一种快速检测新冠病毒IgM-IgG抗体双联试纸的制作方法

本实用新型属于病毒检测技术领域，具体涉及一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸。

背景技术：

全国的疫情防控面临极其巨大的压力。临床检测方面：在国家政府的大力支持下，确诊检验方法目前大量的采用核酸检测技术；但随着疫情的控制和发展，核酸检测的弊端愈发明显。

居民健康筛查方面：由于疫情进展极其迅速，现有的防控体系采用人海战术，对所有人群采用几乎无差别的防控措施，一是造成效率低下，疲于应付，二是高风险人群未获得对应的必要应对措施，易造成感染风险扩大。现有的防控体系基本上仍以发热作为主要筛查策略，漏掉了数量庞大的无症状人群或者其他症状人群。最新的流行病学研究显示，新冠病毒感染风险需综合评估患者的行为、体征和检测，才能保证足够的准确性。

新型冠状病毒基因编码多个结构蛋白，例如n蛋白、e蛋白和s蛋白等，这些蛋白包括多个抗原表位，利用抗原与抗体特异性结合的原理，可通过抗体检测抗原的存在，从而直接证明样本中含有新型冠状病毒。在此之前，新冠病毒感染(包括肺炎)的早期筛查难点主要在于没有快速、特异而灵敏的检测方法，很多地方主要使用体温检测进行初筛。体温的特异性不高，而且很多新冠肺炎(ncp)患者体温并无升高。这导致大量患者在发热门诊或感染科、呼吸科、儿科、急诊等部门无法被识别。

新型冠状病毒的上述抗原，可作为免疫原，在病毒感染人体后，刺激浆细胞产生特异性抗体，利用抗原与抗体特异性结合的原理，可通过抗原检测抗体的存在，从而间接证明人体已感染新型冠状病毒。抗体检测试剂的适用样本类型一般为血液，包括血清、血浆和全血。检测的抗体主要分为igm和igg两类。目前对新型冠状病毒的这两类抗体的产生和持续时间尚缺乏系统性研究。通常情况下，igm抗体产生早，一经感染，快速产生，维持时间短，消失快，血液中检测阳性可作为早期感染的指标。igg抗体产生晚，维持时间长，消失慢，血液中检测阳性可作为感染和既往感染的指标。

目前现有的检测试纸需要滴加样品两次分别对igm和igg抗体进行检测，无法同时检测igm及igg两种抗体，操作繁琐，检测时间长，影响了新冠病毒检测防治的效率，降低了检测的成本。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸，克服了现有技术的不足，能够同时对新冠病毒igm、igg进行检测，且操作简便快捷、成本低、特异性强，无需其他仪器设备，适用于现场快速诊断。

为解决上述问题，本实用新型所采取的技术方案如下：

一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸，包括中空结构的外壳和固定在外壳内的检测试纸，所述检测试纸包括有底板和固定于底板上的顺次搭接的样品垫、胶体金结合垫、酸纤维素膜和吸水垫，所述胶体金结合垫上喷涂吸附有重组表达的新型冠状病毒的特异性蛋白抗原和兔免疫球蛋白g单克隆抗体标记的胶体金颗粒，所述酸纤维素膜上依次设置有t2检测线、t1检测线和质控线，所述质控线位于酸纤维素膜上靠近吸水垫的一端；所述t1检测线和t2检测线分别为由鼠抗人免疫球蛋白g单克隆抗体和鼠抗人免疫球蛋白m单克隆抗体印制而成的薄膜线，所述质控线为由羊抗兔igg多克隆抗体印制而成的薄膜线，所述t2检测线、t1检测线和质控线相互平行且与样品流动方向垂直。

进一步，所述外壳的上表面穿设与样品垫位置对应的加样孔，且嵌设有用于观察t2检测线、t1检测线和质控线的观察窗。

进一步，所述重组表达的新型冠状病毒的特异性蛋白抗原为2019-ncovspikeprotein(rbd,fctag)。

进一步，所述t2检测线与胶体金结合垫的端部间距为4-6mm，所述t2检测线、t1检测线和质控线之间的间距为3-5mm，所述质控线与吸水垫的端部间距为4-6mm。

进一步，所述样品垫与胶体金结合垫的搭接处重叠0.2cm，所述酸纤维素膜的两端分别与胶体金结合垫和吸水垫的搭接处重叠0.2cm。

进一步，所述外壳采用硬质塑料，底板为pvc板，所述样品垫为玻璃棉垫，所述吸水垫为吸水纸。

本实用新型与现有技术相比较，具有以下有益效果：

(1)能够同时对新冠病毒igm、igg进行检测，且操作简便快捷、成本低、特异性强，无需其他仪器设备，适用于现场快速诊断。

(2)操作简便，检测时间短，10-15分钟即可判断结果，一次加样即可实现较高通量的检测，克服了常规单项检测卡通量低的缺点，提高了检测效率。

(3)采用胶体金免疫层析法进行检测，结果形象直观，便于观察，仅通过检测线和质控线的颜色变化即可判读结果，检测人员进行简单培训即可为居民进行检测，特别适合大范围人群筛查使用。

