棉籽饼粕中棉籽糖的测定方法
【专利摘要】本发明涉及一种棉籽饼粕中棉籽糖的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领域。所述的棉籽饼粕中棉籽糖的测定方法,包括以下步骤：标准曲线制作：称取棉籽糖，水溶，转移至容量瓶中，稀释备用，测定其峰面积并计算回归方程及相关系数。试样测定：称取5.0g粉碎回流除脂后的棉籽饼粉于烧瓶中，加入乙醇溶液，搅拌提取1h，抽滤，重复提取2次，合并滤液，沉淀蛋白，离心，重复2次，至无铅为止，将滤液真空浓缩，移至容量瓶，定容备用，测定其峰面积。(3)计算:根据标准曲线方程和试样的峰面积，得到棉籽糖的含量。本发明简单快速、灵敏度高、重现性好、结果准确可靠。因此，本发明所述的测定方法可用于棉籽或棉籽饼粕中棉籽糖的快速常规分析测定。
【专利说明】棉籽饼粕中棉籽糖的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种棉籽饼柏中棉籽糖的测定方法，属于食品添加剂及其检测方法领 域。
【背景技术】
[0002] 棉籽糖又称蜜三糖，是a-D-批喃半乳糖（1 - 6) a-D-批喃葡萄糖（1 - 2) β-D-呋喃果糖，是存在于甜菜、棉籽、蜂蜜、马铃薯、玉米、豆科植物等中的一种低聚糖。在 植物界中，分布最广泛中低聚糖除蔗糖外，就属棉籽糖。
[0003] 长期以来，人们都认为棉籽糖是肠胃胀气因子，常常在加工过程中利用各种方法 将其除去。后来随着人们对棉籽糖的双歧杆菌促生作用的认识，对棉籽糖的看法就有了新 的改变，人们发现棉籽糖除了是一种优良的双歧杆菌增殖因子外，还具有低能量、能抑制肠 内腐败产物、改善排便功能、防止便秘及增强机体免疫力、抵抗肿瘤等多种生理功能。目前， 棉籽糖的分析测定方法，以往有纸色谱、薄层色谱等，但这些方法存在样品前处理复杂、灵 敏度低、杂质干扰大等缺点，且用于定量的准确性低。
[0004] 因此，建立一种简便、快速、准确测定棉籽糖的方法很有必要。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在提供一种简便、快速、准确的棉籽饼柏中棉籽糖含量的测定方法。
[0006] 本发明所述的棉籽饼柏中棉籽糖的测定方法，包括以下步骤： (1)标准曲线制作： 准确称取〇. 25g棉籽糖标准品，用水溶解，定量转移至250mL容量瓶中，并稀释至体积 备用，通过高效液相色谱仪测定其峰面积并计算回归方程及相关系数。
[0007] (2)试样测定： 准确称取5. Og经粉碎并用石油醚回流除脂后的棉籽饼粉于烧瓶中，以料液重量比1:9 加入80%乙醇溶液，于60°C在搅拌下提取lh，抽滤，滤饼再于同样条件下重复提取2次，合 并滤液，用10%醋酸铅溶液沉淀蛋白，离心，重复2次至蛋白除尽，再用草酸除铅至无铅为 止，将所得滤液真空浓缩后，移至25mL容量瓶，并定容至体积备用，通过高效液相色谱仪测 定其峰面积。
[0008] (3)计算： 根据标准曲线方程和试样的峰面积，可得到棉籽饼柏中棉籽糖的含量。
[0009] 优选的，本发明所述的高效液相色谱仪的色谱条件是：迪马C18柱，5μπι 4. 6*200mm ;柱温25°C ;流动相流速为I. Oml/min ;紫外检测器波长254nm。
[0010] 更优选的，本发明所述的流动相为乙腈：水=20 :80的混合液。
[0011] 经测定，本发明所述的测定方法此方法标准曲线线性好，浓度与峰面积间呈正相 关，相关性好，可用于外标法进行定量测定。此方法回收率与精密度试验结果较好，回收 率在99. 2%(n=3)，变异系数为1. 82%，样品重复测定3次的标准差为0. 0884,变异系数为 I. 69%ο
[0012] 本发明所述的测定方法采用高效液相色谱法，本方法具有简单快速、灵敏度高、重 现性好、结果准确可靠等特点。因此，本发明所述的测定方法可用于棉籽或棉籽饼柏中棉籽 糖的快速常规分析测定。
【具体实施方式】
[0013] 实施例一： (1)标准溶液的配制：准确称取0. 25g棉籽糖标准品，用水溶解，定量转移至250mL容 量瓶中，并稀释至体积备用，通过高效液相色谱仪测定其峰面积并计算回归方程及相关系 数如表-1所示。
[0014] 表-1标准曲线
【权利要求】
1. 棉籽饼柏中棉籽糖的测定方法，包括以下步骤： (1)标准曲线制作：准确称取0. 25g棉籽糖标准品，用水溶解，定量转移至250mL容 量瓶中，并稀释至体积备用，通过高效液相色谱仪测定其峰面积并计算回归方程及相关系 数； (2)试样测定：准确称取5. 0g经粉碎并用石油醚回流除脂后的棉籽饼粉于烧瓶中，以 料液重量比1:9加入80%乙醇溶液，于60°C在搅拌下提取lh，抽滤，滤饼再于同样条件下重 复提取2次，合并滤液，用10%醋酸铅溶液沉淀蛋白，离心，重复2次至蛋白除尽，再用草酸 除铅至无铅为止，将所得滤液真空浓缩后，移至25mL容量瓶，并定容至体积备用，通过高效 液相色谱仪测定其峰面积； ⑶计算：根据标准曲线方程和试样的峰面积，可得到棉籽饼柏中棉籽糖的含量。
2. 如权利要求1所述的棉籽饼柏中棉籽糖的测定方法，其特征在于所述的高效液相 色谱仪的色谱条件是：迪马C18柱，5 y m 4. 6*200mm ;柱温25°C ;流动相流速为1. Oml/min ; 紫外检测器波长254nm。
3. 如权利要求1或2所述的棉籽饼柏中棉籽糖的测定方法，其特征在于所述的流动相 为乙腈：水=20 :80的混合液。
【文档编号】G01N30/02GK104391052SQ201410577147
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年10月24日 优先权日:2014年10月24日
【发明者】李勇, 刘文斌 申请人:西安莹朴生物科技股份有限公司