一种快速测定血清或血浆中甘胆酸含量的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种定量检测甘胆酸（CG）的检测试剂盒及其制备方法和用途。本发明提供一种定量检测甘胆酸（CG）的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含甘胆酸（CG）抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的甘胆酸（CG）抗体采用荧光微球标记。本发明所提供的定量检测甘胆酸（CG）的检测试剂盒首次将甘胆酸（CG）通过荧光微球免疫层析技术进行检测，兼具灵敏性和特异性，具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
【专利说明】一种快速测定血清或血浆中甘胆酸含量的试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种快速测定血清或血浆中甘胆酸含量的 试剂盒及其制备方法和用途。
【背景技术】
[0002] 甘胆酸（CholyglyCine，CG)是胆酸与甘氨酸结合而成的结合型胆酸，在肝细胞 内，胆固醇经过及其复杂的酶促反应，转变成初级胆汁酸。其中有胆酸（CA)和鹅去氧胆酸 (CD-CA)。胆酸的类固醇核上有三个羟基（C3、C7、C12)，侧链末端的羟基以肽键与甘氨酸结 合。
[0003] CG由肝细胞合成，正常代谢途径为肠肝循环，经毛细胆管、胆管排入胆囊，随同胆 汁进入十二指肠，帮助食物消化。95%胆酸在回肠末端重吸收，经门静脉再回肝脏，由肝细 胞摄取再利用。在血清中主要以蛋白结合形式存在，溢入体循环的总量小于1%。在正常情 况下，外周血中胆酸含量甚微，正常成人无论空腹或餐后，其血清CG浓度稳定在低水平。 当肝细胞受损时，肝细胞摄取CG能力下降，致使血中CG含量增高；胆汁郁滞时，肝脏排泄胆 酸发生障碍,而返流血液循环的CG含量增高，也使血CG含量增高。测定血清甘胆酸（CG) 是评价肝细胞功能及其肝胆系物质循环功能的敏感指标之一。
[0004] 临床上急性肝炎、慢性活动性肝炎、原发性肝癌、肝硬化、慢迁肝、梗阻性肝病、 肠一肝循环障碍、胆石症伴黄疸、胆管、胆囊排泄功能障碍患者血CG均明显高于正常人。 [0005] 甘胆酸同时也是妊娠晚期血清中最主要的胆汁酸组分。正常妊娠时孕妇血清CG 水平随孕周逐步增高，大量雌激素会引起肝细胞膜的改变，减少窦状膜浆的流动性，从而出 现胆汁分泌减少，返流入血，出现妊娠期内胆汁淤积现象，CG水平升高。胎盘绒毛静脉腔 内外均处于高浓度胆汁酸刺激之中，引起血管收缩，胎盘绒毛表面血管痉挛，氧合血流量减 少，导致胎儿缺氧，可出现各种并发症，如胎儿宫内窘迫、早产等。
[0006] 目前已知的甘胆酸检测方法有放射免疫法（RIA)、酶联免疫吸附法（ELISA)、化学 发光法（CL)等。但这些方法均存在较多缺陷，如放射免疫法同位素试剂具有放射性污染及 有效期较短和操作不方便等弊端，酶联免疫吸附法操作较为繁琐，耗时较长，不适宜临床上 使用。化学发光法尽管灵敏度较高，但需要专用的测定设备，费用较高不利于推广。而胶乳 增强免疫比浊法操作简便、可适用于全自动生化分析仪，检测时间不到10分钟适合临床推 广。但目前我国市场上的甘胆酸检测试剂盒准确度、灵敏度、重复性仍然较差。
【发明内容】
[0007] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种快速测定血清或血浆 中甘胆酸（CG)含量的试剂盒，用于解决现有技术中的问题。
[0008] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种快速测定血清或血浆中甘胆酸 (CG)含量的试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依 次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包含CG单克隆抗体，所述 硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的CG单克隆抗体采用荧光微球标 记。
[0009] 优选的，所述金标垫上的CG单克隆抗体采用180nm荧光微球标记，EX (nm) = 650/ Em (nm) = 670,具有信号受背景干扰小，检测灵敏度高，结果重复性好的优点。
[0010] 优选的，所述底板为PVC底板。
[0011] 优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样 端较远一侧。
[0012] 优选的，所述检测线上包被有CG单克隆抗体。所述金标垫上的CG单克隆抗体与 检测线上的CG单克隆抗体可以是相同的抗体，也可以是不同的抗体。
[0013] 优选的，质控线上包被羊抗鼠抗体。
[0014] 优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、TriS-HCl缓冲 液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液 的浓度为20-200mM。
[0015] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 5_50mM〇
[0016] 优选的，所述缓冲液还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、 PEG8000和PEG20000中的任意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
[0017] 优选的，所述缓冲溶液还包括表面活性剂，所述表面活性剂选自S-19 TWEEN 20、 S-20TWEEN 80、S-13 TRITON X-45、S-14 TRITON X-100、S-15 TRITON X305 中的任意一种 或多种的组合，所述表面活性剂的浓度为10?50g/L。
[0018] 优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，本发明所述的金标垫在 预处理时所使用的预处理缓冲液包括下列组分：水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠 和甘氨酸，且水苏糖、明矾、果糖二磷酸钠、六偏磷酸钠、甘氨酸的总浓度为3. 5 - 7. 5g/L， 缓冲液的pH值为7. 2 - 7.6。
[0019] 优选的，各组分在缓冲液中的浓度为：
[0020]
【权利要求】
1. 一种定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，包括试纸卡，试纸卡包括底板、及位于底板 表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述金标垫上包 含CG抗体，所述硝酸纤维素膜上包被有检测线和质控线，所述金标垫上的CG抗体采用荧光 微球标记。
2. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述硝酸纤维 素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样端较远一侧。
3. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述检测线上 包被有CG抗体。
4. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，质控线上包被 羊抗鼠抗体。
5. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述样品垫采 用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲 液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为20-200mM。
6. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述金标垫采 用缓冲液处理，所述缓冲液选自甘氨酸缓冲液、Tri s-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多 种的组合，缓冲液的浓度为5-50mM。
7. 根据权利要求6所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液 中还包括反应增强剂，所述反应增强剂选自PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG20000中的任 意一种，所述反应增强剂的浓度为10?50g/L。
8. 如权利要求1所述的定量检测甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，还包括卡壳，所 述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所 述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位置与所述检测线和质控线的位置相配合，所 述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
9. 如权利要求1所述的定量检测脂甘胆酸CG的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试 剂盒用于定量检测血清或血浆中甘胆酸CG的含量。
10. 根据权利要求1?9任一权利要求所述的定量检测脂甘胆酸CG的检测试剂盒的制 备方法，具体包括如下步骤： 1) 用荧光微球标记的甘胆酸（CG)抗体溶液喷涂经预处理的金标垫，制得包含甘胆酸 (CG)抗体的金标垫； 2) 在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂甘胆酸（CG)抗体及羊抗鼠抗体，制 得包被后的硝酸纤维素膜； 3) 将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴在底 板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
【文档编号】G01N33/577GK104360071SQ201410736270
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2014年12月5日 优先权日:2014年12月5日
【发明者】陈亨宇 申请人:重庆乾德生物技术有限公司