用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂及制备和检测方法
【专利摘要】本发明提供了一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂及制备和检测方法；旨在提供一种检测灵敏度高，检测结果可靠的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，以及提供一种全程封闭推注式，避免溶液本身特殊的腥臭味对操作者的刺激，同时减短溶液接触空气的时间，避免快速氧化造成假阳性结果，充分保证检测结果准确性的检测方法；该用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，由下述重量百分数的组分制成：0.03％-2％的亚甲基蓝、5％-10％果糖、0.1％-1％抗坏血酸、1％-5％叶酸、40％二甲基亚砜、3％-5％乙酸-乙酸钠缓冲液、0.1％-1％表面活性剂，余量为纯化水。
【专利说明】用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂及制备和检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种检测试剂，具体地说，是一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂， 本发明还涉及该检测试剂的制备方法和检测方法。
【背景技术】
[0002] 目前，用于上皮组织进行细胞特殊染色的方法主要有醋酸白化反应、碘试验、以及 亚甲基蓝染色等。特殊染色液体外诊断疾病有很长的历史，是一种侵入式体外染色诊断方 法，广泛用于上皮组织等常规病变的初筛。
[0003] 醋酸白化反应是通过3 % -5 %乙酸溶液，涂抹在上皮组织上，等待一段时间后观 察所涂抹的上皮组织有无白化反应，若有则被怀疑有肿瘤细胞，此方法特异性差，易造成假 阳。碘试验是基于糖原反应，特异性同样较低。
[0004] 专利CN103808551A利用虹吸法将溶液储存于棉签杆中，运输过程中溶液易渗出 和氧化，使用时染色液流出缓慢，操作不便。
[0005] 中国专利：2014100628449中提及调节染色液pH采用的是乙酸，我们研宄发现， 当乙酸的量达到3% -5%时，容易极易氧化，且pH值也下降到3左右，不符合该染色液 pH5. 0-6. 0的要求，若乙酸含量达不到3% -5%，就无法实现醋酸白化反应，不能实现棉签 染色与肿瘤组织醋酸白化反应双重定位。
【发明内容】
[0006] 针对上述问题，本发明的目的在于提供一种检测灵敏度高，检测结果可靠的用于 上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，以及提供一种全程封闭推注式，避免溶液本身特殊的腥臭 味对操作者的刺激，同时减短溶液接触空气的时间，避免快速氧化造成假阳性结果，充分保 证检测结果准确性的检测方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明提供的第一技术方案是这样的：
[0008] 该用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的试剂由下述重量百分数的组分制 成：0. 03% -2%的亚甲基蓝、5% -10%果糖、0. 1% -1%抗坏血酸、1% -5%叶酸、40%二甲 基亚砜、3% -5%乙酸-乙酸钠缓冲液、0. 1% -1 %表面活性剂，余量为纯化水。
[0009] 进一步的，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的3%-5%乙酸-乙酸 钠缓冲液的pH值为5. 5 ±0. 5。
[0010] 进一步的，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的表面活性剂为Tween-20。
[0011] 为制备该检测试剂，本发明的另外一个技术方案是这样的：
[0012] 上述用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的制备方法，依次包括下述步骤：
[0013] 1)按权利要求1所述的重量百分数称取各个组分；
[0014] 2)将步骤1)称取的叶酸溶入二甲基亚砜中，搅拌溶解；
[0015] 3)将亚甲基蓝加入至步骤2)溶液中，搅拌溶解后继续搅拌40-80min;
[0016] 4)将表面活性剂加入步骤3)溶液中，搅拌混匀；
[0017] 5)将果糖和抗坏血酸和碱性水溶液加入至步骤4)溶液中再次搅拌溶解；
[0018] 6)将乙酸-乙酸钠缓冲液按加入至步骤5)溶液中搅拌均匀即得。
[0019] 为了更好的使用本发明，本发明还有一个技术方案是这样的：
[0020] 上述用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，该方法检测时采用下述检测 组件取样后，棉签插入杆端部插接在装有权利要求1所述的检测试剂的试剂瓶的接入管端 部，倒置挤压瓶体，使检测试剂流向取样后的棉签头；
