一种天麻灵芝颗粒的检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种天麻灵芝颗粒的检测方法，所述药物主要由天麻、灵芝、制黄精、淫羊藿和制何首乌制备而成，所述检测方法包括对颗粒中天麻、淫羊藿和/或灵芝的薄层色谱鉴别以及对天麻素和/或淫羊藿苷的含量测定。所述检测方法准确，灵敏度高，重复性好，检测结果稳定，可有效检测天麻灵芝颗粒的质量，各检测项标准能保证药物疗效。
【专利说明】一种天麻灵芝颗粒的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种天麻灵芝颗粒的检测方法，属于药品技术的领域。
【背景技术】
[0002] 肝肾功能不足，主要指肝肾阴虚。就是说精血虚少。这样会出现头晕，因脑藏髓， 为肾精所化，而血是神志活动的物质基础，故肝肾虚会大脑失养而头晕。目干涩，因肝血和 肾精有养眼功能，所畏目得血而能视就是指有肝血和肾精的濡养，才能看到世上的一切。也 可能出现双手振颤现象，因肝血和肾精对关节有营养和濡润作用。也有可能会中风，因肝肾 阴虚，则无力制阳，阳盛则易出现现在所说的脑血管意外现象。
[0003] 随着高新技术的不断发展以及我国人口的不断增长，人们的生活节奏越来越快。 许多人将不可避免的出现肝肾不足引起的失眠，心悸，腰膝酸软等症状，目前在遇到心慌心 悸、失眠多梦等神志不安的病症时，发病机制尚不清楚，由于发病机制复杂，西医多以镇静 剂和安眠药等来治疗；但这些药物的不良反应往往比较大，并且可能产生依赖作用。而中医 应对此类疾病时，往往可采用效果明显且不良反应较小的药物。以天麻、灵芝、制黄精、淫羊 藿和制何首乌制成的天麻灵芝颗粒的药物具有补益肝肾，养心安神的功效，本品还可用于 肝肾不足引起的失眠，头晕，目眩，心悸，腰膝酸软，体虚乏力。为了更好地控制该产品的质 量，确保临床药效，本发明提供了这种药物的检测方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于，提供一种天麻灵芝颗粒的检测方法；所述检测方法准确，灵敏 度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物的临床药效。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现： 一种天麻灵芝颗粒的检测方法，所述药物由天麻50-150份、灵芝300-400份、制黄精300-400份、淫羊藿50-150份和制何首乌100-210份按照下述方法制备而成。
[0006] 具体地说，所述天麻灵芝颗粒的药物，按照重量组份计算，由天麻100份、灵芝333 份、制黄精333份、淫羊藿100份和制何首乌167份制备而成。
[0007] 其制备方法为：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干 燥，粉碎，制成颗粒； 具体地说，其制备方法为：颗粒剂这样制备：按比例称取天麻和灵芝加10倍的水煮2 小时,滤过,取黄精、淫羊藿、制首乌加入合煎,加水煎煮两次,第一次2小时，加8倍量水，第 二次1小时，加6倍量水。滤过，合并三次滤液，浓缩至60°C相对密度为1. 30?1. 31的稠 膏，备用；加入糊精：蔗糖粉=5 :14混合均匀制软材，迅速过14目筛进行制粒，于60°C干燥 箱内干燥，16目筛整粒，制成lOOOg，即得。
[0008] 所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对天麻、淫羊藿 和/或灵芝的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对天麻素和/或淫羊藿苷的含量测定。
[0009] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述天麻的鉴别方法为：取药物颗粒Ig加15ml 水饱和的正丁醇超声30min，滤过，滤液挥干，残渔加水20ml溶解，加在已处理好的内径I. 5cm柱高16cm的DlOl型大孔树脂柱上用水20ml洗脱，弃去洗脱液，再加20%乙醇25ml 洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加Iml甲醇作为供试品溶液；取天麻素对照品加甲醇制成Iml 含Img的溶液作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各10μ1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲醇：水=9 :1:0. 2为展开剂，展开取出晾干， 喷10%磷钥酸乙醇溶液在105°C下加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位 置上，显相同颜色斑点。
[0010] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述淫羊藿的鉴别方法为：取药物颗粒2g加乙 醇30ml，回流30min，滤过，滤液挥干残渣加水30ml溶解，乙醚振摇提取两次每次20ml，弃去 乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解作为供试 品溶液；取淫羊藿对照药材〇. 5g加乙醇20ml回流30min，滤过，滤液蒸干加无水乙醇lml， 作为对照药材溶液；另取淫羊藿苷对照品加无水乙醇制成Iml含Img的对照品溶液；照中 国药典薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸 乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1为展开剂，展开取出晾干，喷三氯化铝溶液在l〇5°C下加 热5min，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱中，在与对照药材色谱与对照品色谱相应位置 上，显相同颜色斑点。
