专利名称：一种血痕鉴定试剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种用于鉴定血痕种属的试剂，以及制备这种试剂的方法。
目前国内外法医界鉴定伤害、杀人等案件中的现场和凶手身上粘有的血痕时，需把血痕送到实验室，用抗人血色素血清(下简称抗人Hb)来鉴定是人血还是动物血(即血痕种属)，以便认定犯罪事实，这种抗人Hb血清的制取方法是，采取多人静脉采血，提取红细胞，将红细胞经生理盐水洗涤，离心，彻底去除血清成份。加10倍蒸馏水，然后放置于浓度在4℃左右的冰箱内，24小时后完全溶血，再加入纯氯化钠(NaCl)结晶，配成0.85%的溶液，再经离心机10000转/分离心去除红细胞膜即得到10%血红蛋白免疫原。取上述10%血红蛋白免疫原液0.2ml，每隔两日注射于家兔眼结膜下，共注射6次，家兔休息7天，从其心脏抽血。将兔血置于37℃温箱内15分钟，后再放置到4℃冰箱内12小时，使血液凝固折出血清，离心去除沉淀，取上清液即制得了抗人Hb血清。使用抗人Hb血清来进行血痕鉴定方法有1)环状沉淀试验，操作时先将抗人Hb血清加入φ0.2cm沉降管内，用生理盐水浸泡血痕后再将浸泡液加入沉降管内观察环状沉淀(沉淀环)。这种方法操作时间需30分钟以上，灵敏度差，血痕的消耗量也大，最少消耗量为0.2mg，而且还不易操作。2)免疫单扩散试验，先配制PH8三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液，再配成1%琼脂液，隔水煮沸溶解琼脂，在56℃恒温条件下与抗人Hb血清混合后辅成胶板，再将血痕埋入胶内，2小时后观察沉淀晕环，这种鉴定方法操作时间长，达3小时以上，血痕最少消耗量为0.1mg。3)对流免疫电泳方法，先配制乙二基巴比妥缓冲液(PH8.6)，再配成1%琼脂糖胶板，胶板上打孔(φ0.3cm)，将抗人Hb血清放入阴极孔，将血痕浸泡液放入阳极孔，电压100V，电流10mA，电泳40分钟，观察沉淀弧线，此法不仅需要电泳仪，电泳槽等仪器设备，基层政法部门的法医室无法普及，而且其操作步骤复杂，时间长达4小时以上，血痕的最少消耗量为0.1mg。4)其它方法还有免疫双扩散试验，免疫火箭电泳试验等，因其灵敏度低，法医界已不采用。因此采用现有抗人Hb血清来进行血痕鉴定存在着效价低，通常在2万倍以下，灵敏度不高，血痕消耗量大，平均消耗量在0.5mg，最少消耗量为0.1mg，并且鉴定血痕的方法烦锁，时间长，需仪器设备和多种试剂等不足。
本发明的目的是为了克服上述存在的不足，提供一种快速鉴定血痕种属且鉴定方法简单的血痕试剂，以及制备这种血痕试剂的方法。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，将抗人血色素血清和聚乙二醇在三羟甲基氨基甲烷-盐酸组成的缓冲液中混合，其各重量百分配比是抗人血色素血清66.67%，聚乙二醇2.83-4.17%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液29.16-30.5%。
本发明所述的血痕试剂的各重量百分配比为抗人血色素血清66.67%，聚乙二醇3.5%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液29.83%。
一种制备上述血痕试剂的方法，它是先将8.5-12.5%的聚乙二醇加入到87.5-91.5%PH7.5-8.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸的缓冲液中，此混合液再与抗人血色素血清按1∶2比例混合(重量百分比)，成为粗制血痕试剂;将上述粗制血痕试剂置于温度在1-8℃的环境下冷处理24小时，使血清内可溶性的免疫复合物(2C)沉淀，然后将冷处理后的粗制血痕试剂装入试管内，通过3000-10000转/分速度近20分钟的离心过程，使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，即获得血痕试剂。
前述制备血痕试剂的方法，选择PH为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸作为缓冲液，将粗制血痕试剂置4℃温度环境下冷处理24小时，并用离心机3000转/分的速度进行离心过程为最佳。
以上制备方法中所述的抗人血色素血清，聚乙二醇、三羟甲基氨基甲烷-盐酸的各组分以前述重量百分比为准。
本发明与原有的抗人血色素血清相比较，具有高效价，高灵敏度的独有特点，其效价为5万倍以上，最少可鉴定0.01mg血痕，且特异性强，不与动物血痕起反应，鉴定血痕种属的方法快速、微量、简便，只需2分钟就可鉴定完成，可携带到发案地点进行现场鉴定，不需仪器设备，使用极为方便，特别是这种血痕试剂可进行独有的《玻片法》滴定血痕种属，具有较好的经济和社会效益。
