同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱荧光检测法
【专利摘要】本发明公开了一种同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱荧光检测法，先将烟用香精香料用乙醇进行振荡萃取，静置后过0.45μm有机相滤膜，得到待测样品溶液；同时配制4种禁限用添加剂的标准溶液，再采用高效液相色谱荧光检测仪分别对待测样品溶液和标准溶液进行检测分析，然后以外标法进行定量分析，计算出烟用香精香料中4种禁限用添加剂的含量；所述4种禁限用添加剂为芝麻酚、β-萘酚、β-细辛醚和黄樟素。本发明实现了烟用香精香料中4种禁限用添加剂的同时测定。由于使用了酚类专用色谱柱，检测时间更短；采用荧光检测器，选择性也较高，基质干扰较小，检出限更低；且前处理不需要除水，操作更为简单。
【专利说明】同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色 谱荧光检测法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及烟用香精香料中4种禁限用添加剂的检测方法，具体地指一种同时测 定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱荧光检测法。
【背景技术】
[0002] 在卷烟中添加香精香料，其作用在于改善卷烟的理化特性、圆润香气、修饰烟香 味、改善吸味、确立产品的风格。烟用香精香料是从带香物质中提取或以人工合成方法得到 并且用于烟草中的致香物质的总称。通常情况下，烟用香精香料是由多种香料和适量溶剂 及其他添加剂按照一定的比例和工艺调配而成。在添加剂中，由于芝麻酚、β -萘酚、β -细 辛醚和黄樟素均有致癌作用，因此被禁止或限制使用。
[0003] 目前，烟草行业分别颁布了 β -萘酚、β -细辛醚的检测标准，均采用气相色谱-质 谱联用（GC/MS)方法；李晶等利用超高效液相色谱-紫外检测（UPLC-UV)方法测定了香精 香料中芝麻酚，而黄樟素的测定方法则主要采用GC/MS。GC/MS测定β-萘酚、β-细辛醚 和黄樟素所需时间较长，UPLC-UV方法专一性较差且易受基质干扰，而液相色谱-荧光检测 (HPLC-FD)方法具有检测速度快、灵敏度高、选择性好等优点。由于芝麻酚、β -萘酚、β -细 辛醚和黄樟素均具有较强的荧光响应，且采用HPLC-FD法检测烟用香精香料中上述4种禁 限用物质的研究未见报道。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的就是要克服现有技术所存在的不足，提供一种同时测定烟用香精香 料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱荧光检测法，旨在为烟用香精香料的质量安全控制 提供参考。
[0005] 为实现上述目的，本发明所提供的同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的 高效液相色谱荧光检测法（HPLC-FD):先将烟用香精香料用乙醇进行振荡萃取，静置后过 0. 45 μ m有机相滤膜，得到待测样品溶液；同时配制4种禁限用添加剂的标准溶液，再采用 高效液相色谱荧光检测仪分别对待测样品溶液和标准溶液进行检测分析，然后以外标法进 行定量分析，计算出烟用香精香料中4种禁限用添加剂的含量；所述4种禁限用添加剂为芝 麻酚、β-萘酚、β -细辛醚和黄樟素；其中，高效液相色谱荧光检测仪的检测条件：
[0006] 米用色谱柱为 Phenomenex Luna C18 柱，其规格为 150_X4. 6mm i. d.，5 μ m， lOOA,柱温为 3〇°c ;
[0007] 采用梯度洗脱，流动相A为水，流动相B为乙腈；以体积百分比计算，梯度洗脱程 序如下：0?5111；[11，60 (%流动相六线性降至5(%流动相4，并保持71]1；[11;12?141]1；[11，5 (%流动 相A线性升至60%流动相A，并保持lmin ;流速为lmL/min ;进样量：20 μ L ;总分析时间为 15min ；
[0008] 荧光检测条件：
[0009] 0· OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm ;
[0010] 4. 50min，激发波长为331nm，发射波长为353nm ;
[0011] 5. 50min，激发波长为265nm，发射波长为365nm ;
[0012] 6. 50min，激发波长为288nm，发射波长为325nm ;
[0013] 15. OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm。
[0014] 本发明将烟用香精香料用萃取溶剂进行振荡萃取时，所述萃取溶剂为甲醇、乙醇 和乙腈，振荡萃取的速率为200r/min，振荡萃取时间20?30min ;优选地，萃取溶剂为乙醇， 所述烟用香精香料与萃取溶剂的萃取比例为〇. 〇5g/mL，振荡萃取时间20min。
[0015] 本发明的有益效果在于：本发明由于使用了酚类专用色谱柱，检测时间更短；采 用荧光检测器，选择性也较高，基质干扰较小，检出限更低；且前处理不需要除水，操作更为 简单。本发明实现了烟用香精香料中芝麻酚、β -萘酚、β -细辛醚和黄樟素的同时测定，灵 敏度高，重现性好，可为烟用香精香料添加剂监督检验工作提供方法参考。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1为不同萃取时间下4种目标物的萃取效率的变化曲线图。
[0017] 图2为4种添加剂标准溶液的液相色谱图。
[0018] 图3为样品溶液的液相色谱图。
【具体实施方式】
[0019] 为了更好地解释本发明，以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说 明，但它们不对本发明构成限定。