(4)检测的灵敏度高，经过临床试验，本试纸的灵敏度达到了1∶512，符合实际检测使用的标准。

附图说明

图1为一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸的结构示意图。

图2为一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸中检测试纸的结构示意图。

图3为一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸的模拟检测结果示意图。

图中：1、外壳；2、检测试纸；201、样品垫；202、胶体金结合垫；203、t2检测线；204、t1检测线；205、质控线；206、酸纤维素膜；207、吸水垫；208、底板；3、观察窗；4、加样口。

具体实施方式

下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。

如图1-2所示，本实用新型所述一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸，包括中空结构的外壳1和固定在外壳1内的检测试纸2，检测试纸2包括有底板208和固定于底板208上的顺次搭接的样品垫201、胶体金结合垫202、酸纤维素膜206和吸水垫207，胶体金结合垫202上喷涂吸附有重组表达的新型冠状病毒的特异性蛋白抗原和兔免疫球蛋白g单克隆抗体标记的胶体金颗粒，酸纤维素膜206上依次设置有t2检测线203、t1检测线204和质控线205，质控线205位于酸纤维素膜206上靠近吸水垫207的一端；t1检测线204和t2检测线203分别为由鼠抗人免疫球蛋白g单克隆抗体和鼠抗人免疫球蛋白m单克隆抗体印制而成的薄膜线，质控线205为由羊抗兔igg多克隆抗体印制而成的薄膜线，t2检测线203、t1检测线204和质控线205相互平行且与样品流动方向垂直。

外壳1的上表面穿设与样品垫201位置对应的加样孔，且嵌设有用于观察t2检测线203、t1检测线204和质控线205的观察窗3。

重组表达的新型冠状病毒的特异性蛋白抗原为2019-ncovspikeprotein(rbd,fctag)，采购自山东科莱德生物科技有限公司。

t2检测线203与胶体金结合垫202的端部间距为4-6mm，t2检测线203、t1检测线204和质控线205之间的间距为3-5mm，质控线205与吸水垫207的端部间距为4-6mm。

样品垫201与胶体金结合垫202的搭接处重叠0.2cm，酸纤维素膜206的两端分别与胶体金结合垫202和吸水垫207的搭接处重叠0.2cm。

外壳1采用硬质塑料，底板208为pvc板，样品垫201为玻璃棉垫，吸水垫207为吸水纸，所使用的材料均为常见材料，制作成本低，能够大批量的生产。

本实用新型所述一种快速检测新冠病毒igm-igg抗体双联试纸的具体使用步骤：

1.吸取血清/血浆/全血，加至检测卡加样孔中；

2.滴加1滴样本稀释液至检测卡加样孔中；

3.经过10-15分钟后判读结果，超过30分钟判读的结果无效。

结果判断：

1.若质控线205出现条带，t1检测线204出现条带，t2检测线203出现条带，表明样本中有igm抗体和igg抗体存在，结果为阳性；

2.若质控线205出现条带，t1检测线204出现条带，t2检测线203不出现条带，表明样本中有igg抗体存在，无igm抗体存在，结果为阳性；

3.若质控线205出现条带，t1检测线204不出现条带，t2检测线203出现条带，表明样本中无igg抗体存在，有igm抗体存在，结果为阳性或假阳性；

4.若质控线205出现条带，t1检测线204不出现条带，t2检测线203不出现条带，表明样本中无igm抗体和igg抗体存在，结果为阴性；

5、若质控线205不出现条带，无论t1检测线204、t2出不出现条带，结果均为无效，需要重新测试。

注意：检测线(t1检测线204、t2检测线203)内的红色条带可明显出现不同深浅的颜色。但是，在规定的观察时间内，不论该色带颜色深浅，即使只是非常弱的色带也应判为阳性结果。

本产品已经提供给安徽省疾控中心验证，验证已检测样本100人份，产品阳性检出率超过70％，高于核酸检测，得到疾控中心专家肯定。

本实用新型中所述的兔免疫球蛋白g单克隆抗体、鼠抗人免疫球蛋白g单克隆抗体、鼠抗人免疫球蛋白m单克隆抗体均采购自北京某生物科技公司，样品垫(201)、胶体金结合垫(202)、酸纤维素膜(206)和吸水垫(207)

对于本领域技术人员而言，显然本实用新型不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本实用新型的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本实用新型。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本实用新型的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本实用新型内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。