一种快速检测抗体的试纸条的制作方法
【专利摘要】本发明属于生物检测领域，具体涉及一种快速检测抗体的试纸条。所述试纸条是由底板（1）和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫（6）、抗原垫（5）、标记物结合垫（4）、包被膜（3）和吸收垫（2）组成，所述抗原垫上包被有与待测抗体相结合的抗原，所述标记物结合垫上包被有与所述抗原垫上包被的抗原相结合的标记抗体，所述包被膜上固定有检测T线（8）和质控C线（7），所述检测T线上包被有待测抗体的抗体，所述质控C线上包被有与标记抗体相结合的抗体。本发明试纸条解决了病毒抗原由于稳定性差而不容易被标记的问题，具有操作简便、反应快速、特异性强，适合现场检验和经济实用的优点。
【专利说明】一种快速检测抗体的试纸条
【技术领域】
[0001]本发明属于生物检测领域，具体涉及一种快速检测抗体的试纸条。
【背景技术】
[0002]目前，抗体检测的方法众多，除传统的沉淀反应、凝集试验、补体结合试验外，标记免疫测定(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)已成为主要的免疫测定技术，这些方法各自具备自己的优点，但是在便捷性、快速性等方面均存在不足。
[0003]免疫胶体金技术是上世纪80年代继荧光素、放射性同位素和酶三大标记技术后发展起来的固相标记免疫测定技术。该方法最大特点是简单快速、特异敏感、不需仪器设备和试剂，几分钟内就可用肉眼观察到颜色鲜明的检测结果，并可保存其检测结果。近年来，胶体金免疫层析技术己成为当今最快速的免疫学检测技术之一，并越来越受到相关研究领域的关注。
[0004]胶体金免疫层析技术的发展是基于胶体金标记技术的发展，胶体金溶液在一定条件下，由胶体金颗粒表面的负电荷，与蛋白质、多肽等物质上所带的正电荷因静电吸附作用而牢固结合，形成以胶体金标记的蛋白质复合物。这种金标记物可代替酶标记物形成显色反应，形成肉眼可见的条带。
[0005]近年来，疫苗保护性抗体的快速检测日渐兴起，但由于检测方法的局限，已严重限制了该行业的发展。目前，胶体金标记的快速检测抗体的检测试纸都是由样品垫、标记物结合垫、包被膜(其上划有检测线、质控线)和吸收垫组成，根据检测原理的不同大体分为两种:一种是将抗原标金，在标记物结合垫上包被胶体金标记的抗原，在包被膜上用待测抗体的抗体划膜得到检测T线；另一种是将抗原划膜，在标记物结合垫上包被胶体金标记的待测抗体的抗体，在包被膜上用待测抗体的抗体标金得到检测T线。现有研究表明:因为抗体蛋白性质较为稳定，所以对抗体蛋白的胶体金标记较为稳定，因此上述第一种方法所述的抗原的胶体金标记存在颇多问题，因为抗原多为病毒类，性质多样，有的大小甚至比胶体金颗粒还大，且稳定性较差，因此很难直接将抗原标记在胶体金颗粒上；即使勉强能将抗原标记上，也需要抗原达到极高的纯度，而对抗原病毒的纯化是一项难度较大、成本较高的工程；也有人寻找抗原的重组抗原来代替这些天然抗原，但是很多抗原很难寻到能替代的重组抗原，而且即使有，成本也是极高的，由此说明，上述第一种方法的局限性比较高。上述的第二种方法使用待测抗体的抗体进行金标记，这种方法可以避免抗原金标记的问题，但在包被膜上使用抗原划膜得到检测T线，需要抗原具有较高的浓度和纯度，这也增加了产品生产的成本和难度；另外将抗原划到膜上，由于抗原稳定性较差，抗原划膜后，很难长时间保存，因此试纸条的有效期极短。这些都是限制抗体快速检测类试剂盒快速发展的原因。
【发明内容】
[0006]本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种快速检测抗体的试纸条，以实现对抗体的快速检测。
[0007]为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为:
一种快速检测抗体的试纸条，由底板和相互搭接粘贴在底板上的样品垫、抗原垫、标记物结合垫、包被膜和吸收垫组成，所述抗原垫上包被有与待测抗体相结合的抗原，所述标记物结合垫上包被有与所述抗原垫上包被的抗原相结合的标记抗体，所述包被膜上固定有检测T线和质控C线，所述检测T线上包被有待测抗体的抗体，所述质控C线上包被有与标记抗体相结合的抗体。
[0008]按上述方案，所述标记物结合垫、抗原垫和样品垫为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜；所述吸收垫为吸水纸，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
[0009]按上述方案，所述标记抗体为胶体金标记抗体。
[0010]按上述方案，所述抗原垫的制备方法为:使用抗原保护液将抗原进行稀释后均匀铺在玻
