一种血清氨检测试剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种血清氨检测试剂，包括体积比为6:1的试剂1和试剂2。其中试剂1包括pH=8.0的tris缓冲液、乳酸脱氢酶、纳米粒子、乙二胺四乙酸、还原型辅酶Ⅰ、牛血清蛋白和二磷酸腺苷；试剂2包括pH=8.0的tris缓冲液、α-酮戊二酸、谷氨酸脱氢酶、牛血清蛋白和二磷酸腺苷。本发明的试剂为双试剂，具有操作简便，稳定性好，准确度高，普遍适用于各种型号的全自动生化分析仪的优异性能，是一种值得推广的新型氨检测试剂。
【专利说明】一种血清氛检测试剂
[0001]
【技术领域】 本发明涉及医学检验【技术领域】，具体涉及一种血清氨检测试剂。
[0002]
【背景技术】 人体内血氨（PIasma ammonia)含量极微，但氨对人体有毒，能影响神经细胞的新陈代 谢。血氨的来源增加和去路减少，都会引起血氨增高。正常情况下，氨在肝脏中转变为尿素。 严重肝脏疾病时，氨不能从循环中清除，引起血氨增高，高血氨有神经毒，引起肝性脑病(肝 昏迷)，因此成人血氨测定对肝性脑病的诊断和鉴别具有极其重要的意义。此外，血氨测定 对儿科诊断Reye' s综合征非常有用，该征有严重低血糖、大块肝坏死、急性肝衰，并伴有 肝脂肪变性。在肝酶谱增高前，即见血氨增高。
[0003] 氨测定的方法有微量扩散法、离子交换法、酶法和氨电极法等。目前应用最多的方 法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。常规氨检测试剂(谷氨酸脱氢酶两点 法）为三试剂，主要存在以下缺陷：1.不适用于常见普通全自动生化分析仪，目前医疗检验 机构中使用的全自动生化分析仪只有两个试剂盘，因此三试剂检测试剂盒不能直接进行全 自动操作；2.使用过程繁琐。使用前须手动将试剂1中的a液和b液按照一定比例混合， 才能进行全自动操作，大大增加操作人员的工作量；3.在手工操作过程中容易造成操作失 误，并存在不可避免的操作误差。
[0004]
【发明内容】
为克服现有技术中存在的问题，本发明提供了一种血清氨检测试剂。该试剂为双试剂， 具有操作简便，稳定性好，准确度高，普遍适用于各种型号的全自动生化分析仪的优异性 能。
[0005] 本发明采用的技术方案如下： 一种血清氨检测试剂包括体积比为6:1的试剂1和试剂2 ; 所述的，试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) l〇-50mmol 乳酸脱氢酶 2KU 纳米粒子 10_50mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 还原型辅酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 0. 5-lg 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol 去离子水加至IL ; 所述的，试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) l〇-50mmol a _丽戊二酸 30 mmol 谷氨酸脱氢酶 25 KU 牛血清蛋白 0. 5-lg 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol 去离子水加至1L。
[0006] 所述的，纳米粒子为Y -Fe2O3纳米粒子，其粒径为3-50nm。
[0007] 优选的，试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 3Ommol 乳酸脱氢酶 2KU 纳米粒子 25mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 还原型辅酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 8 g 二磷酸腺苷 0. 4mmol 去离子水加至1L。
[0008] 优选的，试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 2Smmol a _丽戊二酸 30 mmol 谷氨酸脱氢酶 25 KU 牛血清蛋白 〇.7g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去离子水加至1L。
[0009] 本发明的有益效果： 1)本发明的试剂在试剂1中添加乳酸脱氢酶，乳酸脱氢酶可去除血清中干扰氨测定的 丙酮酸，Y-Fe2O3纳米粒子可增强乳酸脱氢酶的活性，使得反应进行的更彻底，有效去除丙 酮酸的干扰。
[0010] 2)本发明的试剂在试剂1中添加二磷酸腺苷作为酶反应的活化剂，可减弱还原型 辅酶I对酶活性部位的结合，防止还原型辅酶I过量引起的抑制，使谷氨酸脱氢酶在碱性 缓冲液中的稳定性增加，并缩短反应时间。
[0011] 3)本发明的氨检测试剂，将传统的三试剂改为双试剂，简化操作过程，减轻操作人 员的工作量，提高工作效率，普遍适用于各种型号的全自动生化分析仪。
[0012] 4)本发明的氨检测试剂，稳定性好，准确度高，是一种值得推广的新型氨检测试 剂。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图1本发明实施例1至3制得的试剂与对照组试剂稳定性试验结果图。
【具体实施方式】
[0014] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。
