含大黄素0. 2mg的溶液，即 得； c) 供试品溶液的制备：取黄香药物组合物或其制剂研细后粉末l_5g，加入甲醇 10-50ml，超声处理30-40分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得； d) 检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5?15 μ 1，注入高效液相色谱仪， 记录60分钟内的色谱图；所得图谱包含黄香药物组合物或其制剂的特征峰，各特征峰相对 保留时间误差不超过10% ; TLC鉴别检测法： 取黄香药物组合物或其制剂2_5g，加沸程60-90°C石油醚10_30ml，超声处理30min，放 冷，滤过，滤液蒸干，残渣加沸程60-90°C石油醚2ml使溶解，作为供试品溶液；取大黄对照 药材lg，同法制得大黄对照药材溶液；取广藿香对照药材lg，同法制得广藿香对照药材溶 液；照中国药典薄层色谱法，吸取上述三种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层色谱板 上，以体积份数比为3-5:0. 5-2:0. 2-1的沸程60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液为展 开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应 的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
2. 根据权利要求1的检测方法，特征在于，其中HPLC特征图谱检测法中黄香药物组合 物或其制剂的特征峰为11个，其中9号峰大黄素为标准峰，11个峰的相对保留时间分别为 0. 195, 0. 208, 0. 271, 0. 428, 0. 505, 0. 531, 0. 587, 0. 827, 1. 000, 1. 114, 1. 335〇
3. 根据权利要求1的检测方法，特征在于，其中HPLC特征图谱检测方法中的检测波长 为290nm ;流速为L Oml/min ;进样量为10μ 1。
4. 根据权利要求1的检测方法，特征在于，其中TLC鉴别检测法展开剂沸程60-90°C石 油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液体积份数比为4:1:0.5。
5. -种原料药组成为大黄200重量份、广藿香200重量份的黄香颗粒的检测方法，特征 在于，该方法包括如下HPLC特征图谱检测法和/或TLC鉴别检测法： HPLC特征图谱检测法： a) 色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-体积 份数比0. 5%磷酸水溶液为流动相，按如下条件梯度洗脱：0 - 30分钟甲醇体积比例40% -80 %，30 - 60分钟甲醇体积比例保持80% ;检测波长为290nm ;流速：1. Oml/min ;分析 时间：60分钟；理论板数按大黄素峰计算不低于2000 ; b) 对照品溶液的制备：取大黄素对照品，加甲醇制成每lml含大黄素0. 2mg的溶液，即 得； c) 供试品溶液的制备：取黄香颗粒研细后粉末4g，加入甲醇50ml，超声处理30分钟， 放冷，滤过，取续滤液，即得； d)检测：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1，注入高效液相色谱仪，记录 60分钟内的色谱图；所得图谱包含黄香药物组合物或其制剂的特征峰，各特征峰相对保留 时间误差不超过10% ; TLC鉴别检测法： 取黄香颗粒3g，加沸程60-90°C石油醚25ml，超声处理30min，放冷，滤过，滤液蒸干， 残渣加沸程60-90°C石油醚2ml使溶解，作为供试品溶液；取大黄对照药材lg，同法制得 大黄对照药材溶液；取广藿香对照药材lg，同法制得广藿香对照药材溶液；照中国药典薄 层色谱法，吸取上述三种溶液各10 μ 1，分别点于同一硅胶G薄层色谱板上，以体积份数比 为4:1:0.5的沸程60-90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸上清液为展开剂，展开，取出，晾干，置 365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧 光斑点。
【文档编号】G01N30/06GK104237415SQ201410508144
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】班玛才仁, 任松鹏, 孙绪丁, 姬涛, 张克升 申请人:山东阿如拉药物研究开发有限公司