璃纤维、无纺布或聚酯膜上，置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥4小时，制成抗原垫；所述抗原保护液的配方为:Na2HPO4 5.72g, NaH2PO4 0.624g，柠檬酸三钠8.5g，蔗糖1g,叠氮钠Ig,水定容至1L。
[0011]按上述方案，所述抗原为粗抗原，其中抗原的含量为40wt°/T50wt%。
[0012]本发明试纸条的检测原理:在样品垫处加入血清或血浆或全血(待检样品)，若样品中含有待测抗体，样品加入后，待测抗体先与抗原垫中的抗原形成抗原-待测抗体复合物，复合物向前移动，复合物中的抗原再与标记物结合垫中的胶体金标记抗体结合，形成待测抗体-抗原-胶体金标记抗体免疫复合物，该复合物由于层析作用沿纸条向前移动，至检测T线，复合物中的待测抗体与检测T线上包被的待测抗体的抗体反应形成待测抗体的抗体-待测抗体-抗原-胶体金标记抗体免疫复合物，该复合物可聚集在检测区，当聚集的复合物达到一定的数量时，则形成一条肉眼可见的条带(T线)，判断结果为阳性；若样品中不含有或含很少量的待测抗体，则不能形成免疫复合物，即不能形成肉眼可见的条带，判断结果为阴性。C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性检测样品均会产生条带。用肉眼直接观察试纸条在5、10、15、20、25、30分钟内的出线情况，并判定检测结果。
[0013]本发明试纸条的使用方法:将试纸条平放，在样品垫加入5μ I血样，用肉眼直接观察在30分钟内检测T线和质控C线的显色情况:质控C线不显色，说明本试验失败；质控C线显色，检测T线不显色(阴性)说明样品中不含有或含有低于检测线值的待测抗体；质控C线和检测T线均显色(阳性)说明样品中含有高于检测线值的待测抗体。
[0014]本发明的有益效果:
(I)与现有技术相比，本发明所述快速检测抗体的试纸条增加了抗原垫的结构，通过在抗原垫上加入抗原保护液并包被能与待测抗体相结合的抗原，在标记物结合垫上包被能与所述抗原垫上包被的抗原相结合的标记抗体，解决了很多病毒因为抗原稳定性差而不容易被标记的问题。另一方面，本发明采用待测抗体的抗体划膜得到检测T线，因为抗体相比较为稳定，因此试纸条的有效期较长。
[0015](2)本发明所述抗原为粗抗原，不需对粗抗原进一步纯化就能达到反应效果，这是因为在试纸条反应层析过程中，已经通过双抗体夹心法对粗纯抗原进行了筛选和纯化，保证了试剂反应的特异性，因此本试剂条的制备成本低，利于应用推广。实验结果表明，利用本发明制备的试纸条检测产品，检测的结果与ELISA检测结果一致，本发明试纸条具有操作简便、反应快速、特异性强，适合现场检验和经济实用的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1为本发明快速检测抗体的试纸条结构示意图。其中，1-底板，2-吸收垫，3-包被膜，4-标记物结合垫，5-抗原垫，6-样品垫，7-质控C线，8-检测T线。
【具体实施方式】
[0017]为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实例。
[0018]如图1所示，一种快速检测抗体的试纸条，由底板I和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫6、抗原垫5、标记物结合垫4、包被膜3和吸收垫2组成，所述抗原垫上包被有与待测抗体相结合的抗原，所述标记物结合垫上包被有与所述抗原垫上包被的抗原相结合的标记抗体，所述包被膜上固定有检测T线8和质控C线7，所述检测T线上包被有待测抗体的抗体，所述质控C线上包被有与标记抗体相结合的抗体。
[0019]所述标记物结合垫4、抗原垫5和样品垫6为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜，所述吸收垫2为吸水纸，所述包被膜3为硝酸纤维素膜。
[0020]所述标记抗体为胶体金标记抗体。
[0021]所述抗原垫5通过使用抗原保护液将抗原进行稀释后均匀铺在玻璃纤维上获得，所述抗原为粗抗原,其中抗原的含量为40wt°/T50wt%。
[0022]实施例1甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸条 1、主要材料
抗原:甲型肝炎病毒，抗原购自武汉赛欣生物技术有限公司，培养的天然病毒，为粗纯，未经纯化，但已灭活，不具有生物危害，用于制备抗原垫。
[0023]鼠抗人IgM抗体，购自厦门波生生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜T线的包被。