[0011] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述灵芝的鉴别方法为：取药物颗粒8g加60ml 乙醇回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药 材lg，加20ml乙醇，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述两种溶 液各5μ1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚60?90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1 上层液为展开剂，展开取出晾干，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱中，在与对照药材色 谱色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0012] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述天麻素的含量检测方法为：照中国药典附 录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93为流动相，检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于7000 ; 对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品2. 51mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取lml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 勻，即得含天麻素〇. 025lmg/ml的对照品溶液； 供试品溶液的制备：取颗粒剂〇. 3g研细，精密称定，置25ml量瓶中，加40%甲醇约 20ml，用功率150W，频率50kHz的超声处理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0013] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述淫羊藿苷的含量检测方法为：照中国药典 附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以以乙腈：水 =30 : 70为流动相，检测波长为270nm;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500 ; 对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品5. 13mg置IOml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每Iml含0.513mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂0.6g研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超声处理40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45μm微孔滤膜滤过，取续 滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0014] 前述天麻灵芝颗粒的检测方法中，所述药物这样检测： 性状：棕色至棕褐色的颗粒，味先甜后苦； 鉴别：（1)取药物颗粒Ig加15ml水饱和的正丁醇超声30min，滤过，滤液挥干，残渣加 水20ml溶解，加在已处理好的内径I. 5cm柱高16cm的DlOl型大孔树脂柱上用水20ml洗 脱，弃去洗脱液，再加20%乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加Iml甲醇作为供试品溶 液；取天麻素对照品加甲醇制成Iml含Img的溶液作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱 法实验，吸取上述三种溶液各10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲醇：水 =9 :1:0. 2为展开剂，展开取出晾干，喷10%磷钥酸乙醇溶液在105°C下加热至斑点清晰；供 试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0015] (2)取药物颗粒2g加乙醇30ml，回流30min，滤过，滤液挥干残渔加水30ml溶解， 乙醚振摇提取两次每次20ml，弃去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干， 残渣加无水乙醇Iml使溶解作为供试品溶液；取淫羊藿对照药材0. 5g加乙醇20ml回流 30min，滤过，滤液蒸干加无水乙醇lml，作为对照药材溶液；另取淫羊藿苷对照品加无水乙 醇制成Iml含Img的对照品溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各5μ1， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1为展开剂，展开取 出晾干，喷三氯化铝溶液在l〇5°C下加热5min，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱中，在与 对照药材色谱与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0016] (3)取药物颗粒8g加60ml乙醇回流30min，滤过，滤液蒸干，残渔加甲醇Iml溶 解，作为供试品溶液；另取灵芝对照药材lg，加20ml乙醇，同法制得对照药材溶液；照中国 药典薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚 60?90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1上层液为展开剂，展开取出晾干，在紫外灯365nm下检 测；供试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
[0017] 检查：应符合《中国药典》颗粒剂项下有关的各项规定； 含量测定：（1)天麻素：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：〇. 2%磷 酸=7 :93为流动相，检测波长为220nm;理论板数按天麻素峰计算应不低于7000 ; 对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品2. 51mg，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取lml，置10ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，即得含天麻素〇. 〇251mg/ml的对照品溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂〇. 3g研细，精密称定，置25ml量瓶中，加40%甲醇约 20ml，用功率150W，频率50kHz的超声处理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得； (2)淫羊藿苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以以乙腈：水 =30 : 70为流动相，检测波长为270nm;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500 ; 对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品5. 13mg置IOml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每Iml含0. 513mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂0.6g研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超声处理40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45μm微孔滤膜滤过，取续 滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即 得。