[0015] 实施例1 一种血清氨检测试剂包括体积比为6:1的试剂1和试剂2 ; 试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 10mmol 乳酸脱氢酶 2KU Y -Fe2O3 纳米粒子 50mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 还原型辅酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 5 g 二磷酸腺苷 0. 6 mmol 去离子水加至IL ; 试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 50mmo 1 a _丽戊二酸 30 mmol 谷氨酸脱氢酶 25 KU 牛血清蛋白 〇. 5 g 二磷酸腺苷 0. 6 mmol 去离子水加至1L。
[0016] 其中，Y -Fe2O3纳米粒子的粒径为3nm。
[0017] 实施例2 一种血清氨检测试剂包括体积比为6:1的试剂1和试剂2 ; 试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 130mmol 乳酸脱氢酶 2KU Y -Fe2O3 纳米粒子 25mmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 还原型辅酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 〇. 8 g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去离子水加至IL ; 试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 2Smmol a _丽戊二酸 30 mmol 谷氨酸脱氢酶 25 KU 牛血清蛋白 〇.7g 二磷酸腺苷 0. 4 mmol 去离子水加至1L。
[0018] 其中，Y -Fe2O3纳米粒子的粒径为28nm。
[0019] 实施例3 一种血清氨检测试剂包括体积比为6:1的试剂1和试剂2 ; 试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 50mmo 1 乳酸脱氢酶 2KU Y -Fe2O3 纳米粒子 IOmmol 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol 还原型辅酶I 〇. 2 g 牛血清蛋白 Ig 二磷酸腺苷 0. I mmol 去离子水加至IL ; 试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 10mmol a _丽戊二酸 30 mmol 谷氨酸脱氢酶 25 KU 牛血清蛋白 Ig 二磷酸腺苷 0. I mmol 去离子水加至1L。
[0020] 其中，Y -Fe2O3纳米粒子的粒径为50nm。
[0021] 本发明的一种血清氨检测试剂的使用方法为：选用具有双试剂功能的全自动生化 分析仪，如东芝40全自动分析仪，配制试剂1和试剂2,先将试剂1加至全自动生化分析仪 37°C预孵育3分钟，再将试剂2加至试剂1中，混匀后于全自动生化分析仪37°C延迟孵育5 分钟，试剂1和试剂2的体积比为4:1，调整生化分析仪的参数，在样品盘的对应位置放置好 蒸馏水、朗道校准品和样本，具体操作如表1所示。
[0022] 表1氨检测试剂的使用方法
【权利要求】
1. 一种血清氨检测试剂，其特征在于，它包括体积比为6:1的试剂1和试剂2 ; 所述试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) l〇-50mmol/L 乳酸脱氢酶 2KU/L 纳米粒子 10_50mmol/L 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol/L 还原型辅酶I 〇. 2 g/L 牛血清蛋白 0.5-1 g/L 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol/L 去离子水加至1L ; 所述试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) l〇-50mmol/L a _ 丽戊二酸 30 mmol/L 谷氨酸脱氢酶 25 KU/L 牛血清蛋白 0.5-1 g/L 二憐酸腺苷 0. 1-0. 6 mmol/L 去离子水加至1L。
2. 根据权利要求1所述的氨检测试剂，其特征在于，所述纳米粒子为Y_Fe203纳米粒 子，其粒径为3-50nm。
3. 根据权利要求1所述的氨检测试剂，其特征在于，所述试剂1的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 30mmol/L 乳酸脱氢酶 2KU/L 纳米粒子 25mmol/L 乙二胺四乙酸 5. 3 mmol/L 还原型辅酶I 〇. 2 g/L 牛血清蛋白 0.8 g/L 二磷酸腺苷 0. 4mmol/L 去离子水加至1L。
4. 根据权利要求1所述的氨检测试剂，其特征在于，所述试剂2的组分为： tris 缓冲液（pH=8. 0) 25mmol/L a _ 丽戊二酸 30 mmol/L 谷氨酸脱氢酶 25 KU/L 牛血清蛋白 0. 7g/L 二磷酸腺苷 0. 4 mmol/L 去离子水加至1L。
【文档编号】G01N33/52GK104374906SQ201410697748
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】靖百谦, 张永英, 谭柏清, 甘宜梧, 王绮, 赵新, 肖慧 申请人:山东博科生物产业有限公司