[0024]鼠抗甲型肝炎病毒单克隆抗体，购自武汉赛欣生物技术有限公司，用于标记胶体金。
[0025]羊抗鼠IgG抗体，购自杭州隆基生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜质控C线的包被。
[0026]氯金酸:sigma公司产品。
[0027]硝酸纤维素膜:miIIipore公司产品。
[0028]牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白:sigma公司产品。
[0029]其余化学试剂均为分析纯试剂。
[0030]待测抗体:甲型肝炎病毒IgM抗体，临床血清由公司在武汉市血液中心获得，其中甲型肝炎病毒IgM抗体阳性62份，甲型肝炎病毒IgM抗体阴性样本238份。
[0031]甲型肝炎病毒IgM抗体检测试剂盒(ELISA法)，购自北京贝尔生物工程有限公司。国内已注册的商用产品。
[0032]2、标记物结合垫的制备金标记鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的制备:氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后，取10ml胶体金溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，调节PH至
8.0,然后按每10ml胶体金溶液0.5mg抗体加入鼠抗甲肝病毒单克隆抗体0.5mg,继续搅拌30min，再加入终浓度为1%的BSA进行封闭，继续搅拌30min。标记结束后，以1000r/min对标记液进行离心，弃上清，然后将沉淀用复溶溶液复溶至原体积，所述复溶溶液的配方为=Trisl.965g, Casein-Na 2.5g，柠檬酸三钠 2.5g，吐温-20 0.50ml，蔗糖 l0.0g，叠氮钠1.0g，用超纯水定容至1L。将复溶好的金标记溶液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于20%的环境中，干燥12?18小时，制成标记物结合垫。
[0033]3、抗原垫的制备
将获得的甲型肝炎病毒使用抗原保护液稀释到4倍得到抗原液，将稀释好的抗原液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥4小时，制成抗原垫。所述抗原保护液的配方为=Na2HPO4 5.72g,NaH2PO4 0.624g，柠檬酸三钠8.5g,鹿糖1g,叠氮钠Ig,纯化水定容至1L。
[0034]4、包被膜的制备
使用0.02M, pH为7.2的磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgM抗体稀释成2.0 mg/ml (T线溶液)，将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.0mg/ml (C线溶液)。然后使用划膜仪将T线与C线溶液按1.5ul/cm的出液量均匀地包被于NC膜上，NC膜已事先黏贴于底板上，包被完成后，将NC膜置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥3?4小时，制成包被膜。
[0035]5、甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸条的组装
在干燥环境下(温度2(T25°C，相对湿度低于30%)，将包被膜置于洁净环境中，在NC膜的T线端,标记物结合垫(标记物结合垫已事先切裁成6mm宽)紧密压接NC膜2mm,抗原垫(抗原垫已事先切裁成1mm宽)紧密压接标记物结合垫另一侧2mm，样品垫紧密压接抗原垫另一侧4?5mm。最后用切条机将贴好的底板切成4mm宽的试纸条。
[0036]6、甲型肝炎病毒IgM抗体检测试纸条的使用方法
将待检血清或血浆或全血(待检样品)平衡至室温，上述制备好的试纸条平放于试验台上，在样品垫处加入5ul待检样品,若样品中含有甲型肝炎病毒IgM抗体(人甲肝IgM抗体),样品加入后，人甲肝IgM抗体先与抗原垫中甲型肝炎病毒(甲肝抗原)形成抗原-抗体复合物，复合物向前移动，与标记物结合垫中的金标记甲型肝炎病毒单克隆抗体(金标记甲肝单克隆抗体)形成人甲肝IgM抗体-甲肝抗原-金标记甲肝单克隆抗体免疫复合物，该复合物由于层析作用沿纸条向前移动，至检测T线与鼠抗人IgM抗体反应形成鼠抗人IgM抗体-人甲肝IgM抗体-甲肝抗原-金标记甲肝单克隆抗体免疫复合物，该复合物可聚集在检测区，当聚集的复合物达到一定的数量时，则形成一条肉眼可见的条带(T线)，判断结果为阳性；若样品中不含有或含很少量的人甲肝IgM抗体，则不能形成免疫复合物，则不能形成肉眼可见的条带，判断结果为阴性。C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性检测样品均会产生条带。用肉眼直接观察试纸条在5、10、15、20、25、30分钟内的出线情况，并判定检测结果。
