红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述的红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法,包括以下步骤：称取麦角固醇标准品0.1g，用无水乙醇定容至50ml容量瓶，其浓度为2mg/ml，作标准贮备液。再用标准贮备液分别配制成0.02mg/ml，0.04mg/ml，0.1mg/ml，0.2mg/ml，0.4mg/ml，0.8mg/ml，1.6mg/ml7份标准液。在一定的色谱条件下进样20μL，以峰面积Y对浓度X进行回归，计算得回归方程；精密称取红曲米细粉4.0g，经预处理后，在一定的色谱条件下进样20μL，根据得到的峰面积计算浓度。本发明所述的检测方法采用HPLC法测定红曲霉发酵样品中的麦角固醇含量，具有简便、准确、可靠等优点。
【专利说明】红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。
【背景技术】
[0002]红曲霉长期以来被广泛用于酿酒、制醋及着色剂上，红曲的食用和药用价值亦可追溯至一千多年前。自1979年日本远藤氏率先从红曲中发现Monacolin K以来，红曲霉代谢的生理活性物质，已引起国内外研究者的极大关注。目前，已有人对红曲霉产麦角固醇进行了研究，而麦角固醇的测定大多采用紫外分光光度法。而麦角固醇作为红曲霉重要的次级代谢产物之一，是一种重要的医药化工原料，可用于生产维生素D2、“可的松”、“激素黄酮体”等，因此建立简便、准确、可靠的红曲霉所产次级代谢产物麦角固醇的测定方法，具有十分重要的意义。
【发明内容】
[0003]本发明旨在提供一种简便、准确、可靠的红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法。
[0004]本发明所述的红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，包括以下步骤: 称取麦角固醇标准品0.lg，用无水乙醇定容至50ml容量瓶，其浓度为2mg/ml，作标准忙备液。再用标准忙备液分别配制成0.02mg/ml,0.04mg/ml,0.lmg/ml,0.2mg/ml,0.4mg/ml, 0.8mg/ml, 1.6mg/ml 7份标准液。在一定的色谱条件下进样20 μ L,以峰面积Υ对浓度X进行回归，计算得回归方程；精密称取红曲霉发酵样品4.0g，经预处理后，在一定的色谱条件下进样20 μ L，根据得到的峰面积计算浓度。
[0005]优选的,本发明所述的色谱条件为色谱柱为4.6*150mm、5 μ m的Shim-pack VP一ODS C18柱；流动相为甲醇-水(97:3);流速1.8ml/min ;柱温为室温25°C;检测波长282nm，灵敏度0.02AUFS ;进样体积20 μ L。
[0006]更优选的，本发明所述的预处理方式是将4.0g红曲霉发酵样品于250mL圆底回流瓶中，加入40mLK0H和20mL无水乙醇，85°C _90°C水浴中回流皂化2.5h后，冷却至室温，经25mL乙醚萃取，萃取液经0.45 μ m有机膜过滤后待测。
[0007]本发明所述的检测方法中，得到的标准品的回归方程为Y=9006306X+4167.2，r=0.9949，麦角固醇在0.02-1.6mg/ml范围内线性关系良好。取0.4mg/ml的麦角固醇标准溶液平行进样5次，其相对标准偏差为0.15%，该方法的精密度较高。
[0008]本发明所述的检测方法采用HPLC法测定红曲霉发酵样品中的麦角固醇含量，具有简便、准确、可靠等优点。随着对红曲霉所产生理活性物质研究的深入及世人对红曲给予的极大关注，建立红曲霉生理活性物质麦角固醇的检测方法显得尤为重要。
【具体实施方式】
[0009]实施例一:
(1)标准曲线制作:
称取麦角固醇标准品0.lg，用无水乙醇定容至50ml容量瓶，其浓度为2mg/ml，作标准忙备液。再用标准忙备液分别配制成0.02mg/ml,0.04mg/ml,0.lmg/ml,0.2mg/ml,0.4mg/ml,0.8mg/ml, 1.6mg/ml 7份标准液。在一定的色谱条件(色谱柱为4.6*150mm、5 μ m的Shim-pack VP—ODS C18柱；流动相为甲醇-水(97:3);流速1.8ml/min ;柱温为室温25°C;检测波长282nm，灵敏度0.02AUFS)下进样20 μ L，以峰面积Υ对浓度X进行回归，计算得回归方程。
[0010]回归方程为Y=9006306X+4167.2，r=0.9949，麦角固醇在 0.02-1.6mg/ml 范围内线性关系良好。
[0011]⑵试样测定:
称取4.0g红曲霉发酵样品于250mL圆底回流瓶中，加入40mLK0H和20mL无水乙醇，85°C _90°C水浴中回流皂化2.5h后，冷却至室温，经25mL乙醚萃取，萃取液经0.45 μ m有机膜过滤后待测，在上述的色谱条件下进样20 μ L，根据得到的峰面积计算浓度。
[0012]本发明所述的测定方法HPLC法测定红曲霉发酵样品中的麦角固醇含量，其回收率为98.86%,平行检测相对标准偏差为0.15%,该测定方法简单、快速、准确、重复性好，适宜一般实验室使用。
【权利要求】
1.红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，包括以下步骤: 称取麦角固醇标准品0.lg，用无水乙醇定容至50ml容量瓶，其浓度为2mg/ml，作标准贮备液； 再用标准忙备液分别配制成 0.02mg/ml,0.04mg/ml,0.lmg/ml,0.2mg/ml,0.4mg/ml,0.8mg/ml, 1.6mg/ml 7 份标准液； 在一定的色谱条件下进样20 μ L，以峰面积Y对浓度X进行回归，计算得回归方程；精密称取红曲霉发酵样品4.0g，经预处理后，在一定的色谱条件下进样20μ L，根据得到的峰面积计算浓度。
2.如权利要求1所述的红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，其特征在于所述的色谱条件为色谱柱为4.6*150mm、5 μ m的Shim-pack VP一ODS C18柱；流动相为甲醇-水(97:3);流速1.8ml/min ;柱温为室温25V ;检测波长282nm,灵敏度0.02AUFS ;进样体积20 μ L。
3.如权利要求1所述的红曲霉发酵样品中麦角固醇含量的测定方法，其特征在于所述的预处理方式是将4.0g红曲霉发酵样品于250mL圆底回流瓶中，加入40mLK0H和20mL无水乙醇，85°C -90°C水浴中回流皂化2.5h后，冷却至室温，经25mL乙醚萃取，萃取液经.0.45 μ m有机膜过滤后待测。
【文档编号】G01N30/02GK104345101SQ201410569670
【公开日】2015年2月11日 申请日期:2014年10月23日 优先权日:2014年10月23日
【发明者】李勇, 刘文斌 申请人:西安莹朴生物科技股份有限公司