[0018] 发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究 实验例：检测方法研究 (一） 样品及对照品来源 1、样品：天麻，灵芝，制黄精，淫羊霍和制何首乌。
[0019] 颗粒剂：按照本发明所述颗粒剂制备方法进行制备，天麻素(批号 ： 110807-200205);淫羊藿苷（批号：110737-200415)。
[0020]2、对照品：天麻对照药材(批号：120944-200608);淫羊藿对照药材(批号： 110737-200912));灵芝对照药材（批号：120968-200906) (二） 鉴别。
[0021] 1、天麻的薄层鉴别： (1)供试品溶液的制备：取天麻灵芝颗粒Ig加15ml水饱和的正丁醇超声30min，滤过， 滤液挥干，残渣加水20ml溶解，加在已处理好的DlOl型大孔树脂柱上（内径I. 5cm柱高 16cm)用水20ml洗脱，弃去洗脱液，再加20%乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇 Iml作为供试品溶液。
[0022] 对照品溶液的制备：取天麻素对照品加甲醇制成Iml含Img的溶液作为对照品溶 液。
[0023] 对照药材溶液的制备：取天麻对照药材Ig加20ml水水浴回流30min，滤过，滤液 蒸干，残渣加乙醚25ml振摇提取，弃去乙醚液，水层用正丁醇振摇提取，取正丁醇液蒸干， 残渣加甲醇lml，作为对照药材溶液。
[0024] 阴性对照溶液的制备：按照处方制作缺乏天麻药材的颗粒，再按照供试品的制作 方法制成阴性对照溶液。
[0025] 薄层色谱层析条件：吸取上述四种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以 乙酸乙酯-甲醇-水（9 :1:0. 2)为展开剂，展开取出晾干，喷10%磷钥酸乙醇溶液在105°C 下加热至斑点清晰，供试品，对照药材与对照品在相应位置上显相同颜色斑点。结果见图1。 结果表明，在与对照药材色谱相应的位置上均显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，与原剂 型的鉴别结果一致，故列入质量标准正文。由于对照药材的提取方法与供试品溶液的制备 方法不一致，故不列入标准中。见图1。
[0026] 2、淫羊藿的薄层鉴别： (1)供试品溶液的制备：取天麻灵芝颗粒2g加乙醇30ml，回流30min，滤过，滤液挥干 残渣加水30ml溶解，乙醚振摇提取两次每次20ml，弃去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取 乙酸乙酯液蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解作为供试品溶液。
[0027] 对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品加无水乙醇制成Iml含Img的溶液，作为对 照品溶液。
[0028] 对照药材溶液的制备：对照药材0. 5g加乙醇20ml回流30min，滤过，滤液蒸干加 无水乙醇lml，作为对照药材溶液。
[0029] 阴性对照溶液的制备：按照处方制作缺乏淫羊藿药材的颗粒，再按照供试品的制 作方法制成阴性对照溶液。
[0030] 薄层色谱层析条件：照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VIB)实验，吸取 上述四种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10 :1 : I: 1)为展开剂，展开取出晾干，喷三氯化铝溶液在l〇5°C下加热5min，在紫外灯365nm下检 测，供试品，对照药材与对照品在相应位置上显相同颜色斑点。结果见图2。结果表明，在与 对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上均显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，故列入质 量标准正文。见图2。
[0031] 3、灵芝的薄层鉴别： 供试品溶液的制备：取天麻灵芝颗粒8g加60ml乙醇回流30min，滤过，滤液蒸干，残渔 加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液。
[0032] 对照药材溶液的制备：取天麻对照药材lg，加20ml乙醇回流30min，滤过，滤液蒸 干，残渣加甲醇Iml溶解，作为供试品溶液。
[0033] 阴性对照溶液的制备：取天麻药材的阴性样品8g，同法制成阴性对照溶液。
[0034] 薄层色谱层析条件：照薄层色谱法（《中国药典》2010版一部附录VIB)实验，吸取 上述三种溶液各5μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90°C)_甲酸乙酯-甲 酸（10 :5 :1)上层液为展开剂，展开取出晾干，在紫外灯365nm下检测，供试品，对照药材在 相应位置上显相同颜色斑点，阴性对照无干扰，故列入质量标准正文。结果见图3。
[0035](三）含量测定： 天麻素 1方法：（1)仪器与试药：WAT-GZ050926CWJ型WATERS高效液相色谱仪(美国WATERS公 司）；SPD-20A紫外-可见检测器，waters2487 ;515HPLC pumpJJW-3KV精密净化稳压电源 (东方集团易事务公司）；7725型手动进样；HT-200A型柱温箱；AE240型电子天平（上海梅 特勒仪器有限公司）；SK8210HP型超声波清洗机(上海科导超声仪器有限公司，功率250W， 频率33kHz);乙腈(天津市科密欧化学试剂有限公司，批号：20130416);甲醇(天津市科密 欧化学试剂有限公司，批号：20130417)均为色谱纯；水为娃哈哈纯净水(批号：20130316); 磷酸(重庆川江化学试剂厂，批号=20130725)。天麻素（中国药品生物制品检定所，批号： 110807-200205)。
