一种碱性化合物的分离分析方法

1.本发明属于色谱分离技术领域，具体而言，本发明涉及一种碱性化合物的分离分析方法。


背景技术：

2.碱性化合物在各个领域都有广泛的应用，比如在医药行业，碱性药物占据了已有药物的70％，并且碱性化合物作为众多药物的中间体或先导物，有着不可替代的作用[mccalley,d.v.et al,j.chromatogra.a,2010,1217,858]。在医药中间体产业，多于85％可解离化合物拥有碱性基团，因此在对质量控制，临床分析，疗效监测和药物代谢研究中涉及的碱性物质分析是一个至关重要的问题。到目前为止，反相色谱是分离分析碱性物质的最常用和最有效的方法。对于传统的反相烷基硅胶键合相，如c18、c8键合相，表面残存部分未反应的硅羟基，易于在硅胶基质化学键合相适用的ph范围(2.0-8.0)的流动相中失去质子而带负电荷，能强烈吸附带正电荷的碱性化合物，因此在分离一些易解离和碱性化台物时，色谱峰将严重拖尾变形，柱效下降，甚至造成不可逆保留[sadek p.c.et al,j.chromatogr.sci,1987,25,489]。
[0003]
本发明的目的在于提出一种采用苯胺键合相的碱性化合物分离分析方法，该方法能够有效地改善碱性化合物的峰形拖尾，并对碱性化合物具有良好的分离选择性，提供一种新的碱性化合物反相色谱分离分析方法。


技术实现要素：

[0004]
本发明在于提供一种碱性化合物分离分析方法，该方法能够克服常规反相色谱柱对碱性化合物的吸附导致峰形拖尾的缺点，在天然产物及药物分离分析方向具有十分重要的意义。
[0005]
为实现上述目标，本发明采用的技术方案为：采用装填有苯胺键合硅胶的色谱柱或固相萃取柱对碱性样品进行色谱分析，其结构式如下：
[0006][0007]
所述苯胺键合相中，silica gel为硅胶，r1是c1-c10的烷基链。
[0008]
所述流动相ph为2～8，通过使用添加剂中的一种或者以上进行调节。
[0009]
所述流动相为有机相和水相。有机相为乙腈、乙醇、甲醇、异丙醇等中的一种且不限于一种。
[0010]
所述添加剂种类为甲酸、乙酸、磷酸、三氟乙酸等酸性添加剂，或者氨水，三乙胺等碱性添加剂，或者甲酸盐，乙酸盐，磷酸盐等缓冲盐，浓度为5-150mm。
[0011]
本发明的优点
[0012]
本发明采用了具有疏水和静电作用的苯胺固定相，实现了碱性化合物在该材料上很好的保留，与反相材料c18相比，能够克服常规反相色谱柱对碱性化合物的吸附导致峰形拖尾的缺点，并且有效的提升碱性化合物之间是分离选择性，提供了一种新的碱性化合物反相色谱分离分析方法。
附图说明
[0013]
图1显示了根据本发明的实施例1色谱图。
[0014]
图2显示了根据本发明的实施例2色谱图。
[0015]
图3显示了根据本发明的实施例3色谱图。
具体实施方式
[0016]
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0017]
本发明实施例中所用的色谱柱为申请人自主研发。
[0018]
实施例1
[0019]
色谱柱：丙基苯胺硅胶柱；
[0020][0021]
规格：4.6
×
50mm，3.5μm；
[0022]
溶剂：a：乙腈；b：0.1％甲酸水(v/v)；
[0023]
洗脱：0～5～10min，5％～20％～90％a(v/v)；
[0024]
流速：1.0ml/min；
[0025]
柱温：30℃；
[0026]
检测：dad(190nm-400nm)&254nm；
[0027]
进样量：1μl；
[0028]
样品：碱性混标(青藤碱0.4mg/ml，士的宁0.4mg/ml，荷叶碱0.4mg/ml，小檗碱0.1mg/ml，秋水仙碱1.0mg/ml，辣椒碱1.5mg/ml等量混合)；
[0029]
按上述条件进行高效液相色谱分析，图1为生物碱混标色谱图，几种不同类型的生物碱类化合物具有很好的分离效果，并且峰形对称。
[0030]
实施例2
[0031]
色谱柱：丙基苯胺硅胶柱(结构与实施例1相同)；
[0032]
规格：4.6
×
50mm，3.5μm；
[0033]
溶剂：a：乙腈；b：0.1％甲酸水(v/v)；
[0034]
洗脱：a：b＝5：95；
[0035]
流速：1.0ml/min；
[0036]
柱温：30℃；
[0037]
检测：dad(190nm-400nm)&254nm；
[0038]
进样量：1μl；
[0039]
样品：混合样品(普萘洛尔2.75mg/ml，地昔帕明1mg/ml，阿米替林1mg/ml等量混合)；
[0040]
按上述条件进行高效液相色谱分析，图2为碱性化合物混标色谱图，三种碱性药物化合物都具有较好的保留及很好的分离效果。
[0041]
实施例3
[0042]
色谱柱：丙基苯胺硅胶柱(结构与实施例1相同)；
[0043]
规格：4.6
×
50mm，3.5μm；
[0044]
溶剂：a：乙腈；b：0.1％甲酸水(v/v)；
[0045]
洗脱：a：b＝5：95；
[0046]
流速：1.0ml/min；
[0047]
柱温：30℃；
[0048]
检测：dad(190nm-400nm)&254nm；
[0049]
进样量：100μl；
[0050]
样品：小檗碱5.9mg/ml；
[0051]
按上述条件进行高效液相色谱分析，图3为小檗碱的色谱图，在大载样量(0.118％，g/g)下仍能具有良好的峰形。


