金黄色葡萄球菌肠毒素sea、seb快速检测试纸的制作方法
【专利摘要】本实用新型涉及一种金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于是由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、样品吸液板、胶体金固相基质组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有两条试验线和一条控制线，在底板一端端头为吸水板，对向端头为样品吸液板，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和样品吸液板相互交叠连接，其中胶体金固相基质是金标抗体固相垫或者微孔试剂。具有灵敏度高、操作简便、方便携带、成本低、检测结果可靠等特点。
【专利说明】金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种金黄色葡萄球菌肠毒素的胶体金快速检测试纸条，属于食品中金黄色葡萄球菌肠毒素的快速检测领域。
【背景技术】
[0002]金黄色葡萄球菌是一种强致病的革兰氏阳性菌，其耐药性不断增强，成为当今世界重要的卫生安全问题之一。金黄色葡萄球菌肠毒素是金黄色葡萄球菌分泌的一类具有超抗原活性的细菌毒素，能引起毒性反应，导致各类中毒事件发生，是食物中毒最重要的细菌性毒素。金黄色葡萄球菌肠毒素对热相当稳定，能抵抗蛋白酶消化，耐低PH，能通过胃肠道，引起呕吐和腹泻。人类对金黄色葡萄球菌肠毒素极为敏感，口服几个微克就可于2?4小时内出现中毒症状。在众多的金黄色葡萄球菌肠毒素中，肠毒素A、B备受关注。据报道，金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒大部分由肠毒素A和肠毒素B导致。
[0003]为确保食品卫生安全，对于肠毒素的检测方法也在不断发展，建立了各种检测方法，具体包括:①免疫血清法:免疫血清法主要有琼脂扩散法、固相放射免疫技术、酶联免疫吸附试验、免疫印迹技术、间接血凝抑制法和反向乳胶凝集试验等。琼脂扩散法敏感度较差，固相放射免疫技术所用仪器昂贵，而且存在放射性污染，也不易推广。反相间接血凝抑制法灵敏度与放射免疫法相当，但受非特异性干扰易产生假阳性结果；反向乳胶凝集试验出结果快，检测肠毒素灵敏度也可以达到纳克水平，但是存在的问题是葡萄球菌A蛋白的干扰，影响了结果的准确性。一般认为ELISA方法的灵敏度高于反相间接血凝抑制试验，可达到纳克级的水平。②聚合酶链反应:即PCR法，2000年，Mresh等应用单一反应PCR设计一种通用毒素基因引物和毒素特异性引物来扩增肠毒素基因，此法能快速对肠毒素基因进行检测。PCR方法灵敏性高，特异性强，但需要专门的实验技术人员和标准化实验室，不适于大规模的流行病学调查及基层卫生单位应用。同时，但该方法需要对结果进行测序，才能最终确定肠毒素的血清型，时间周期长。③基因探针=NoterMans等根据SEB基因核苷酸序列，人工合成3种DNA探针，以32P-dATP标记制备探针，以菌落原位杂交方法对210株金葡菌进行了 DNA杂交试验。Neill等合成了编码金葡菌肠毒素B 105-110个氨基酸的基因探针，检测产SEB金葡菌，结果与ELISA符合率为100%。同位素探针方法特异性高，敏感性强，重复性好，但因放射性问题难以推广；而非放射性探针主要是生物素探针，在实际应用中存在信噪比差的缺点。④超抗原技术:对于超抗原肠毒素活性SEA的开发是基于它所诱导的T淋巴细胞对于SEA — boundRaji细胞的毒性作用，通过CytoTox96细胞溶解检测试纸条对死亡的靶细胞进行比色分析。此法的主要优点是可直接检测SEA、SEB的生物学活性，但特异性不强，尚处于体外实验研宄阶段。
[0004]对于金黄色葡萄球菌肠毒素的检测，目前的发展方向主要是集中在研宄快速、灵敏、简单实用的方法，并加以推广，使之适宜进行快速检测。
【发明内容】
[0005]本实用新型为了克服现有技术的不足，提供了一种胶体金免疫层析法检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB残留的试纸条。
[0006]为解决上述技术问题，本实用新型是通过以下技术方案实现的:
[0007]检测试纸为金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB检测试纸，由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、样品吸液板、胶体金固相基质组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有两条试验线(T线)和一条控制线(C线)，在底板一端端头为吸水板，对向端头为样品吸液板，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和样品吸液板相互交叠连接，其中试验线由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB抗体包被，胶体金固相基质由另一对SEA和SEB抗体标记，组成单克隆抗体-胶体金标记物，控制线靠近吸水板由羊抗鼠多克隆抗体包被。其中胶体金固相基质是金标抗体固相垫或者微孔试剂。金标抗体固相垫由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体胶体金标记物和胶体金垫组成，微孔试剂由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体胶体金标记物和微孔组成。底板是PVC背板，样品吸液板是玻璃纤维材料，胶体金垫是聚酯膜材料。