下面将通过具体的实施例对本发明作详细的介绍，先将8.5%的聚乙二醇加入到91.5%的三羟甲基氨基甲烷-盐酸液中，配制成8.5%聚乙二醇浓度的溶液。聚乙二醇的化学分子结构是HOCH2(CH2OCH2)6000CH2OH，简称PEG，其分子结构中有无数醚型结构单位，两端各有一个伯醇基。中性无电荷，分子结构非常稳定，不易变质且耐热，不与任何化学试剂起反应。所取的三羟甲基氨基甲烷-盐酸液作为缓冲液其PH值为8，在以下实施例中则可在7.5-8.5之间选择，简称tr′s-Hcl缓冲液。然后将上述溶液再与抗人血色素血清按1∶2比例混合，制成粗制血痕试剂;将上述粗制血痕试剂置于1°温度环境下冷处理24小时，使血清内可溶性的免疫复合物(IC)沉淀，然后将冷处理后的粗制血痕试剂装入试管内，通过离心设备3000转/分速度的旋转经20分钟左右时间使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，取获得血痕试剂，这种血痕试剂的重量百分比组成是聚乙二醇2.83%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸30.5%抗人血色素血清66.67%。上述粗制血痕试剂的冷处理温度可在1-8°内选择，以下实施例不再进一步描述。
将12.5%的聚乙二醇加入到87.5%的三羟甲基氨基甲烷-盐酸组成的缓冲液中，配制成12.5%聚乙二醇浓度的溶液，将上述溶液与抗人血色素血清按1∶2比例混合，制成粗制血痕试剂，然后将上述粗制血痕试剂置于8℃温度环境下冷处理24小时后装入试管内，通过离心设备6000转/分速度的旋转，经20分钟左右时间使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，即获得血痕试剂，这种血痕试剂的重量百分比组成是聚乙二醇4.17%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸29.16%，抗人血色素血清66.67%。
将10.5%的聚乙二醇加入到89.5%的三羟甲基氨基甲烷-盐酸组成的缓冲液中，配制成10.5%聚乙二醇浓度的溶液，将上述溶液与抗人血色素血清按1∶2比例混合，制成粗制血痕试剂，然后将上述粗制血痕试剂置于4°温度环境下冷处理24小时后装入试管内，通过离心设备10000转/分速度的旋转，经20分钟左右时间使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，即获得血痕试剂，这种血痕试剂的重量百分比组成是聚乙二醇3.5%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸29.83%，抗人血色素血清66.67%。
使用上述血痕试剂可采用《玻片法》鉴定血痕种属，操作时，只需取得裸眼可见(针尖大小)的血痕，置玻片上，加一滴血痕试剂(简称PEG-抗人Hb血清)，2分钟之内即可根据是否出现沉淀鉴定出是人血与否。这种《玻片法》鉴定血痕种属的方法处于国内外该领域中的领先水平，具有快速、简便、微量，不需仪器设备等优点。
权利要求
1.一种主要由抗人血色素血清构成的血痕鉴定试剂，其特征在于血痕鉴定试剂的组成是聚乙二醇，三羟甲基氨基甲烷-盐酸液，抗人血色素血清，其重量百分比组分分别是聚乙二醇2.83-4.17%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸液29.16-30.5%，抗人血色素血清66.67%。
2.如权利要求1所述的血痕鉴定试剂，其特征在于聚乙二醇3.5%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸液29.83%，抗人血色素血清66.67%。
3.一种主要由抗人血色素血清构成的血痕鉴定试剂的制备方法，其特征在于先将8.5%-12.5%的聚乙二醇加入到87.5-91.5%、PH7.5-8.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液中，此混合溶液再与抗人血色素血清按1∶2比例混合，配制成为粗制血痕试剂;将上述粗制血痕试剂，置于温度在1-8℃冰箱内冷处理24小时，然后将冷处理后的粗制血痕试剂装入试管内，通过离心机3000-10000转/分离心20分钟左右，使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，即获得血痕试剂。
4.如权利要求3所述的血痕鉴定试剂的制备方法，其特征在于制备过程中选择PH为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸作为缓冲液，将粗制血痕试剂置4°温度环境下冷处理24小时，并用离心机3000转/分的速度进行离心过程。
5.如权利要求3或4所述的血痕鉴定试剂的制备方法，其特征在于先将10.5%的聚乙二醇加入到89.5%的三羟甲基氨基甲烷-盐酸液中，此混合液与抗人血色素血清按1∶2比例混合制取血痕试剂。
全文摘要
本发明涉及的是一种用于鉴定血痕种属的血痕试剂以及制备血痕试剂的方法，这种血痕试剂由抗人血色素血清，聚乙二醇，三羟甲基氨基甲烷-盐酸液按组分配比配制而成，其制备过程是先将聚乙二醇加入到三羟甲基氨基甲烷-盐酸液中再与抗人血色素血清混合配制成粗制血痕试剂，然后经冷处理24小时，高速离心过程后吸取清晰的上清液即为所需的血痕试剂。本发明与现有技术相比，具有效价高，灵敏度高等特点，使用操作简单，鉴定方法快速、微量、简便，可携带至发案地点进行现场鉴定，具有较好的经济和社会效益。
文档编号G01N33/52GK1087996SQ9311696
公开日1994年6月15日 申请日期1993年9月14日 优先权日1993年9月14日
发明者杨军慧, 殷宗敏, 韩鑫贤, 朱虹辉 申请人:浙江省物资学校电子仪器厂