甜茶素的质量控制方法
【专利摘要】本发明公开了一种以蔷薇科悬钩子属植物甜茶为原料，提供一种高纯度甜茶素的制备方法和质量控制方法，其发明特点是：取甜茶植物提取后，经大孔树脂柱吸附，用HPLC检测，收集含有甜茶素的流分，再用反相制备高效液相法分离，对所收集的每一份洗脱液利用分析型高效液相色谱检测，合并保留高纯度甜茶素组分，采用薄层色谱和液相色谱进行质量控制，该方法不仅能提高甜茶素纯度，而且能降低生产成本。
【专利说明】甜茶素的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种药材的质量控制方法领域，具体涉及一种甜茶素的质量控制方 法。
【背景技术】
[0002] 甜茶素是一种二萜糖苷类化学成分，是植物活性成分之一，也是许多植物和药品 标准质量控制的指标性成分。目前尚未相应的国家药品标准物质，国内外对甜茶素对照品 的系统研宄未见报道，参照中药化学对照品（供含量测定用）的技术要求，对甜茶素化学对 照品进行研宄，建立甜茶素化学对照品的批量提取工艺、纯度与含量以及杂质检查的分析 测定方法，从而建立甜茶素化学对照品的技术标准，为其作为中药化学对照品以及药材和 制剂的质量标准研宄提供科学基础和保证。
[0003] 高纯度的甜茶素对照品，是控制植物甜茶及含甜茶的质量的技术关键，众多企业、 科研和检验部门都需要高纯度的甜茶素对照品，其市场需求很大，由于甜茶素在药材中的 含量低，提取分离技术要求很高、难度很大。本发明进行甜茶素中药化学标准品制备及其质 量控制技术研宄，解决高纯度甜茶素化学对照品的问题，对中药现代化的作用是显而易见 的，具有重大的实际意义和学术价值。
[0004] 甜茶素是从甜茶叶植物分离得到的活性物质，已有文献报道甜茶素的提取方法， 如：1.【题名】制备色谱法在纯化甜茶苷工艺中的应用：研宄了从甜茶叶中纯化甜茶苷的制 备工艺。首先用沸水从甜茶叶中提取甜茶苷，提取3次，每次lh，再利用HP-20大孔吸附树 脂对甜茶苷粗提物进行预纯化，以90%乙醇为洗脱液，洗脱6倍柱体积；浓缩去除乙醇后， 用D-941阴离子交换树脂脱色，水洗并干燥得到甜茶苷粗产品，纯度为68. 6%。最后甜茶 苷粗产品经制备色谱纯化后，得到纯度为97. 9 %的甜茶苷，色谱条件为流动相:V# = 70:30，流速10111171^11，上样量2001^。2.【题名】广西瑶山甜茶中甜茶素的提取工艺筛选： 优选广西瑶山甜茶中甜茶素的最佳提取工艺。运用正交试验法设计实验，采用高效液相法 进行测定，以提取液中甜茶素的含量为指标进行筛选。3.【题名】广西甜茶苷柱纯化工艺研 宄：以含70 %的广西甜茶粗提取物为原料，通过柱纯化与重结晶对甜茶苷进行提纯，从而 制备高纯度的甜茶苷单体。4.【题名】大孔吸附树脂提取甜茶苷的研宄：从6种大孔树脂 中筛选了适宜的提取分离甜茶苷的吸附剂，研宄了大孔吸附树脂提取甜茶苷的工艺，包括 甜茶苷溶液的质量浓度、PH值和流速对吸附过程的影响，解吸荆及解吸温度对解吸过程的 影响。5.【题名】利用"广西甜茶"生产98%甜茶苷的新工艺：广西甜茶叶一粉碎一双组分 溶剂套提一真空减压浓缩一水溶性壳聚糖絮凝澄清一高效离心分离一大孔吸附树脂精制 -离子交换树脂脱色、提纯一脱盐树脂脱盐、脱苦和提纯一复合脱色一真空减压浓缩一喷 雾干燥一生产出彡98%甜茶苷。6.【题名】甜茶素的研制：甜茶原料的处理一浸提一浓缩 -吸附分离一浓缩一喷雾干燥一包装。7.【高纯度甜茶甙的制备】以甜茶叶为原料，经水 提、柱层析、重结晶等手段，制备出单体，并对其用熔点、TLC、液相色谱进行纯度检测，红外 光谱、核磁共振进行结构表征，表明该化舍物为甜茶甙。
[0005] 上述方法从不同角度论述了甜茶素的提取分离，分离纯度较高，但纯度均未达到 中药化学对照品的要求，即纯度大于98%，分离过程繁琐，且没有甜茶素纯度与质量控制方 法，无法满足高纯度甜茶素化学对照品的需要。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的为了克服现有的甜茶素纯度低、收率低或生产成本高的不足，以及 无系统甜茶素提取纯化与质量控制方法，提供一种高纯度甜茶素的制备及其质量控制方 法，该方法制备得到的甜茶素纯度高、质量好，可以作为化学对照品或标准品，质量控制方 法有效、稳定、均一。
[0007] 本发明药材来源：
[0008] 甜茶：蔷薇蔷薇科悬钩子属植物甜茶RubussuavissirnusS.Lee的叶子。
[0009] 甜茶素：从甜茶叶子中提取、分离、精制、纯化而制得，英文名：rubusoside。
[0010] 分子式：C32H5tlO13;
[0011] 结构式：
[0012]
