一种测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种用于茶叶和茶制品儿茶素含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 茶叶中的儿茶素类化合物是茶叶中含量较为丰富的一类功能性活性成分，具有广 泛的保健和药理功效W及较强的食品抗氧化特性，茶叶和茶制品中儿茶素现已成为医药和 食品领域研究的热点之一。
[0003] 现代科学已证明，儿茶素是一组具有环焼-3-醇结构的植物多酷，其总量约占茶 多酷的65?80%，主要包括儿茶素（C)、表儿茶素（EC)、梧儿茶素佑C)、表梧儿茶素巧GC)、 儿茶素梧酸醋（CG)、表儿茶素梧酸醋巧CG)、梧儿茶素梧酸醋（GCG)、表梧儿茶素梧酸 酉旨巧GCG)等【Irena Vovk, et al, Separation of eight selected flavan-3-ols on cellulose thin-layer chromatographic plates (J). Journal of Chromatography A, 2005, 1077(6): 188-194 ]〇
[0004] 儿茶素含量不仅是衡量茶叶及茶制品质量的重要指标，也是判断其药用价值 的重要依据，还用于茶树多酷代谢的生理调控机制的研究。因此，建立准确、高效、便捷 和低成本的儿茶素测定方法非常重要也显得十分迫切【Marina化Idi，et al. UHPLC determination of catechins for the quality control of green tea (J). Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2〇]A, 88(化）：307-314、。
[0005] 目前，茶叶及茶制品中多酷类物质的测定方法主要有两大类【王丽丽等，茶叶中茶 多酷检测方法研究进展（J)，茶叶科学技术，2013 (4) ;6-12】。一类是多酷总量测定法，主 要有分光光度法(酒石酸亚铁比色法，福林酷比色法)、氧化滴定法、原子吸收分光光度法、 近红外光谱法和电化学分析法等。该类方法的问题是不能测定儿茶素总量更不能分别测 定儿茶素的组分含量。另一类是茶多酷组分测定法，主要有特殊显色体系的分光光度法(香 草酵法和4-二甲基氨基肉桂酵法等)、高效液相色谱法（HPLC)、液质联用分析法和毛细管 电泳法等。该类方法能分别测定儿茶素中单个组分的含量巧日HPLC和毛细管电泳法)，特殊 显色体系分光光度法则只能测定儿茶素的总量。因此，目前测定儿茶素组分的首选方法为 HPLC法，我国现行测定茶叶中儿茶素组分及咖啡碱（CAF)的最新国家标准GB/T8313-2008 也是HPLC法。该法的问题是涉及柱层析分离，流动相组成复杂、操作繁琐、分析时间长，更 大的问题是仪器昂贵，操作技能要求高，并需采购各种价格昂贵的儿茶素标准品，该些因素 都会导致测定成本过高，不能满足中小型生产企业和茶产品贸易过程对儿茶素指标的例行 和快速测定需求。目前，鉴于HPLC法测定儿茶素存在的问题，特殊显色体系的分光光度法 仍然是茶叶及茶制品儿茶素测定中被广泛使用的方法，该种方法是在酸性条件下，香草酵 转变成阳离子分子，可与儿茶素中黄焼-3-醇结构中A环的间苯二酷或间苯H酷亲核位点 结合形成有色物质，得W实现分光光度法测定【Price M L et al,Aritical evaluation of the vanillin reaction as an assay for tannin in sorghum gain (J). Journal of AgricultMre and Fbod Chemist:ry, 1978, 26巧）：1214-1248、。
[0006]
【主权项】
