一种防己指纹图谱的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种防己指纹图谱的测定方法。
【背景技术】
[0002] 防己来源于防己科植物粉防己St巧hania tetran化a S. Moore的干燥根。粉防 己根主要含有生物碱，其中大部分是双予基异唾晰生物碱.有汉防己碱（Te化an化ine), 即汉防己甲素化anfangchinA,Fanchinin);防己醇灵碱（防己诺林碱，Fangchinoline), 即汉防己己素化anfangchinB),又名去甲汉防己碱值emethyltetran化ine);汉防己 丙素化anfangchinC) ; 口尼新碱（Menisine,木防己素甲）；口尼定（Menisidine,木 防己素己）和轮环藤酷碱（切clanoline).亦含有小築胺炬erba-mine)、氧化防己碱 ODxofangchirine)、防己菲碱（Ste地ant虹ine)等。此外，粉防己根中还含有黄丽式、酷类、 有机酸、挥发油、糖类等。中国药典2010年版防己项下收载了液相色谱法测定粉防己碱和 粉防己碱的含量。
[0003] 中草药2007年第2期报道了崔国文等采用液相色谱反相柱，W己膳-磯酸溶液为 流动相，W防己诺林碱为参照物，测定发现8个共有峰，确定了其中2个成分。但是该文所采 集的受试对象粉防己大多产地是江西。粉防己的主要产地是浙江、安徽、江西、福建、广东、 广西、咸宁、黄冈等地。近年来对指纹图谱的研究不仅能对物质中成分的含量进行测定外， 还可W根据共有峰的出现与否及色谱峰的面积或峰高反映成分之间的比例，对监控含有多 成分的中药和中药制剂的质量、安全和稳定具有积极作用。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种防己指纹图谱的测定方法，该方法可有效 地监控防己药材的质量，保证其在临床或生产应用时的有效、安全和稳定。
[0005] 本发明的一种防己指纹图谱的测定方法，包括：
[000引 （1)取防己药材粉碎成中粉，精密称定，加入己醇，40KHZ超声溶解40min，过滤并 蒸干，残渣用甲醇溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；
[0007] (2)取木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照品，精密称定，分别加入 甲醇制成对照品溶液；
[0008] (3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己 指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Kromasil 100-5Ci8色谱柱；柱温；3(TC ;检测波长： 284nm ;进样体积；10 y 1 ;流速；1ml ? mirTV流动相；流动相A为0. 3%甲酸，流动相B为己 膳；梯度洗脱程序；〇 ?20min ;15%B ?19%B，20 ?30min ;19%B ?30%B，30 ?40min : 30% B ?60% B。
[000引所述步骤（1)中的防己中粉与己醇的比例为0. lg:20ml。
[0010] 所述步骤（1)中的微孔滤膜的孔径为0. 22 y m。
[0011] 所述步骤（1)中的己醇的体积百分数为70%，甲醇的体积百分数为15%。
[0012] 所述步骤（2)中的甲醇的体积百分数为15%。
[0013] 所述步骤（2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含木兰花碱0. 080mg、防己诺林碱 0. 170mg、粉防己碱0. 060mg的混合溶液。
[0014] 所述步骤（3)中的Kromasil 100-5C18色谱柱规格为4. 6mmX250mm，填料粒度大 小为5 y m。
[0015] 所述步骤（3)中的防己指纹图谱中4个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照 品保留时间的比较，确定峰1为木兰花碱，峰2为防己诺林，峰3为粉防己碱。
[0016] 有益效果
[0017] 本发明特对药材指纹图谱进行了研究，建立了液相指纹图谱测定条件，并进行了 方法学考察，根据多批大生产样品，制订了防己液相指纹图谱标准，在生产过程中可有效的 指导投料、规范生产操作，真正确保了临床用药的安全、有效、可靠，对所测得的指纹图谱的 辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图谱相似度评价系统，操作方便、快捷，W 其得出的相似度结果，对药材指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
【附图说明】
[001引图1为对照品指纹图谱；其中，1为木兰花碱；2为防己诺林碱；3为粉防己碱；
[0019] 图2为10个批次防己指纹图谱；
[0020] 图3为防己标准指纹图谱；其中，1为木兰花碱；2为防己诺林碱；3为粉防己碱。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，该些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可W对本发明作各种改动或修改，该些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0022] 实施例1
