一种透射电镜检测古代丝织品的方法
【专利摘要】本发明公开了一种透射电镜检测古代丝织品的方法，采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。本发明的有益成果为：1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操作简便，易于分析。
【专利说明】—种透射电镜检测古代丝织品的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于古代丝织品的检测领域，尤其涉及一种透射电镜检测古代丝织品的方法。
【背景技术】
[0002]丝绸是中华民族宝贵的文化和物质遗产，但是近年来关于丝绸的起源问题却众说纷纭，难以有一个简便的科学论据。关于古代丝绸的检测，传统的检测方法主要有显微镜观察，光谱，质谱分析等，但是由于受到墓葬环境的影响，丝绸已经腐烂不堪，面目全非，并且受到杂质的干扰，谱图出现很多杂峰，后期解析极为困难。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提出一种快速、简单的透射电镜检测古代丝织品的方法。
[0004]为此本发明所采取的技术方案是:一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2C03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40_60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为
0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120 μ L的PBS溶液，II组加入80-120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0005]本发明采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸溃于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。
[0006]本发明的有益成果为:1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操
作简便，易于分析。
【具体实施方式】
[0007]实施例1采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入质量浓度为1.0ml的1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、II，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80 μ L的PBS溶液，II组加入80 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0008]实施例2采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.3ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体35 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在10000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°〇下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入100 μ L的PBS溶液，II组加入100 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释30倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成60nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0009]实施例3采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在11000r/min下离心60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°〇下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入120 μ L的PBS溶液，II组加入120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为
7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
【权利要求】
1.一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4 ; B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将10ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子； C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2CO3溶液将10ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在.9000-11000r/min下离心40_60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为.0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存； D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120 μ L的PBS溶液，II组加入80-120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育Ih ;然后在B组中加入.2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟； E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
【文档编号】G01N23/00GK104406992SQ201410845958
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】李毅, 杨颖超, 王秉 申请人:浙江理工大学