[0037]7、临床样品检测结果对照
对公司收集的临床血清样本使用本申请试纸条及商用检测ELISA试剂盒同时进行检测，再对检测结果进行对照。
[0038]以ELISA试剂盒为对照，对人甲肝IgM抗体进行检测，检测出62份甲肝IgM阳性样本，238份甲肝IgM阴性样本，而本试纸条检测出61份甲肝IgM阳性样本，239份甲肝IgM阴性样本，总体符合率为99.33%。临床检测结果表明，本申请试纸条的性能与ELISA试剂盒相比无显著差异，说明本发明适合用于临床检验，具有实用价值。
[0039]实施例2风疹病毒IgG抗体检测试纸条 1、主要材料
抗原:风疹病毒抗原，购自microbix公司，培养的天然病毒，为粗纯，但已灭活，不具有生物危害。用于制备抗原垫。
[0040]鼠抗人IgG抗体，购自厦门波生生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜T线的包被。
[0041]鼠抗风疹病毒单克隆抗体，购自武汉赛欣生物技术有限公司，用于标记胶体金。
[0042]羊抗鼠IgG抗体，购自杭州隆基生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜质控C线的包被。
[0043]氯金酸:sigma公司产品。
[0044]硝酸纤维素膜:miIIipore公司产品。
[0045]牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白:sigma公司产品。
[0046]其余化学试剂均为分析纯试剂。
[0047]临床血清由公司在武汉市血液中心获得，其中风疹病毒IgG抗体阳性192份，IgG抗体阴性样本108份。
[0048]风疹病毒IgG抗体检测试剂盒(ELISA法):购自北京贝尔生物工程有限公司。国内已注册的商用产品。
[0049]2、标记物结合垫的制备
氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后，取10ml胶体金溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，调节PH至8.0，然后按每10ml胶体金溶液0.5mg抗体加入鼠抗风疹病毒单克隆抗体0.5mg,继续搅拌30min，再加入终浓度为1%的BSA进行封闭，继续搅拌30min。标记结束后，以10000r/min对标记液进行离心，弃上清，然后将沉淀用复溶溶液进行复溶至原体积。将复溶好的金标记溶液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于20%的环境中，干燥12?18小时，制成标记物结合垫。
[0050]3、抗原垫的制备
将获得的风疹病毒抗原使用抗原保护液稀释到8倍得到抗原液，将稀释好的抗原液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥4小时，制成抗原垫。
[0051]4、包被膜的制备
使用0.02M, pH为7.2的磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgG抗体(T线溶液)稀释成1.5 mg/ml，羊抗鼠IgG (C线溶液)稀释至1.0mg/ml。然后使用划膜仪将T线与C线溶液按1.5ul/cm的出液量均匀地包被于NC膜上，NC膜已事先黏贴于塑料底板上，包被完成后，将NC膜置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥3?4小时，制成包被膜。
[0052]5、风疹病毒IgG抗体检测试纸条的组装
在干燥环境下(温度2(T25°C，相对湿度低于30%)，将包被膜置于洁净环境中，在NC膜的T线端,标记物结合垫(结合垫已事先切裁成6mm宽)紧密压接NC膜2mm,抗原垫(抗原垫已事先切裁成1mm宽)紧密压接标记物结合垫另一侧2mm,样品垫紧密压接抗原垫另一侧4?5mm,最后用切条机将贴好的底板切成4mm宽的试纸条。
[0053]6、风疹病毒IgG抗体检测试纸条的使用方法
