一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法
【专利摘要】本发明公开了一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，属于核磁共振检测方法【技术领域】。该方法以廉价易得化合物为内标，与已知液相色谱归一化含量的莫西克汀样品一同溶解于氘代试剂中，经过相同氘代试剂稀释至一定浓度后，转移至核磁样品管中进行核磁共振氢谱测试，然后分别对谱图中内标物及莫西克汀的定量峰进行积分，所得数据代入计算公式计算即可得到莫西克汀含量，与欧洲药典提供的液相色谱外标检测方法结果相符。本发明提供一种新的测定莫西克汀含量的方法，该方法具有内标物廉价易得、简单准确及重复性好等优点。
【专利说明】一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及核磁共振检测方法【技术领域】，具体涉及一种核磁共振氢谱测定莫西克 汀含量的方法，该方法适用于莫西克汀含量为70wt. %以上的样品的检测。
【背景技术】
[0002] 莫西克汀是由链霉菌发酵产生的成分单一、半合成的大环内酯类药物，有着良好 的驱虫活性，同时具有长效、安全等特性，是一种目前广泛应于兽医临床的广谱、高效、新型 大环内酯类驱虫抗生素（参见：Parasites&Vectors2009,2(Suppl2)，S5)。莫西克汀的含 量目前一直采用已知含量的标准品作外标进行高效液相色谱测定（参见：欧洲药典，第7 版，2010, 2529-2531 ;CN103399115, 2013)。由于标准样品价格昂贵，长期使用成本高，而且 在存放过程中标准样品即使发生少量吸潮、污染或者降解等变化都会严重影响测定结果。 因此，开发一种避免使用莫西克汀标准品的替代测试方案非常必要。
[0003] 核磁共振氢谱CH-NMR)技术主要用于有机化合物的结构测定，它也是一种药物定 量分析的重要手段，其基本原理是1H-NMR中的共振峰面积与该共振峰包含氢原子个数成正 t匕，该法的优点是无需引入任何校正因子、速度快、简单准确。自从广泛应用超导傅立叶变 换核磁共振谱仪以来，仪器性能得到极大改善，其定量分析的精确度、准确度和重现性达到 或接近高效液相色谱仪。目前很多国家和地区药典已收录核磁定量分析方法，2010年修订 的中国药典也增加了核磁共振波谱的定量方法（参见：中华人民共和国药典二部，第二版， 2010,附录 81)。
[0004] 因此，利用iH-NMR技术，选择廉价稳定的内标物替代需要使用标准品作外标的高 效液相色谱法进行莫西克汀含量测定是一项非常有意义的研究工作。
【发明内容】
[0005] 为了克服现有高效液相色谱测量莫西克汀含量方法中存在的不足之处，本发明提 供一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，该方法利用核磁共振氢谱内标法测定莫西 克汀含量，具有内标物廉价易得、简单准确及重复性好等优点。
[0006]本发明采用的技术方案是：
[0007] -种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，包括如下步骤：
[0008] (1)称量质量为ms的旲西克汀样品和质量为％的内标物至样品瓶中，然后在样品 瓶中加入氘代溶剂，通过超声波震荡使莫西克汀样品和内标物溶解，得到浓度为C1的莫西 克汀溶液；
[0009] (2)从步骤（1)样品瓶中取出所需质量的溶液，加入装有相同氘代溶剂的另一样 品瓶中，在另一样品瓶中配制浓度为C2的旲西克汀溶液；
[0010] (3)将步骤（2)中浓度为C2的莫西克汀溶液转移至核磁样品管中进行核磁共振氢 谱测试；测试完毕，选择莫西克汀与内标物定量峰进行积分并分别得到积分面积As及积分 面积化，将以上数据带入公式（1)求得莫西克汀含量。
【权利要求】
1. 一种核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤： (1) 称量质量为ms的旲西克汀样品和质量为IHi的内标物至样品瓶中，然后在样品瓶中 加入氘代溶剂，通过超声波震荡使莫西克汀样品和内标物溶解，得到浓度为Cl的莫西克汀 溶液； (2) 从步骤（1)样品瓶中取出所需质量的溶液，加入装有相同氘代溶剂的另一样品瓶 中，在另一样品瓶中配制浓度为C2的旲西克汀溶液； (3) 将步骤（2)中浓度为C2的莫西克汀溶液转移至核磁样品管中进行核磁共振氢谱测 试；测试完毕，选择莫西克汀与内标物定量峰进行积分并分别得到积分面积As及积分面积 Ai,将以上数据带入公式（1)求得莫西克汀含量；
其中：P为莫西克汀含量为莫西克汀样品的液相色谱归一化含量;AS为莫西克汀 定量峰的积分面积；Ai为内标物定量峰的积分面积；ns为莫西克汀定量峰包含的氢个数；rii 为内标物定量峰包含的氢个数;ms为莫西克汀样品质量;MS为莫西克汀摩尔质量（639. 82g/ mol)吨为内标物的质量軋为内标的摩尔质量％为内标物的纯度。
2. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 莫西克汀样品中莫西克汀含量为70?IOOwt. %。
3. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 内标物为1，3, 5-三甲苯、对苯二酚、1，3, 5-三氧六环、1，2, 4, 5-四氯苯、1，4-二硝基苯、对 苯二酸、苯甲酸苄酯和顺丁烯二酸酐中的一种或两种。
4. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步骤 (1) 中，所述内标物加入量应使其在核磁共振氢谱中的定量峰积分面积为莫西克汀定量峰 积分面积的0.7至1.3倍之间。
5. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步骤 ⑴中，所得莫西克汀溶液的浓度Cl为10?300mg/mL。
6. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 氘代溶剂包括氘代氯仿、氘代二甲基亚砜、氘代水、氘代甲醇、氘代二氯甲烷、氘代乙腈和氘 代丙酮中的一种或两种的混合溶剂。
7. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：步骤 (2) 中，所得莫西克汀溶液的浓度C2为0. 5?20mg/mL。
8. 根据权利要求1所述的核磁共振氢谱测定莫西克汀含量的方法，其特征在于：所述 莫西克汀样品的液相色谱归一化含量为按照欧洲药典莫西克汀含量测定的标准方法进行 测试所得结果。
【文档编号】G01N24/08GK104330431SQ201410526450
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月30日 优先权日:2014年9月30日
【发明者】戴耀, 李贺先, 林诚辉, 王荣良 申请人:大连九信生物化工科技有限公司