一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量试剂盒及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒及其应用方法。该试剂盒是基于糖类物质在酸作用下脱水生成羟甲基糠醛，再与显色剂缩合成有色化合物的原理研制而成，其包括4种试剂：其中试剂Ⅰ为葡萄糖、果糖和蔗糖的混合标准品；试剂Ⅱ为邻甲苯胺试剂，用于测定葡萄糖含量；试剂Ⅲ为间苯二酚试剂，用于测定果糖含量；试剂Ⅳ为苯酚试剂，用于测定总糖含量。利用该试剂盒同时测定葡萄糖、果糖和总糖含量，具有特异性高、灵敏度好的特点，可实现葡萄糖、果糖及总糖高通量、快速检测，样品处理量大，成本也相对较低，适用于蜂蜜及果蔬等样品中葡萄糖、果糖和总糖的含量测定，特别适用于现场大规模的样品分析。
【专利说明】一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量试剂盒及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品活性成分检测分析领域，具体涉及一种同时快速测定葡萄糖、果 糖和总糖含量的试剂盒及其应用方法。
【背景技术】
[0002] 蜂蜜中糖分含量是评价蜂蜜质量优劣的主要依据之一。《食品安全国家标准蜂 蜜》（GB14963-2011)规定了蜂蜜中糖分的含量要求，其采用液相色谱示差折光检测法测定 蜂蜜中果糖、葡萄糖等糖分的含量（GB/T 18932.22)。此外，有关蜂蜜中糖分的检测方法还 包括滴定法、旋光法、紫外-可见分光光度法、近红外光谱技术等。但目前广泛使用的这些 方法存在检测成本高、操作复杂繁琐、实验周期长或不能同时检测多种糖分等问题，难以适 应快速、大批量的检测需求。因此，本发明开发了一种简便、快速，成本相对较低，能够同时 测定葡萄糖、果糖和总糖含量的方法及试剂盒，可适用于蜂蜜及果蔬等样品中葡萄糖、果糖 和总糖的含量测定。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒及其 应用方法，该试剂盒具有特异性高、灵敏度好的特点，可实现葡萄糖、果糖及总糖高通量、快 速检测，样品处理量大，成本也相对较低，特别适用于现场大规模的样品分析。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒，其包括试剂I、试剂II、试剂III和 试剂IV ;试剂I为葡萄糖、果糖和蔗糖标准品的混合溶液；试剂II为邻甲苯胺试剂，用于测 定葡萄糖含量；试剂III为间苯二酚试剂，用于测定果糖含量；试剂IV为苯酚试剂，用于测定 总糖含量。
[0005] 试剂I是将葡萄糖、果糖和蔗糖标准品各0. OOflOg，于临用时加蒸馏水溶解并 定容至IOOmL ;试剂II是将硫脲0. l~lg溶于75mL冰醋酸中，再加入邻甲苯胺广30mL、饱 和硼酸4mL，混匀后加冰醋酸至IOOmL,置棕色瓶中保存；试剂III是将0. 1~2 g间苯二酚溶 于IOOmL盐酸溶液中，所用盐酸溶液是将水和浓盐酸按体积比2 :1配制而成；试剂IV是将 0. l~10g苯酚加蒸馈水定容至50mL。
[0006] 所述同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒可用于蜂蜜中葡萄糖、果糖 和总糖含量的测定，其测定包括如下步骤： 1) 如表1所示，取微孔板，于A1~A5、B1~B5、C1~C5的孔中依次加入体积递减的试剂I， 用于绘制葡萄糖、果糖及总糖的标准曲线，AU Bl、Cl孔中试剂I的体积为10?200 ii L， 另于A6?A8、B6?B8、C6?C8的号孔中加入10?200 ii L的水作为空白对照； 2) 其余微孔以每3排3列为1个测定单元，每排依次加入体积递减的蜂蜜样品溶液Sn ; 3) 在装有试剂或样品溶液的微孔中，每三排按顺序分别加入5?150 UL试剂II、 5?150 ii L试剂III、5?150 ii L试剂IV +5?150 ii L浓硫酸； 4) 将微孔板加盖后于60-95°C下水浴5飞O分钟后，用酶标仪或紫外-可见分光光度计 分别于630nm、480nm和490nm处测定各孔的吸光度值； 5) 将样品溶液的吸光度值分别代入所得到的标准曲线中，计算出样品溶液中葡萄糖、 果糖及总糖的含量：如将Dl?D3孔得到的数据代入Al?A5所绘制的标准曲线中，计算 得到样品S2中的葡萄糖含量为X1、X2、X3,再计算其平均值；将El?E3孔得到的数据代入 Bl?B5所绘制的标准曲线中，计算得到样品S2中的果糖含量为Yl、Y2、Y3,再计算其平均 值；将Fl?F3孔数据代入Cl?C5所绘制的标准曲线中，计算得到样品S2中总糖的含量 为Z1、Z2、Z3,再计算其平均值。
[0007] 表1微孔板加样表
【权利要求】
1. 一种同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包 括试剂I、试剂II、试剂III和试剂IV ;试剂I为葡萄糖、果糖和蔗糖标准品的混合溶液；试剂 II为邻甲苯胺试剂，用于测定葡萄糖含量；试剂III为间苯二酚试剂，用于测定果糖含量；试 剂IV为苯酚试剂，用于测定总糖含量。
2. 根据权利要求1所述同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量的试剂盒，其特征在 于：试剂I是将葡萄糖、果糖和蔗糖标准品各〇. 〇l~l〇g，于临用时加蒸馏水溶解并定容至 100mL ;试剂II是将硫脲0. l~lg溶于75mL冰醋酸中，再加入邻甲苯胺广30mL、饱和硼酸 4mL，混匀后加冰醋酸至100mL，置棕色瓶中保存；试剂III是将0. 1~2 g间苯二酚溶于100mL 盐酸溶液中，所用盐酸溶液是将水和浓盐酸按体积比2 :1配制而成；试剂IV是将0. l~10g 苯酚加蒸馈水定容至50mL。
3. -种如权利要求1所述同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量试剂盒的应用方法， 其特征在于：用于蜂蜜中葡萄糖、果糖和总糖含量的测定。
4. 根据权利要求3所述同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量试剂盒的应用方法，其 特征在于：包括如下步骤： 1) 取微孔板，于前三排的1飞号孔中依次加入体积递减的试剂I，用于绘制葡萄糖、果 糖及总糖的标准曲线，1号孔中试剂I的体积为10?200 y L，另于前三排的61号孔中加 入10?200 iiL的水作为空白对照； 2) 其余微孔以每3排3列为1个测定单元，每排依次加入体积递减的蜂蜜样品溶液； 3) 在装有试剂或样品溶液的微孔中，每三排按顺序分别加入5?150i!L试剂II、 5?150 ii L试剂III、5?150 ii L试剂IV +5?150 ii L浓硫酸； 4) 将微孔板加盖后于60-95°C下水浴5飞0分钟后，用酶标仪或紫外-可见分光光度计 分别于630nm、480nm和490nm处测定各孔的吸光度值； 5) 将样品溶液的吸光度值分别代入所得到的标准曲线中，计算出样品溶液中葡萄糖、 果糖及总糖的含量。
5. 根据权利要求4所述同时快速测定葡萄糖、果糖和总糖含量试剂盒的应用方法，其 特征在于：所述微孔板为96孔或384孔； 所述蜂蜜样品溶液的浓度为10mg/mL。
【文档编号】G01N21/31GK104360012SQ201410725916
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年12月4日 优先权日:2014年12月4日
【发明者】史培颖, 姚宏, 缪晓青 申请人:福建农林大学