[002引 （1)供试品溶液制备：精密取防己中粉（防己选自饮片）0.l000g，加入70%己醇 20ml超声（40KHz，250W)处理40min，蒸干，残渣用15%甲醇溶解，定容至10ml，过0. 22ym 微孔滤膜即得。
[0024] (2)对照品溶液制备：分别取木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照 品适量，精密称定，用甲醇制得每1ml各含木兰花碱0. 080mg、防己诺林碱0. 170mg、粉防己 碱0. 060mg的混合溶液，即得。
[0025] 做色谱条件；色谱柱为Kromasil 100-5Ci8色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 y m);柱温： 301：;检测波长；284皿；流动相为0.3%甲酸（4)-己膳炬），梯度洗脱程序；0?20111111;15% B ?19% B，20 ?30min ;19% B ?30% B，30 ?40min ;30% B ?60% B。
[0026] (4)测定法：根据上述检测数据，得到防己的高效液相图谱，确立高效液相色谱峰 保留时间和峰面积值，然后计算各特征峰的相对保留时间的平均值和相对峰面积的平均值 W及标准差，分别与参照峰的平均保留时间和平均峰面积相除，作为标准指纹图谱的相对 峰保留时间和相对峰面积值，导出计算结果，制定标准指纹图谱数据，绘制标准指纹图谱； 指纹图谱包含至少3个特征峰和1个参照峰，各特征峰相对于参照峰（S)的相对保留时间 的波动范围符合下表的规定。
[0027] 表1防己标准指纹图谱相对保留时间波动范围
[0028]
【主权项】
1. 一种防己指纹图谱的测定方法，包括： (1) 取防己药材粉碎成中粉，精密称定，加入乙醇，40KHZ超声溶解40min，过滤并蒸干， 残渣用甲醇溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液； (2) 取木兰花碱对照品、防己诺林碱对照品、粉防己碱对照品，精密称定，分别加入甲醇 制成对照品溶液； (3) 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己指 纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱=Kromasil 100-5C18色谱柱；柱温：30°C ;检测波长： 284nm ;进样体积：10 μ 1 ;流速：1ml · HiirT1;流动相：流动相A为0. 3%甲酸，流动相B为乙 腈；梯度洗脱程序：0?2011^11:15%8?19%8,20?3011^11 :19%8?30%8,30?4011^11: 30% B ?60% B。
2. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（1) 中的防己中粉与乙醇的比例为0. lg:20ml。
3. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（1) 中的微孔滤膜的孔径为〇. 22 μ m。
4. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（I) 中的乙醇的体积百分数为70%，甲醇的体积百分数为15%。
5. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（2) 中的甲醇的体积百分数为15%。
6. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（2) 中的对照品溶液具体为：每Iml各含木兰花碱0. 080mg、防己诺林碱0. 170mg、粉防己碱 0. 060mg的混合溶液。
7. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（3) 中的Kromasil 100-5C18色谱柱规格为4. 6mmX 250mm,填料粒度大小为5 μ m。
8. 根据权利要求1所述的一种防己指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（3) 中的防己指纹图谱中4个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确 定峰1为木兰花碱，峰2为防己诺林，峰3为粉防己碱。
【专利摘要】本发明涉及一种防己指纹图谱的测定方法，包括：(1)取防己药材粉碎成中粉，精密称定，加入乙醇，超声溶解，过滤并蒸干，残渣用甲醇溶解并定容，滤膜过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)制备对照品溶液；(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得防己指纹图谱。本发明对于指导在临床用药及生产过程中对于原料药有效的投料指导、确保质量的可靠具有积极作用；操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对中药材防己质量进行评价，结论较为客观、准确。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104569200
【申请号】CN201410857194
【发明人】张宁
【申请人】上海现代中医药股份有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月30日