将待检血清或血浆或全血(待检样品)平衡至室温，上述制备好的试纸条平放于试验台上，在样品垫处加入5ul待检样品，若样品中含有风疹病毒IgG抗体，样品加入后，人风疹IgG抗体先与抗原垫中风疹抗原形成抗原-待测抗体复合物，复合物向前移动，与标记物结合垫中的金标记的风疹单克隆抗体形成人风疹IgG抗体-风疹抗原-金标记风疹单克隆抗体免疫复合物，该复合物由于层析作用沿纸条向前移动，至检测T线与鼠抗人IgG抗体反应形成鼠抗人IgG抗体-人风疹IgG抗体-风疹抗原-金标记风疹单克隆抗体免疫复合物，该复合物可聚集在检测区，当聚集的复合物达到一定的数量时，则形成一条肉眼可见的条带(T线)，判断结果为阳性；若样品中不含有或含很少量的风疹IgG抗体，则不能形成免疫复合物，则不能形成肉眼可见的条带，判断结果为阴性。C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性检测样品均会产生条带。用肉眼直接观察试纸条在20分钟内的出线情况，并判定检测结果O
[0054]7、根据世界卫生组织规定的风疹病毒IgG抗体的最低保护滴度为10IU/ml，当风疹病毒IgG抗体浓度> 10IU/ml说明人体对风疹病毒具有抵抗性，当风疹病毒IgG抗体浓度< 10IU/ml说明人体对风疹病毒还没有产生抵抗性，因此本试纸条将检测风疹病毒IgG抗体的检测临界值设置为10IU/ml，T线显线表明风疹病毒IgG抗体的浓度大于等于1IU/ml (有抵抗性)，T线不显线表明风疹病毒IgG抗体的浓度小于10IU/ml (没有抵抗性)。
[0055]8、临床样品检测结果对照
对公司收集的临床血清样本使用本申请所述试纸条及商用检测ELISA试剂盒同时进行检测，再对检测结果进行对照。
[0056]以ELISA试剂盒为对照，对风疹IgG抗体进行检测，检测出192份风疹IgG阳性样本，108份风疹IgG阴性样本，而本申请试纸条检测出191份风疹IgG阳性样本，109份风疹IgG阴性样本，总体符合率为99.33%。临床检测结果表明，本申请试纸条的的性能与ELISA试剂盒相比无显著差异，说明本发明适合用于临床检验，具有实用价值。
[0057]实施例3麻疹病毒IgG抗体检测试纸条 1、主要材料
抗原:麻疫抗原购自microbix公司，培养的天然病毒,为粗纯,但已灭活,不具有生物危害，用于制备抗原垫。
[0058]鼠抗人IgG抗体，购自厦门波生生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜T线的包被。
[0059]鼠抗麻疹病毒单克隆抗体，购自武汉赛欣生物技术有限公司，用于标记胶体金。
[0060]羊抗鼠IgG抗体，购自杭州隆基生物技术有限公司，用于硝酸纤维素膜质控C线的包被。
[0061]氯金酸:sigma公司产品。
[0062]硝酸纤维素膜:miIIipore公司产品。
[0063]牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白:sigma公司产品。
[0064]其余化学试剂均为分析纯试剂。
[0065]临床血清由公司在武汉市血液中心获得，其中麻疹病毒IgG抗体阳性248份，IgG抗体阴性样本52份。
[0066]麻疹病毒IgG抗体检测试剂盒(ELISA法):购自江苏华冠生物技术有限公司，国内已注册的商用产品。
[0067]2、标记物结合垫的制备
氯金酸-柠檬酸三钠还原法制备直径为40nm的胶体金溶液，制备完成后，取10ml胶体金溶液置于磁力搅拌器上缓慢搅拌，调节PH至8.0，然后按每10ml胶体金溶液0.5mg抗体加入鼠抗麻疹病毒单克隆抗体0.5mg,继续搅拌30min，再加入终浓度为1%的BSA进行封闭，继续搅拌30min。标记结束后，以10000r/min对标记液进行离心，弃上清，然后将沉淀用复溶溶液进行复溶至原体积，将复溶好的金标记溶液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于20%的环境中，干燥12-18小时，制成标记物结合垫。
[0068]3、抗原垫的制备
将麻疹病毒抗原使用抗原保护液进行稀释到2倍得到抗原液，将稀释好的抗原液按每ml溶液铺18cm2的比例均匀铺在玻璃纤维上，置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥4小时，制成抗原垫。
[0069]4、包被膜的制备
使用0.02M，pH为7.2的磷酸盐缓冲液将鼠抗人IgG抗体分别稀释成2.0 mg/ml (T线溶液)，羊抗鼠IgG抗体稀释至1.0mg/ml (C线溶液)。然后使用划膜仪将T线与C线溶液按1.5ul/cm的出液量均匀地包被于NC膜上，NC膜已事先黏贴于塑料底板上，包被完成后，将NC膜置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥3?4小时，制成包被膜。