[0036](2)色谱条件：色谱柱：Kromasil C18柱（4.6 mm x250 mm)，流动相：乙腈-〇· 2% 磷酸（7 :93)，流速：I. 0 mL/min;柱温：28?;检测波长：220nm ;理论塔板数：以天麻素 计不低于5000。
[0037] (3)检测波长的选择 参考《中国药典》2010年版天麻药材含量测定项下天麻素测定方法，检测波长为 220nm，故按法定标准选择220nm为检测波长。
[0038] (4)系统适用性试验 取供试品溶液，天麻素对照品溶液及缺天麻阴性对照溶液，照色谱条件项下色谱条 件，各进样10μL，测得HPLC图谱，见图4。图谱表明阴性对照溶液色谱峰不干扰供试 品溶液色谱峰中的天麻素峰，即本试验条件下天麻素与其他组分分离完全，分离度远大于 1. 5,根据不同色谱柱比较结果，理论塔板数以野黄芩苷峰计，应不低于5000。见图4-图6。
[0039] 2线性关系考察： (1)对照品储备液的制备 精密称取天麻素对照品2. 51mg，置IOml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀，精密量取lml，置IOml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每Iml中含天麻素 0·0251mg)。
[0040] (2)标准曲线的绘制 分别精密吸取2，4,6,8，10，12 PL对照品溶液注入液相色谱仪中，记录色谱，以峰面 积A对进样量C (Pg)进行线性回归，得线性回归方程：y=l. 6Ε+6x-16711(r=0. 9996)。线 性范围：0. 0502?0. 3012Pg。结果见表1、图7。
【权利要求】
1. 一种天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述药物由天麻50-150份、灵芝 300-400份、制黄精300-400份、淫羊藿50-150份和制何首乌100-210份按照下述方法制备 而成：根据配方称取各药物，用水煎煮提取，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，粉碎，制成颗粒； 所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对天麻、淫羊藿和/或灵 芝的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对天麻素和/或淫羊藿苷的含量测定。
2. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述天麻的鉴别方法为： 取药物颗粒lg加15ml水饱和的正丁醇超声30min，滤过，滤液挥干，残渔加水20ml溶解，力口 在已处理好的内径1. 5cm柱高16cm的D101型大孔树脂柱上用水20ml洗脱，弃去洗脱液， 再加20%乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加 lml甲醇作为供试品溶液；取天麻素对 照品加甲醇制成lml含lmg的溶液作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述 三种溶液各10 U 1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲醇：水=9 :1:0. 2为展开 齐U，展开取出晾干，喷10%磷钥酸乙醇溶液在l〇5°C下加热至斑点清晰；供试品色谱中，在与 对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
3. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述淫羊藿的鉴别方法 为：取药物颗粒2g加乙醇30ml，回流30min，滤过，滤液挥干残渣加水30ml溶解，乙醚振摇 提取两次每次20ml，弃去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加无水 乙醇lml使溶解作为供试品溶液；取淫羊藿对照药材0. 5g加乙醇20ml回流30min，滤过， 滤液蒸干加无水乙醇lml，作为对照药材溶液；另取淫羊藿苷对照品加无水乙醇制成lml含 lmg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各5 yl，分别点于同一 硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1为展开剂，展开取出晾干，喷三氯 化铝溶液在l〇5°C下加热5min，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱中，在与对照药材色谱 与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
4. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述灵芝的鉴别方法为： 取药物颗粒8g加60ml乙醇回流30min，滤过，滤液蒸干，残渔加甲醇lml溶解，作为供试品 溶液；另取灵芝对照药材lg，加20ml乙醇，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄层色谱法 实验，吸取上述两种溶液各5 y 1，分别点于同一娃胶G薄层板上，以石油醚60?90°C:甲酸 乙酯：甲酸=10 :5 :1上层液为展开剂，展开取出晾干，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱 中，在与对照药材色谱色谱相应位置上，显相同颜色斑点。
5. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述天麻素的含量检测 方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93为流动相，检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于7000 ; 对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品2. 51 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取lml，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 勻，即得含天麻素〇. 025 lmg/ml的对照品溶液； 供试品溶液的制备：取颗粒剂〇. 3g研细，精密称定，置25ml量瓶中，加40%甲醇约 20ml，用功率150W，频率50kHz的超声处理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即得。
6. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述淫羊藿苷的含量检 测方法为：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以以乙腈：水 =30 : 70为流动相，检测波长为270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500 ; 对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品5. 13mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每lml含0. 513mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂0.6 g研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超声处理40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45 ii m微孔滤膜滤过，取续 滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即 得。
7. 如权利要求1所述天麻灵芝颗粒的检测方法，其特征在于：所述药物这样检测： 性状：棕色至棕褐色的颗粒，味先甜后苦； 鉴别：（1)取药物颗粒lg加15ml水饱和的正丁醇超声30min，滤过，滤液挥干，残渣加 水20ml溶解，加在已处理好的内径1. 5cm柱高16cm的D101型大孔树脂柱上用水20ml洗 脱，弃去洗脱液，再加20%乙醇25ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加 lml甲醇作为供试品溶 液；取天麻素对照品加甲醇制成lml含lmg的溶液作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱 法实验，吸取上述三种溶液各10 Ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲醇：水 =9 :1:0. 2为展开剂，展开取出晾干，喷10%磷钥酸乙醇溶液在105°C下加热至斑点清晰；供 试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点； (2) 取药物颗粒2g加乙醇30ml，回流30min，滤过，滤液挥干残渔加水30ml溶解，乙醚 振摇提取两次每次20ml，弃去乙醚液，再用乙酸乙酯20ml提取，取乙酸乙酯液蒸干，残渣加 无水乙醇lml使溶解作为供试品溶液；取淫羊藿对照药材0. 5g加乙醇20ml回流30min， 滤过，滤液蒸干加无水乙醇lml，作为对照药材溶液；另取淫羊藿苷对照品加无水乙醇制成 lml含lmg的对照品溶液；照中国药典薄层色谱法实验，吸取上述三种溶液各5 yl，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=10 :1 :1 :1为展开剂，展开取出晾干， 喷三氯化铝溶液在105°C下加热5min，在紫外灯365nm下检测；供试品色谱中，在与对照药 材色谱与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点； (3) 取药物颗粒8g加60ml乙醇回流30min，滤过，滤液蒸干，残渔加甲醇lml溶解，作 为供试品溶液；另取灵芝对照药材lg，加20ml乙醇，同法制得对照药材溶液；照中国药典薄 层色谱法实验，吸取上述两种溶液各5 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚60? 90°C:甲酸乙酯：甲酸=10 :5 :1上层液为展开剂，展开取出晾干，在紫外灯365nm下检测；供 试品色谱中，在与对照药材色谱色谱相应位置上，显相同颜色斑点； 检查：应符合《中国药典》颗粒剂项下有关的各项规定； 含量测定：（1)天麻素：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0. 2%磷 酸=7 :93为流动相，检测波长为220nm ;理论板数按天麻素峰计算应不低于7000 ; 对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品2. 51 mg，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶 解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取lml，置10 ml棕色量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，即得含天麻素〇. 〇251mg/ml的对照品溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂〇. 3g研细，精密称定，置25ml量瓶中，加40%甲醇约 20ml，用功率150W，频率50kHz的超声处理30min，取出，放冷，用40%甲醇稀释至刻度，摇 匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得； 测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即得； (2)淫羊藿苷：照中国药典附录高效液相色谱法试验： 色谱条件与系统适用性试验：以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂；以以乙腈：水 =30 : 70为流动相，检测波长为270nm ;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1500 ; 对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品5. 13mg置10ml容量瓶中，加甲醇至刻 度，制成每lml含0. 513mg的溶液，即得； 供试品溶液的制备：取颗粒剂0.6 g研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，超声处理40min，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0. 45 ii m微孔滤膜滤过，取续 滤液，即得； 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 U 1，注入液相色谱仪，测定，即 得。
【文档编号】G01N30/02GK104483435SQ201410722096
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月3日 优先权日:2014年12月3日
【发明者】张永萍, 徐剑, 吴静澜, 刘莉, 王海洋, 刘耀 申请人:贵阳德昌祥药业有限公司