一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法与流程

1500ng/ml。
11.优选的，所述样品处理过程如下：
12.s1.在1.1ml的小管中，加入20μl空白活性炭吸附人尿液作为空白样品。对于标准曲线、质控、检测样品、系统适用性样品和平衡样品(必要时)，加相应的20μl的基质样品。
13.s2.空白、标准曲线、质控、检测样品、系统适用性样品及平衡样品(必要时)，在丙酮和100μl的0.1m碳酸氢钠溶液中加入80μl活性炭吸附人尿液和50μl的2mg/ml丹磺酰氯溶液，混匀约2min。
14.s3. 60℃恒温水浴30min
±
2min。
15.s4.每管加入400μl乙酸乙酯。
16.s5.混合约10分钟。
17.s6. 4c，4700转/分离心15分钟。
18.s7.将320μl上清液转移到新的0.65ml管中，室温下用氮气干燥。
19.s8.每孔加入150μl溶液，涡流混匀5min左右，20μl进入高效液相-质谱仪分析。
20.优选的，所述将样品3-methyl histamine stock sol.1通过以上过程进行序列稀释最终可获得标准曲线定量下限样品std 01，具体流程如图1所示。
21.优选的，所述质控工作液配制方法如下：将样品3-methyl histamine stock sol.2由权利要求4所示的流程进行序列稀释可获得定量下限质控样品lloq，具体流程如图2所示。
22.(三)有益效果
23.与现有技术相比，本发明提供了一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，具备以下有益效果：
24.该检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，与不经过丹磺酰氯衍生化的n-甲基组胺原型相比，衍生化产物有更好的色谱保留，同时引入了仲胺作为电离基团，既可以降低本底噪音，又可以提高待测物的响应。同时，该方法对仪器设备要求低，样品处理步骤简单易操作。
附图说明
25.图1为本发明标准曲线配制方法结构示意图；
26.图2为本发明质控工作液配制方法结构示意图；
27.图3为本发明色谱条件结构示意图；
28.图4为本发明质谱条件结构示意图。
具体实施方式
29.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.请参阅图1-4，本发明工作步骤；
31.s1.在1.1ml的小管中，加入20μl空白活性炭吸附人尿液作为空白样品。对于标准
曲线、质控、检测样品、系统适用性样品和平衡样品(必要时)，加相应的20μl的基质样品。
32.s2.空白、标准曲线、质控、检测样品、系统适用性样品及平衡样品(必要时)，在丙酮和100μl的0.1m碳酸氢钠溶液中加入80μl活性炭吸附人尿液和50μl的2mg/ml丹磺酰氯溶液，混匀约2min。
33.s3. 60℃恒温水浴30min
±
2min。
34.s4.每管加入400μl乙酸乙酯。
35.s5.混合约10分钟。
36.s6. 4c，4700转/分离心15分钟。
37.s7.将320μl上清液转移到新的0.65ml管中，室温下用氮气干燥。
38.s8.每孔加入150μl溶液，涡流混匀5min左右，20μl进入高效液相-质谱仪分析。
39.综上所述，该检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，与不经过丹磺酰氯衍生化的n-甲基组胺原型相比，衍生化产物有更好的色谱保留，同时引入了仲胺作为电离基团，既可以降低本底噪音，又可以提高待测物的响应。同时，该方法对仪器设备要求低，样品处理步骤简单易操作。
40.需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
41.尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。


技术特征：
1.一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述尿液中甲基组胺检测技术方法原理如下：以往的方法学中，用于定量的标准曲线使用人尿液进行配制，由于本专利所描述的待测物为人尿液内源性物质，使用人尿液配制标准曲线将受到内源物质的强烈干扰。因此，也曾使用纯水或pbs缓冲液来代替，但是这些替代溶液的成分和人尿液的差异较大，人尿液和这些替代成分的基质效应有显著差异，导致在质谱仪中的响应信号存在偏差，最终定量结果不能真实反映尿液样品的实际浓度。2.根据权利要求1所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述在本方法中，使用活性炭对人尿液中的内源性n-甲基组胺进行吸附去除，具体操作为，将人尿液和活性炭以1∶0.1(ml∶g，体积/质量)的比例混合，涡旋混匀，4000g离心20min；再取离心后的上清基质和活性炭以1∶0.1(ml/g，体积/质量)的比例混合，涡旋混匀，4000g离心15min，再经0.22μm滤膜过滤。得到活性炭吸附后的人尿液，此时内源性n-甲基组胺已经去除，而尿液中其它主要组分依然保留。3.根据权利要求1所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述人尿液中n-甲基组胺检测的样品处理原理为：使用丹磺酰氯作为衍生试剂，与n-甲基组胺中的伯氨基团进行反应，生成的丹磺酰氯衍生化产物经过液液萃取，纯化得到富集的n-甲基组胺样品。4.根据权利要求1所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述标准曲线使用活性炭吸附过的人尿液配制，工作液浓度分别为5.00，10.0，50.0，100，500，1000，1800和2000ng/ml，质控浓度分别为5.00，15.0，150，750 and 1500ng/ml。5.根据权利要求1所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述样品处理过程如下：s1.在1.1ml的小管中，加入20μl空白活性炭吸附人尿液作为空白样品。对于标准曲线、质控、检测样品、系统适用性样品和平衡样品(必要时)，加相应的20μl的基质样品。s2.空白、标准曲线、质控、检测样品、系统适用性样品及平衡样品(必要时)，在丙酮和100μl的0.1m碳酸氢钠溶液中加入80μl活性炭吸附人尿液和50μl的2mg/ml丹磺酰氯溶液，混匀约2min。s3. 60℃恒温水浴30min
±
2min。s4.每管加入400μl乙酸乙酯。s5.混合约10分钟。s6. 4c，4700转/分离心15分钟。s7.将320μl上清液转移到新的0.65ml管中，室温下用氮气干燥。s8.每孔加入150μl溶液，涡流混匀5min左右，20μl进入高效液相-质谱仪分析。6.根据权利要求4所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述将样品3-methyl histamine stock sol.1通过以上过程进行序列稀释最终可获得标准曲线的定量下限样品std01，具体流程如图1所示。7.根据权利要求1所述的一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，其特征在于：所述质控工作液配制方法如下：将样品3-methyl histamine stock sol.2由权利要求4所示的流程进行序列稀释最终可获得定量下限质控样品ll0q，具体流程如图2所示。

技术总结
本发明涉及尿液检测技术领域，且公开了一种检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，所述尿液中甲基组胺检测技术方法原理如下：以往的方法学中，用于定量的标准曲线使用人尿液进行配制，由于本专利所描述的待测物为人尿液内源性物质，使用人尿液配制标准曲线将受到内源物质的强烈干扰。人尿液和这些替代成分的基质效应差异巨大，在质谱仪中的响应信号存在差异导致最终定量不准确。该检测尿液中甲基组胺的新型分析方法，与不经过丹磺酰氯衍生化的N-甲基组胺原型相比，衍生化产物有更好的色谱保留，同时引入了仲胺作为电离基团，既可以降低本底噪音，又可以提高待测物的响应。同时，该方法对仪器设备要求低，样品处理步骤简单易操作。样品处理步骤简单易操作。


技术研发人员：马克 高丹娜 张怀敬 王琦 何江 董菁
受保护的技术使用者：军科正源（北京）药物研究有限责任公司
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/5/17