1. 一种测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法，其特征在于：该方法是采用间苯二酚替 代儿茶素对照品配制成梯度标准溶液，将茶叶或茶制品制成待测液，在盐酸-香草醛显色 体系于510nm波长下，测定梯度标准溶液的吸光度，建立以摩尔浓度mmol/L为横坐标的标 准曲线并确定回归方程J 分，再测定待测液吸光度，从回归方程求得待测液的间苯二酚 单元浓度，然后根据稀释倍数、儿茶素对照品的单位相对分子质量包含的间苯二酚单元数# 和校正因子十算出茶叶或茶制品中的儿茶素含量。
2. 根据权利要求1所述的测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法，其特征在于包括以下 具体步骤： A、标准曲线和校正因子勺测定 将儿茶素对照品和替代对照品间苯二酚分别配制成浓度20mg/L~500mg/L的对照品和 替代对照品标准溶液储备液，从中分别移取〇. 1~1.OmL，用盐酸-香草醛显色体系显色后在 510nm波长处测定吸光度儿并绘制以摩尔浓度为横坐标的标准曲线，得到回归方程，获取 其斜率妨P_，并按下式采用作图法测定获得校正因子/:
其中d为吸光度，⑶摩尔浓度mmol/L，下标i表示替代对照品间苯二酚，下标j表示 儿茶素对照品，用Ji/CY对及7/0作图，其斜率值即为校正因子itt; 待测样品的前处理 不同类型的待测样品分别按下述方法进行前处理： (1) 茶叶样品：准确称取1. 5g茶叶粉末，置于锥形瓶中加入质量百分比浓度为60%的 乙醇60mL回流提取60分钟后得到提取液，蒸发除去大部分溶剂后，高速离心后用沙芯漏斗 过滤后分离出提取液，将其用质量百分比浓度为60%乙醇定容至25mL即为待测液； (2) 茶叶提取物样品：准确称取20~100mg的茶叶提取物样品，加水50mL用超声辅助 溶解后用水定容到l〇〇mL即为待测液； (3) 茶饮料样品：将茶饮料样品用0. 45ym滤膜过滤即得待测液； C、待测样品的测定 取待测液lmL，按制定标准曲线相同的测定步骤测定吸光度A; 儿茶素含量计算 待测样品中儿茶素含量的测定值按下式计算：
其中，Q为儿茶素总含量，mg/g;/为校正因子,d为待测样品溶液的吸光度；/为待测 样品溶液的体积，L; /?为待测样品溶液的稀释倍数；《为茶叶或茶叶提取物的干质量，g; 办为标准曲线截距；左为标准曲线的斜率L/mmol;你J儿茶素对照品的单位相对分子质量所 含间苯二酚单元个数，g卩
；当样品为茶饮料时，式中游]单位为mg/L，《为 1X1CT3L。
3. 根据权利要求1所述的测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法，其特征在于：盐 酸-香草醛显色体系是质量百分比浓度4%的香草醛甲醇溶液与盐酸混合制得，其中香草醛 在显色反应液中的质量占比为0. 5~3%,盐酸在显色反应液中的体积占比为5~40%,常温条 件下显色反应时间为15~20分钟。
4.根据权利要求1所述的测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法，其特征在于：儿茶素 对照品为儿茶素、表儿茶素、掊儿茶素、表掊儿茶素、儿茶素掊酸酯、表儿茶素掊酸酯、掊儿 茶素掊酸酯或表掊儿茶素掊酸酯。
【专利摘要】本发明公开了一种测定茶叶和茶制品儿茶素含量的方法，该方法是采用间苯二酚替代儿茶素对照品配制成梯度标准溶液，将茶叶或茶制品制成待测液，在盐酸-香草醛显色体系于510nm波长下，测定梯度标准溶液的吸光度，建立以摩尔浓度为横坐标的标准曲线并确定回归方程，再测定待测液吸光度，从回归方程求得待测液的间苯二酚单元浓度，然后根据稀释倍数、儿茶素对照品的单位相对分子质量包含的间苯二酚单元数和校正因子计算出茶叶或茶制品中的儿茶素含量；本发明所用间苯二酚性质稳定、易得且价格低廉，可解决儿茶素对照品来源受限、价格昂贵及测定成本高的问题，且操作简单、结果准确、重复性好。
【IPC分类】G01N21-78, G01N21-31
【公开号】CN104568930
【申请号】CN201410785831
【发明人】唐辉, 张晓春
【申请人】昆明理工大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月18日