[0020] 实施例
[0021] 本实施例所采用的材料、试剂与仪器如下：
[0022] 甲醇、乙醇、乙腈（色谱纯，德国CNW公司）；芝麻酚（纯度彡98.0%，上海诗丹 德生物技术有限公司）萘酚（纯度彡99.0% )、β-细辛醚（纯度彡71.0% ;德国 Dr. Ehrenstorfer 公司；黄棒素（纯度 99. 4%，美国 ChemService 公司）。
[0023] Dionex P680高效液相色谱仪（配有RF2000荧光检测器，美国Dionex公司）； AL204 电子天平（感量：0.0001g，瑞士 Mettler Toledo 公司）；Milli_Q Advantage A10 超 纯水仪（美国Millipore公司）；HY-5A回旋式振荡器（金坛市城东新瑞仪器厂）；0· 45 μ m 有机相滤膜（上海安谱科学仪器有限公司）。
[0024] 测定方法如下：
[0025] 先称取0. 5g烟用香精香料样品于50mL锥形瓶中，准确加入10mL乙醇，在振荡器 上以200r/min速率振荡萃取20min，静置后过0. 45 μ m有机相滤膜，得到待测样品溶液；同 时配制4种禁限用添加剂的标准溶液，再采用高效液相色谱荧光检测仪分别对待测样品溶 液和标准溶液进行检测分析，然后以外标法进行定量分析，计算出烟用香精香料中4种禁 限用添加剂的含量；其中，高效液相色谱荧光检测仪的检测条件：
[0026] 米用色谱柱为 Phenomenex Luna C18 柱，其规格为 150_X4. 6mm i. d.，5 μ m， lOOA;柱温为 3〇°c ;
[0027] 采用梯度洗脱，流动相A为水，流动相B为乙腈；以体积百分比计算，梯度洗脱程 序如下：0?5111；[11，60(%流动相六线性降至5(%流动相4，并保持71]1；[11 ;12?141]1；[11，5(%流动 相A线性升至60%流动相A，并保持lmin ;流速为lmL/min ;进样量：20 μ L ;总分析时间为 15min ；
[0028] 荧光检测条件：
[0029] 0· OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm ;
[0030] 4. 50min，激发波长为331nm，发射波长为353nm ;
[0031] 5. 50min，激发波长为265nm，发射波长为365nm ;
[0032] 6. 50min，激发波长为288nm，发射波长为325nm ;
[0033] 15. OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm。
[0034] 采用本发明的方法检测了湖北省烟草产品质量监督检验站接受的委托检测样留 样，19个烟用香精香料样品中均未检出芝麻酚、β-萘酚、β-细辛醚和黄樟素这4种添加 齐U，如图3所示。说明烟草行业对禁限用添加剂的控制非常严格，4种禁限用添加剂在烟草 行业中的使用比较规范。
[0035] 样品前处理条件的选择及优化
[0036] 1、萃取溶剂的选择
[0037] 为选择合适的萃取溶剂，通过在同一样品中加标的方法，选择甲醇、乙醇、乙腈为 萃取溶剂进行实验，测定结果如表1所示。
[0038] 表1不同萃取溶剂对4种目标物的萃取效率（mg/kg)
[0039]
【权利要求】
1. 一种同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱荧光检测法，其特 征在于：先将烟用香精香料用萃取溶剂进行振荡萃取，静置后过〇. 45 y m有机相滤膜，得到 待测样品溶液；同时配制4种禁限用添加剂的标准溶液，再采用高效液相色谱荧光检测仪 分别对待测样品溶液和标准溶液进行检测分析，然后以外标法进行定量分析，计算出烟用 香精香料中4种禁限用添加剂的含量；所述4种禁限用添加剂为芝麻酚、0 -萘酚、0 -细 辛醚和黄樟素；其中，高效液相色谱荧光检测仪的检测条件： 米用色谱柱为 Phenomenex Luna C18 柱，其规格为 150mmX4.6mm i.d.，5iim，l〇〇A; 柱温为30 C ; 采用梯度洗脱，流动相A为水，流动相B为乙腈；以体积百分比计算，梯度洗脱程序如 下：0?5min，60 %流动相A线性降至5 %流动相A，并保持7min ; 12?14min，5 %流动相A线 性升至60%流动相A，并保持lmin ;流速为lmL/min ;进样量：20 y L ;总分析时间为15min ; 荧光检测条件： 0? OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm ; 4. 50min，激发波长为331nm，发射波长为353nm ; 5. 50min，激发波长为265nm，发射波长为365nm ; 6. 50min，激发波长为288nm，发射波长为325nm ; 15. OOmin，激发波长为280nm，发射波长为340nm。
2. 根据权利要求1所述的同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱 荧光检测法，其特征在于：将烟用香精香料用萃取溶剂进行振荡萃取时，所述萃取溶剂为甲 醇、乙醇和乙腈，振荡萃取的速率为200r/min，振荡萃取时间20?30min。
3. 根据权利要求1所述的同时测定烟用香精香料中4种禁限用添加剂的高效液相色谱 荧光检测法，其特征在于：将烟用香精香料用萃取溶剂进行振荡萃取时，所述萃取溶剂为乙 醇，所述烟用香精香料与萃取溶剂的萃取比例为〇. 〇5g/mL，振荡萃取的速率为200r/min， 振荡萃取时间20min。
【文档编号】G01N30/02GK104280474SQ201410591722
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2014年10月29日 优先权日:2014年10月29日
【发明者】李韵, 汪宏毅, 廖晓玲, 肖少红, 陈慧 申请人:中国烟草总公司湖北省公司