[0021] 所述的检测组件包括一试剂瓶以及与试剂瓶配套使用的棉签，所述试剂瓶包括螺 纹状软瓶体，瓶体上设有柱状空心接入管，所述瓶体与接入管一体成型，所述棉签包括一空 心插入杆，插入杆的一端端部设有萌芦头状棉花头，所述插入杆的外径与接入管的内径相 同。
[0022] 作为本发明的进一步改进，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方 法，所述的接入管上还设有密封接口端的瓶塞。
[0023] 作为本发明的进一步改进，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方 法，所述的棉签外部还设有密封棉签的包装袋。
[0024] 作为本发明的进一步改进，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方 法，所述的插入杆的长度160_220mm，直径3_6mm。
[0025] 作为本发明的进一步改进，上述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方 法，所述的棉花头尖头直径为2. 5-3. 5mm，下半部分直径为7-12mm，下半部分与插入杆连 接。
[0026] 与现有技术相比，本发明将还原性亚甲基蓝与叶酸结合在一起，通过叶酸受体介 导进入癌变细胞。通过染色和发生颜色变化而快速定位和检测上皮肿瘤细胞。本发明采 用的尖头萌芦形棉签，依据妇女宫颈解剖学结构设计；尖头可伸入宫颈口取样，取样面积更 大，能提高检出阳性率。使用密封塑料瓶储存染色液，运输方便，能与棉签巧妙地结合在一 起，全程封闭推注，相对于直接蘸取溶液，能避免溶液本身特殊的腥臭味对操作者的刺激； 同时减短溶液接触空气的时间，避免快速氧化造成假阳性结果，充分保证检测结果的准确 性。叶酸容易在酸性条件下析出，且当在碱性条件下还原亚甲基蓝时，亚甲基蓝难溶解，本 发明加入适量表面活性剂能促进各成分溶解，使反应更充分；并且将乙酸改为PH5. 0的乙 酸-乙酸钠缓冲液，能有效的解决这些问题。我们通过602例临床样本验证，以病理诊断为 金标准，本发明的染色液与TCT检查对比差异无统计学意义。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 图1是本发明提供的检测组件结构示意图；
[0028] 图2是本发明检测组件组装状态示意图；
[0029] 图3本发明检测组件使用状态示意图。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合【具体实施方式】对本发明的权利要求作进一步的详细说明，但本发明并不 限于此，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改仍在本发明权利要求保护范 围之内。
[0031] 实施例1
[0032] 本发明一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的试剂由下述重量百分数的 组分制成：2g的亚甲基蓝、5g果糖、Ig抗坏血酸、Ig叶酸、40g二甲基亚砜、5gpH值为5. 5 乙酸-乙酸钠缓冲液、0.IgTween-20,余量为纯化水。
[0033] 实施例2
[0034] 本发明一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的试剂由下述重量百分数的 组分制成：〇. 03g的亚甲基蓝、IOg果糖、0.Ig抗坏血酸、5g叶酸、40g二甲基亚砜、3gpH值 为5. 5乙酸-乙酸钠缓冲液、IgTween-20,余量为纯化水。
[0035] 实施例3
[0036] 本发明一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的试剂由下述重量百分数的 组分制成：〇. 06g的亚甲基蓝、7g果糖、0. 5g的抗坏血酸、3g叶酸、40g二甲基亚砜、4gpH值 为5. 5乙酸-乙酸钠缓冲液、0. 5gTween-20,余量为纯化水。
[0037] 实施例4
[0038] 本发明一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，所述的试剂由下述重量百分数的 组分制成：Ig的亚甲基蓝、8g果糖、0. 3g的抗坏血酸、2g叶酸、40g二甲基亚砜、3. 5gpH值 为5. 5乙酸-乙酸钠缓冲液、0. 3gTween-20,余量为纯化水。
[0039] 实施例1至4中任意一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的制备方法，依次包 括下述步骤：
[0040] 1)按实施例1至4中任意一种组分数称取各个组分；
[0041] 2)将步骤1)称取的叶酸溶入二甲基亚砜中，搅拌溶解；
[0042] 3)将亚甲基蓝加入至步骤2)溶液中，搅拌溶解后继续搅拌40-80min;
[0043] 4)将表面活性剂加入步骤3)溶液中，搅拌混匀；
[0044] 5)将果糖和抗坏血酸和碱性水溶液加入至步骤4)溶液中再次搅拌溶解；
[0045] 6)将乙酸-乙酸钠缓冲液按加入至步骤5)溶液中搅拌均匀即得。