[0070]5、麻疹病毒IgG抗体检测试纸条的组装
在干燥环境下(温度2(T25°C，相对湿度低于30%)，将包被膜置于洁净环境中，在NC膜的T线端,标记物结合垫(结合垫已事先切裁成6mm宽)紧密压接NC膜2mm,抗原垫(抗原垫已事先切裁成1mm宽)紧密压接结合垫另一侧2mm,样品垫紧密压接抗原垫另一侧4?5mm,最后用切条机将贴好的底板切成4mm宽的试纸条。
[0071]6、麻疹病毒IgG抗体检测试纸条的使用方法
将待检血清或血浆或全血(待检样品)平衡至室温，制备好的试纸条平放于试验台上，在样品塾处加入5ul待检样品，若样品中含有人麻疫病毒IgG抗体,样品加入后,人麻疫IgG抗体先与抗原垫中麻疹抗原形成抗原-抗体复合物，复合物向前移动，与标记物结合垫中的金标记麻疫单克隆抗体形成人麻疫IgG抗体-麻疫抗原-金标记麻疫单克隆抗体免疫复合物，该复合物由于层析作用沿纸条向前移动，至检测T线与鼠抗人IgG抗体反应形成鼠抗人IgG抗体-人麻疹IgG抗体-麻疹抗原-金标记麻疹单克隆抗体免疫复合物，该复合物可聚集在检测区，当聚集的复合物达到一定的数量时，则形成一条肉眼可见的条带(T线)，判断结果为阳性；若样品中不含有或含很少量的麻疹IgG抗体，则不能形成免疫复合物，则不能形成肉眼可见的条带，判断结果为阴性。C线作为试剂的质控标准，阳性和阴性检测样品均会产生条带。用肉眼直接观察试纸条在5、10、15、20、25、30分钟内的出线情况，并判定检测结果。
[0072]7、根据世界卫生组织规定的麻疹病毒IgG抗体的最低保护滴度为200mIU/ml，当麻疹病毒IgG抗体浓度> 200mIU/ml说明人体对麻疹病毒具有抵抗性，当麻疹病毒IgG抗体浓度< 200mIU/ml说明人体对麻疹病毒还没有产生抵抗性，因此本试纸条将检测麻疹病毒IgG抗体的检测临界值设置为200mIU/ml，T线显线表明麻疹病毒IgG抗体的浓度大于等于200mIU/ml (有抵抗性)，T线不显线表明麻疹病毒IgG抗体的浓度小于200mIU/ml (没有抵抗性)。
[0073]8、临床样品检测结果对照
对公司收集的临床血清样本使用本申请试纸条及商用检测ELISA试剂盒同时进行检测，再对检测结果进行对照。
[0074]以ELISA试剂盒为对照，对麻疹IgG抗体进行检测，检测出248份麻疹IgG阳性样本，52份麻疹IgG阴性样本，而本试纸条检测出246份麻疹IgG阳性样本，54份麻疹IgG阴性样本，总体符合率为98.67%。临床检测结果表明，本试纸条的性能与ELISA试剂盒相比无显著差异，说明本发明适合用于临床检验，具有实用价值。
[0075]显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种快速检测抗体的试纸条，其特征在于，所述试纸条是由底板和相互紧密搭接粘贴在底板上的样品垫、抗原垫、标记物结合垫、包被膜和吸收垫组成，所述抗原垫上包被有与待测抗体相结合的抗原，所述标记物结合垫上包被有能与所述抗原垫上包被的抗原相结合的标记抗体，所述包被膜上固定有检测T线和质控C线，所述检测T线上包被有待测抗体的抗体，所述质控C线上包被有能与标记抗体相结合的抗体。
2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述标记抗体为胶体金标记抗体。
3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述抗原为粗抗原，其中抗原的含量为40wt%^50wt%o
4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述抗原垫的制备方法为:使用抗原保护液将抗原进行稀释后均匀铺在玻璃纤维、无纺布或聚酯膜上，置于37°C，相对湿度低于40%的环境中，干燥4小时，制成抗原垫；所述抗原保护液的配方为=Na2HPO4 5.72g，NaH2PO40.624g,朽1檬酸三钠8.5g,鹿糖1g,叠氮钠Ig,水定容至1L。
5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述标记物结合垫、抗原垫和样品垫为玻璃纤维、无纺布或聚酯膜。
7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述吸收垫为吸水纸。
【文档编号】G01N33/577GK104330569SQ201410588505
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年10月29日 优先权日:2014年10月29日
【发明者】张薇, 吴边, 金玉翠, 龚华岳, 王方杰, 倪龙泉 申请人:武汉生命科技股份有限公司