技术特征：
1.一种碱性化合物的分离分析方法，其特征在于，采用装填有苯胺键合硅胶的色谱柱或固相萃取柱对碱性化合物进行色谱分析；苯胺键合硅胶结构式如下：其中silica gel为硅胶，r1是c1-c10的烷基链。2.按照权利要求1所述分离方法，其特征在于：所述流动相为有机相和水相；有机相为乙腈、乙醇、甲醇、异丙醇等中的一种或二种以上。3.按照权利要求1所述分离方法，其特征在于：所述流动相ph为2～8，使用添加剂中的一种或者二种以上进行调节。4.按照权利要求3所述分离方法，其特征在于：所述添加剂种类为下述中的一种或二种以上：甲酸、乙酸、磷酸、三氟乙酸等酸性添加剂，或者氨水，三乙胺等碱性添加剂，或者甲酸盐，乙酸盐，磷酸盐等缓冲盐，浓度为5-150mm。5.按照权利要求1所述分离方法，其特征在于：所述碱性化合物为生物碱类中的青藤碱、士的宁、荷叶碱、小檗碱、秋水仙碱、辣椒碱以及碱性药物中的普萘洛尔、地昔帕明、阿米替林中的一种或二种以上。6.按照权利要求1所述分离方法，其特征在于：可用于植物提取物中碱性化合物的分离和/或分析。

技术总结
本发明揭示了一种基于反相色谱的碱性化合物的分离分析方法，采用装填苯胺键合硅胶的色谱柱或固相萃取柱对生物碱进行分离分析。该方法能够克服常规反相色谱柱对碱性化合物的吸附及峰拖尾的缺点，为碱性化合物的分析和分离纯化方向具有十分重要的意义。该方法使用过程重复性高，易实现标准化及产业化。易实现标准化及产业化。易实现标准化及产业化。


技术研发人员：梁鑫淼 韩紫薇 俞冬萍 郭志谋 金高娃 周永正 霍丽多
受保护的技术使用者：中国科学院大连化学物理研究所
技术研发日：2020.12.11
技术公布日：2022/6/14