【权利要求】
1. 一种甜茶素的质量控制方法，其特征在于甜茶素样品采用高效液相色谱法测定，其 色谱条件为： 色谱柱为十八烷基键合硅胶填充剂； 分别以乙腈-水体积比为10-90:90-10、甲醇-水体积比为20-80:90-10为流动相； 检测波长205-215nm ; 流速为〇. 5?5晕升/分钟。
2. 如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于： 分别以乙腈-水体积比为50:50、甲醇-水体积比为40:60为流动相； 检测波长205、210nm; 流速为〇. 8?1. 2晕升/分钟； 含量与纯度测定：分别用2个流动相溶剂系统和2个检测波长，记录色谱图至主成分的 出峰保留时间的2. 5倍以上，用面积归一化法计算含量，结果系统测定样品含量在均98% 以上；杂质检查，分别在不同系统记录的色谱图中，除溶剂峰外，杂质峰面积总和结果均小 于 2. 0%〇
3. 如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于甜茶素的质量控制还包括薄层色 谱检测方法，用甜茶素对照品参比的方法，其色谱条件为，以硅胶G为层析板，分别以乙酸 乙酯-丙酮-乙酸-水重量比例8-10:3-5:1-2:1-2为展开剂，氯仿-甲醇-水重量比例 15-25:6-10:0. 5为展开剂，乙酸乙酯-甲醇-水重量比例12-20:2-5:0. 5为展开剂；然后 碘显色，置于白光下检视，在薄层色谱中三个展开系统下均为黄色的单一的荧光斑点，则代 表纯度符合要求，否则不符合要求。
4. 如权利要求3所述的质量控制方法，其特征在于： 取甜茶素样品用甲醇制lmg/ml的溶液，在同一硅胶G上，按不同的点样量梯度点样，点 样量分别为20 y g、40 y g、60 y g、80 y g、100 y g ;分别以乙酸乙酯-丙酮-乙酸-水重量比 例8:3:1:1 ;氯仿-甲醇-水重量比例20:6:0. 5 ;乙酸乙酯-甲醇-水重量比例16:3:0. 5 为展开剂；置展开缸分别展开，展距为15cm，然后碘显色，置于白光下检视，在5个不同浓度 的梯度点样及三个展开系统薄层色谱中，均为黄色的单一的荧光斑点。
5. 如权利要求1-4任何一项所述的质量控制方法，其特征在于，所述的甜茶素样品由 以下方法制备而成： 1) 提取：取甜茶干燥叶子，加水提取，浓缩，过滤，经大孔树脂柱层析，用乙醇-水溶液 体系进行梯度洗脱，收集乙醇体积百分含量为40 % -80 %的洗脱液，合并，浓缩，即得甜茶 素粗结晶； 2) 精制：用制备型高效液相色谱法分离纯化甜茶素粗结晶，用C-18色谱柱，配合甲 醇-水体系进行梯度洗脱，用甲醇-水体系将甜茶素粗结晶溶解后，注入制备型高效液相色 谱仪，收集纯度在90%以上的甜茶素溶液，减压浓缩，即得。
6. 如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于： 所述步骤1)中，梯度洗脱时分组收集不同浓度的乙醇洗脱液，不同洗脱液采用薄层 色谱法检测，用甜茶素对照品参比的方法，其色谱条件为：以硅胶G为层析板，以乙酸乙 酯-丙酮-乙酸-水重量比例8-10:3-5:1-2:1-2为展开剂，或者氯仿-甲醇-水重量比例 15-25:6-10:0. 5为展开剂，或者乙酸乙酯-甲醇-水重量比例12-20:2-5:0. 5为展开剂，展 距为15cm;碘显色，置于白光下检视，选择在薄层色谱中，黄色单一荧光斑点亮度高的洗脱 液，合并，浓缩，即得甜茶素粗结晶。
7. 如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于： 所述的步骤2)精制中，分别收集纯度在90% -98%之间和纯度大于98%以上的洗脱 液，减压浓缩，得到纯度在90% -98%之间以及大于98%以上的甜茶素。
8. 如权利要求5所述的质量控制方法，其特征在于： 所述的步骤2)精制中，收集纯度在90 %以上的甜茶素溶液后，采用高效液相色谱法再 次测定其纯度，其色谱条件为： 色谱柱为十八烷基键合硅胶填充剂； 分别以乙腈-水体积比为10-90:90-10,甲醇-水体积比为20-80:90-10为流动相； 检测波长205-215nm ; 流速为〇. 5?5晕升/分钟。
【文档编号】G01N30/88GK104483424SQ201410789690
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月18日 优先权日:2014年12月18日
【发明者】黄艳, 刘布鸣, 莫建光, 冯军, 柴玲 申请人:广西壮族自治区中医药研究院