[0008]样品中若含有金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB中某种金黄色葡萄球菌肠毒素残留，样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素先与对应的金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体-胶体金标记物发生特异性结合，随着液体样品向手柄端移动，当移动至固定有金黄色葡萄球菌肠毒素-抗体试验线时，将与金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体的另一位点发生结合，使显色的胶体金能滞留在试验线上，试验线处显示胶体金色色带，即试验线、控制线均显色为阳性。相反试验线不显色为阴性。控制线包被的是羊抗鼠多克隆抗体，因此无论样品中有无金黄色葡萄球菌肠毒素，控制线都会显色。
[0009]胶体金免疫层析技术是在免疫过滤技术的基础上建立的一种快速免疫学检测技术，本实用新型由于采用上述技术方案，本实用新型所提供的检测试纸条具有一次检测多种金黄色葡萄球菌肠毒素、灵敏度高、操作简便、方便携带、成本低、检测结果可靠等特点，可以准确的检测出样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素A和肠毒素B，对于临床感染的诊断、食品卫生监督提供技术支撑。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为本实用新型的主视结构图。
[0011]图2、图3为本实用新型的剖视图。
[0012]图中1、底板，2、吸水板，3、硝酸纤维素膜，4、样品吸液板，5、金标抗体固相垫(胶体金固相基质)，6、试验线，7、控制线，8、微孔试剂(胶体金固相基质)。
【具体实施方式】
[0013]实施例1:
[0014]检测试纸由底板1、吸水板2、硝酸纤维素膜3、样品吸液板4、金标抗体固相垫5组成，底板中部为硝酸纤维素膜3，硝酸纤维素膜3上有两条试验线(Tl、T2) 6和一条控制线(C线)7，在底板一端端头为吸水板2，对向端头为样品吸液板4，硝酸纤维素膜3两端分别与吸水板2和样品吸液板4相互交叠连接，其中试验线6由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB抗体包被，金标抗体固相垫由另一对金黄色葡萄球菌肠毒素A和肠毒素B的抗体标记，控制线7靠近吸水板由羊抗鼠多克隆抗体包被。
[0015]实施例2:
[0016]检测试纸由底板1、吸水板2、硝酸纤维素膜3、样品吸液板4、微孔试剂8组成，底板中部为硝酸纤维素膜3，硝酸纤维素膜3上有两条试验线(T1、T2) 6和一条控制线(C线)7，在底板一端端头为吸水板2，对向端头为样品吸液板4，硝酸纤维素膜3两端分别与吸水板2和样品吸液板4相互交叠连接，其中试验线6由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB抗体包被，微孔试剂由另一对金黄色葡萄球菌肠毒素A和肠毒素B的混合抗体标记胶体金溶液制成，控制线7靠近吸水板由羊抗鼠多克隆抗体包被。
[0017]实施例3:
[0018]样品中若含有金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB中某种金黄色葡萄球菌肠毒素残留，样品中的金黄色葡萄球菌肠毒素先与对应的金黄色葡萄球菌肠毒素单克隆抗体-胶体金标记物发生特异性结合，随着液体样品向手柄端移动，当移动至固定有金黄色葡萄球菌肠毒素-抗体试验线时，将与金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体的另一位点发生结合，使显色的胶体金能滞留在试验线上，试验线处显示胶体金色色带，即试验线、控制线均显色为阳性。相反试验线不显色为阴性。控制线包被的是羊抗鼠多克隆抗体，因此无论样品中有无金黄色葡萄球菌肠毒素，控制线都会显色。
【权利要求】
1.金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于是由由底板、吸水板、硝酸纤维素膜、样品吸液板、胶体金固相基质组成，底板中部为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜上有两条试验线和一条控制线，在底板一端端头为吸水板，对向端头为样品吸液板，硝酸纤维素膜两端分别与吸水板和样品吸液板相互交叠连接，其中胶体金固相基质是金标抗体固相垫或者微孔试剂。
2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于微孔试剂由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体胶体金标记物和微孔组成。
3.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于金标抗体固相垫由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB单克隆抗体胶体金标记物和胶体金垫组成。
4.根据权利要求1或3所述的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于底板是PVC背板，样品吸液板是玻璃纤维材料，胶体金垫是聚酯膜材料。
5.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于试验线由金黄色葡萄球菌肠毒素SEA和SEB抗体包被。
6.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB快速检测试纸，其特征在于控制线靠近吸水板，由羊抗鼠多克隆抗体包被。
【文档编号】G01N33/577GK204177808SQ201420673145
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】柳家鹏 申请人:北京华安麦科生物技术有限公司