一种QuEChERS-HPLC同时测定柑橘中醚菌酯和肟菌酯的技术的制作方法
【技术领域】
[0001]QuEchERS法是农药多残留分析中的一种简便、快速、安全、价格低廉的前处理方法。应用于Strobilurin类杀菌剂残留的分析检测技术主要有气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、色谱质谱联用(GC / MS、HPLC-MS)、酶联免疫分析(ELISA)等。
[0002]本发明涉及通过QuEChERS-HPLC方法同时检测柑橘中2种strobilurin杀菌剂一一醚菌酯和肟菌酯的残留，该技术具有简便、快速、安全、价格低廉和适应性广的特点。
【背景技术】
[0003]样品前处理目的是将待测组分提取、净化和富集。它是影响检测分析误差的主要因素，可以说由于前处理而引起的分析误差远远超过由仪器本身带来的分析误差。通常我们分析处理的样品基质较复杂，良好的前处理的方法可有效降低甚至避免基质效应对分析带来的干扰。随着科学技术的不断发展，前处理技术也向简单、快速、低廉、环境友好方面发展。QuEchERS法是农药多残留分析中的一种简便、快速、安全、价格低廉的分析方法。该方法的主要步骤是用含1%醋酸的乙腈对样品进行浸提，再加入无水硫酸镁与醋酸钠振荡促使其分层，随后进行分散固相萃取，即将浸提液转移至含有PSA吸附剂、硫酸镁的离心管中，运用Teflon涂层离心管进行离心，取离心液至自动进样瓶用于进行测定。QuEchERS法可根据可供选择的分析仪器种类、检测限、靶标农药的范围以及使用介质的差异进行适当调整。
[0004]醚菌酯和厢菌酯属于Strobilurin类杀菌剂,具有低毒、高效、广谱的特点，以其独特的作用机制广泛应用在农作物及防治真菌病害领域。柑橘类水果采后易腐烂，作为一个全球性问题弓I起世界范围内极大地关注。肟菌酯和醚菌酯对致病真菌弓丨起的大多数病害都有良好的活性，作为甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的代表，已在我国用于柑橘的病害防治。
[0005]由于运用于残留分析的前处理方法较多，因此选择合适的前处理方法对富集目标分析物十分重要。Strobilurin类杀菌剂在水果蔬菜中的目标物残留常用高速匀浆法进行粗提，而在谷物中则选用振荡提取，另外微波和超声波也可用于该类杀菌剂粗提取。QuEchERS法是农药多残留分析中的一种简便、快速、安全、价格低廉的分析方法。
【发明内容】
[0006]本发明公开了利用QuEChERS法提取柑橘中的2种strobilurin杀菌剂---醚菌酯和肟菌酯的技术方法。
[0007]本发明公开了利用高效液相色谱法同时检测柑橘中的2种St1bilurin杀菌剂一醚菌酯和肟菌酯的技术方法。
【附图说明】
[0008]图1醚菌酯(左)和肟菌酯(右)的标准曲线
[0009]图2醚菌酯和肟菌酯HPLC检测图谱:(a)MRL水平下混合标品图谱(b)橘肉空白样品(C)药物处理后的橘肉样品(d)橘皮空白样品(e)药物处理后的橘皮样品
[0010]1-醚菌酯，2-肟菌酯
[0011]图3柑橘中醚菌酯和肟菌酯添加回收率及RSD %
【具体实施方式】
[0012]I醚菌酯和肟菌酯的残留检测方法
[0013]1.1醚菌酯和肟菌酯的提取
[0014]采用结合AOAC和CEN标准方法确定的QuEChERS法。用1ml含1%乙酸的乙腈加入到1g样品(肉、皮)，匀浆提取后加4g无水硫酸镁和Ig无水乙酸钠，振荡离心，每毫升上清液加入150mg无水硫酸镁和20mg PSA和5mg C18中，漩涡振荡，离心，上清液用氮气吹干，流动相定溶，过0.22um微孔滤膜，待机检。
[0015]1.2醚菌酯和肟菌酯的检测
[0016]液相色谱相关参数的确定。最大吸收波长:将醚菌酯和肟菌酯标溶液做紫外扫描，确定两者同时检测的最佳波长为210nm。检测温度:40°C。流速:1ml / min。流动相:甲醇和水(80:20)。将标准原液稀释为0.05，0.25，1,2,5,10，20，50ug / ml的标准溶液，过膜处理后，每种浓度1uL取样上机检测，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图1)。醚菌酯标准曲线方程为y=10596x-479.94，R2 = 0.9996 ;肟菌酯标准曲线方程为y=11206x-328.13，R2=0.9999。醚菌酯和肟菌酯的保留时间分别在9.3min左右及12.3min左右(图2)。
[0017]1.3方法的准确性验证
[0018]1g空白样品(橘皮和橘肉)在中添加醚菌酯和肟菌酯标准溶液使添加浓度达到0.05，0.5，lmg/kg。每个浓度平行实验5次。采用1.1和1.2中的方法进行前处理和色谱检测，回收率及相对标准偏差，结果图3。本方法中醚菌酯和肟菌酯的LOD值为0.005和0.008mg/kg ；L0Q 值为 0.010 和 0.012mg/kg。
【主权项】
1.应用QuEChERS-HPLC同时测定柑橘中醚菌酯和肟菌酯的技术，包括以下内容: (1)利用QuEChERS法同时提取柑橘中醚菌酯和肟菌酯的技术 (2)柑橘中肟菌酯、醚菌酯的HPLC同时检测技术。
2.根据权利要求1所述的利用QuEChERS法提取柑橘中醚菌酯和肟菌酯，根据醚菌酯和肟菌酯的特性，选用PSA和ODS(4 / I, m / m)作为吸附剂进行分散固相萃取，对含醚菌酯和肟菌脂的柑橘样品进行净化。
3.根据权利要求1所述的柑橘中肟菌酯、醚菌酯的HPLC同时检测方法，其特征在于醚菌酯和厢菌酯在210nm有相对最大吸收,确定为最优同时检测吸收波长。
【专利摘要】醚菌酯和肟菌酯属于Strobilurin类杀菌剂，具有低毒、高效、广谱的特点，以其独特的作用机制广泛应用在农作物及防治真菌病害领域。柑橘类水果采后易腐烂，作为一个全球性问题引起了世界范围内极人地关注。柑橘贮藏过程中最常见的为青霉病和绿霉病。肟菌酯和醚菌酯对致病真菌，如青霉和绿霉引起的人多数病害都有良好的活性。醚菌酯和肟菌酯在我国已有生产同时已用于柑橘的病害防治。QuEchERS法是农药多残留分析中的一种前处理方法方法。高效液相色谱法是一种检测农药残留的普遍技术，适用于基层检测机构。本发明涉及通过QuEChERS-HPLC方法同时检测柑橘中2种strobilurin杀菌剂醚菌酯和肟菌酯在柑橘果品中的残留，该技术具有简便、快速、安全、价格低廉和适应性广的特点。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104569163
【申请号】CN201310472907
【发明人】戴贤君, 朱洁
【申请人】中国计量学院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2013年10月11日