【技术领域】
本发明属于医用材料技术领域，特别是涉及一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法。
背景技术：
随着“湿性愈合理论”的提出，创面敷料保持创面的湿润环境变得尤为重要，尤其是慢性难愈合创面。因此一系列模拟细胞外基质的水凝胶类敷料越来越得到广泛的重视，如具有生物相容性的壳聚糖水凝胶敷料，其良好的生物相容性有效促进了糖尿病小鼠创面的愈合。
为提高创面愈合率的，人们对水凝胶做出了大量的研究，来提高水凝胶的性能，bfgf能够改善细胞生长的微环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，使肌肤富有弹性，使皮肤处于滑嫩的状态。
bfgf与水凝胶的结合，是现在行业的趋势，也是待攻克的技术难题，bfgf与水凝胶的结合的效果，直接决定了水凝胶的性能。
因此，有必要提供一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法来确认bfgf与水凝胶的结合。
技术实现要素：
本发明的主要目的在于提供一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法，从而提高释放率精准度。
本发明通过如下技术方案实现上述目的：一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法，包括如下步骤：
a)对包载bfgf的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bfgf的水凝胶浸泡于pbs缓冲溶液中；
b)使用elisa试剂盒检测上述包载bfgf的sbma水凝胶上清中bfgf的含量；
c)通过elisa蛋白溶液与稀释剂配置多个elisa蛋白标准品；
d)取反应板，在反应板中孔内加入elisa蛋白标准品和包载bfgf的水凝胶溶液，重复混合；
e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；
f)加入酶标抗体工作液，重复混合；
g)加入显色底物工作液，重复混合；
h)加入终止液以终止反应；
i)用酶标仪进行吸光度检测bfgf的含量；
通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bfgf的累积释放量。bfgf的累积释放量＝elisa试剂盒检测的检测量+酶标仪检测的吸光度检测量。
步骤a)中，称取包载bfgf的水凝胶，并浸泡于pbs缓冲溶液里，静置，取定量的上清液，同时再补充等量的pbs，于低温保存。
步骤c)中，取多个离心管，第一离心管加入elisa蛋白稀释液，第二至第八离心管均加入少于第一离心管量的elisa蛋白稀释液，在第一离心管中加入elisa蛋白溶液，混匀，吸出一定量加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出等量的溶液，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从最后一个离心管中吸出等量溶液弃去，形成elisa蛋白标准品。
与现有技术相比，本发明一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法的有益效果在于：检测方法较为简单，方便操作，并且其检测的精度高。
【具体实施方式】
本发明为一种包载bfgf的水凝胶释放率的检测方法，包括如下步骤：
a)对包载bfgf的水凝胶进行冷冻干燥，表面喷金处理；对包载bfgf的水凝胶浸泡于pbs缓冲溶液中；
b)使用elisa试剂盒检测上述包载bfgf的sbma水凝胶上清中bfgf的含量；
c)通过elisa蛋白溶液与稀释剂配置多个elisa蛋白标准品；
d)取反应板，在反应板中孔内加入elisa蛋白标准品和包载bfgf的水凝胶溶液，重复混合；
e)反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液，重复混合；
f)加入酶标抗体工作液，重复混合；
g)加入显色底物工作液，重复混合；
h)加入终止液以终止反应；
i)用酶标仪进行吸光度检测bfgf的含量；
通过步骤b)与步骤i)中含量共同确认bfgf的累积释放量。
详细检测举例说明如下：
提供sbma水凝胶以及加入bfgf，液氮速冻5分钟并通过真空低温方式抽干，形成包载bfgf的水凝胶。再进行冷冻干燥24小时，表面喷金处理。
使用elisa试剂盒检测上述包载bfgf的sbma水凝胶在各个时间段上清中bfgf的含量，(各个时间点可以为：3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天)。
精确称取包载bfgf的水凝胶(样品)，并浸泡于一定量的pbs缓冲溶液里，静置于4度冰箱，等到特定时间点取定量的上清液(500μl)，同时再补充500μlpbs，于-80℃保存(特定时间点可以为：3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天)。
取多个离心管，第一离心管加入elisa蛋白稀释液，第二至第八离心管均加入少于第一离心管量的elisa蛋白稀释液，在第一离心管中加入elisa蛋白溶液，混匀，吸出一定量加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出等量的溶液，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从最后一个离心管中吸出等量溶液弃去，形成elisa蛋白标准品。
详细的，取八个1.5ml离心管，第一离心管加入标准品稀释液900μl，第二至第八离心管加入500μl，在第一离心管中加入100μl标准品溶液(40ng/ml)，置于漩涡震荡器上混匀，吸出500μl加入至第二离心管中，震荡混匀后，再从第二离心管吸出500μl，加入至第三离心管中。如此反复对半稀释，最后从第八离心管中吸出500μl弃去，形成elisa蛋白标准品。
取反应板，反应板中每个孔内加入elisa蛋白标准品和待测样品100μl，重复混合，置于37℃孵育40分钟。用洗涤液将反应板充分洗涤四次，在滤纸上印干。反应板每个孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50μl，重复混合，置于37℃孵育20分钟。再用洗涤液充分洗板。每个孔加入酶标抗体工作液100μl，重复混合，置于37℃孵育10分钟。再用洗涤液充分洗板。每孔加入显色底物工作液100μl，置于37℃暗处孵育15分钟。15分钟后，加入100μl终止液以终止反应，并在30分钟之内，用酶标仪进行吸光度检测，检测波长为450nm，吸光度检测量出的认释放量。通过3小时，9小时，24小时，第3天，第7天，第10天以及第20天特定时间点的检测，获取bfgf在水凝胶中不同时间的释放量。
bfgf的累积释放量＝elisa试剂盒检测的检测量+酶标仪检测的吸光度检测量。从而获取bfgf的水凝胶释放率。本检测方法较为简单，方便操作，并且其检测的精度高。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。