[0046] 实施例1至4中任意一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的制备方法，该方法 检测时采用下述检测组件取样后，棉签的插入杆端部插接在试剂瓶的接入管端部，所述的 试剂瓶内装有实施例1至4中任意一种检测试剂，然后倒置挤压瓶体，使检测试剂流向取样 后的棉签头；
[0047] 所述的检测组件包括一塑料材质的试剂瓶1以及与试剂瓶1配套使用的棉签2,所 述试剂瓶1包括螺纹状软瓶体11，瓶体11上设有柱状空心接入管12,接入管12上还设有 密封接口端的瓶塞13。
[0048] 所述瓶体11与接入管12 -体成型，所述棉签2包括一空心插入杆21，插入杆21 的一端端部设有萌芦头状棉花头22,所述插入杆21的外径与接入管12的内径相同。
[0049] 更具体的说，所述的插入杆21的长度160-220mm，直径3-6mm，所述的棉花头22尖 头直径为2. 5-3. 5_，下半部分直径为712_，下部分与插入杆21连接。
[0050] 棉签外部还设有密封棉签的包装袋3。
[0051] 不需要使用时，检测试剂装入试剂瓶1内，盖上瓶塞密封；棉签2装入包装袋3密 封。方便储存和运输。
[0052] 使用时，打开棉签2的包装袋3,再打开试剂瓶1的瓶塞，将插入杆2的端部插接在 试剂瓶1接入管的内，倒置试剂瓶并且挤压，使试剂瓶内的试剂流入棉签的棉花头，用棉签 2的棉花头22尖头取样检测。
[0053] 为了更好的说明本发明的优点，下面给出本发明提供的检测溶液检测结果与市场 上常规试剂检测结果对比结果。
[0054] 表1改良型醋酸白溶液和TCT筛查结果和病理诊断的结果比较
[0055]
【权利要求】
1. 一种用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，其特征在于，所述的试剂由下述重量百分 数的组分制成：0.03% -2%的亚甲基蓝、5% -10%果糖、0. 1% -1%抗坏血酸、1% -5%叶 酸、40%二甲基亚砜、3% -5%乙酸-乙酸钠缓冲液、0. 1% -1 %表面活性剂，余量为纯化水。
2. 根据权利要求1所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，其特征在于，所述的 3% -5%乙酸-乙酸钠缓冲液的pH值为5. 5 ±0. 5。
3. 根据权利要求1所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂，其特征在于，所述的表 面活性剂为Tween-20 〇
4. 权利要求1所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的制备方法，其特征在于，依 次包括下述步骤： 1) 按权利要求1所述的重量百分数称取各个组分； 2) 将步骤1)称取的叶酸溶入二甲基亚砜中，搅拌溶解； 3) 将亚甲基蓝加入至步骤2)溶液中，搅拌溶解后继续搅拌40-80min; 4) 将表面活性剂加入步骤3)溶液中，搅拌混匀； 5) 将果糖和抗坏血酸和碱性水溶液加入至步骤4)溶液中再次搅拌溶解； 6) 将乙酸-乙酸钠缓冲液按加入至步骤5)溶液中搅拌均匀即得。
5. 权利要求1所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，其特征在于，该 方法检测时采用下述检测组件取样后，棉签的插入杆端部插接在装有权利要求1所述的检 测试剂的试剂瓶的接入管端部，倒置挤压瓶体，使检测试剂流向取样后的棉签头； 所述的检测组件包括一试剂瓶（1)以及与试剂瓶（1)配套使用的棉签（2)，所述试剂 瓶⑴包括螺纹状软瓶体（11)，瓶体（11)上设有柱状空心接入管（12)，所述瓶体（11)与 接入管（12) -体成型，所述棉签（2)包括一空心插入杆（21)，插入杆（21)的一端端部设有 萌芦头状棉花头（22)，所述插入杆（21)的外径与接入管（12)的内径相同。
6. 根据权利要求5所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，其特征在 于，所述的接入管（12)上还设有密封接口端的瓶塞（13)。
7. 根据权利要求5所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，其特征在 于，所述的棉签（2)外部还设有密封棉签的包装袋（3)。
8. 根据权利要求5所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，其特征在 于，所述的插入杆（21)的长度160mm-220mm，直径3mm-6mm。
9. 根据权利要求5所述的用于上皮组织肿瘤细胞的检测试剂的检测方法，其特征在 于，所述的棉花头（22)尖头直径为2. 5-3. 5mm，下半部分直径为7mm-12mm，下半部分与插入 杆（21)连接。
【文档编号】G01N33/52GK104483473SQ201410854634
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】汪艳涛, 龚成, 赵肃清, 汤永平, 潘秀华, 张晓丽 申请人:广州市微米生物科技有限公司