一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于粘菌素甲烧横酸钢中杂质的检测，具体设及粘菌素甲烧横酸钢中甲醒 残留量的检测，更具体的设及一种基于液相色谱仪检测粘菌素甲烧横酸钢中甲醒残留量的 方法。
【背景技术】
[0002] 粘菌素甲烧横酸钢是硫酸粘菌素的前体药物，是硫酸粘菌素引入甲烧横酸基后的 产物，目的是降低硫酸粘菌素的毒性。因为硫酸粘菌素毒性太大，在美国作为非肠道给药是 不允许的，一般用于耳朵的局部用药或口服用于治疗肠道感染，经化学修饰后的粘菌素甲 烧横酸钢毒性会大大降低，LD50降低了 50倍W上，因此可W作为静脉给药。粘菌素甲烧横 酸钢是绿脈杆菌感染的首选药物，可治绿脈杆菌性脑膜炎，也可用于败血症、泌尿系统、腹 部及其它手术后感染。但样品中甲醒残留的检测目前未见报道。
[0003] 甲醒为较高毒性的物质，在我国有毒化学品优先控制名单上甲醒高居第二位，甲 醒已经被世界卫生组织确定为致癌和致崎形物质，其可破坏生物细胞蛋白，引起人体过敏、 肠道刺激、食物中毒等疾患。
[0004] 粘菌素甲烧横酸钢生产制备过程中会引入甲醒，但目前粘菌素甲烧横酸钢中甲醒 残留量的检测在中国及EP、USP药典上均未体现。目前制药企业检测甲醒的方法较多，主要 为己酷丙酬法、盐酸苯阱法、滴定法，该几种方法试验线性关系差，精度低，不能满足要求， 而粘菌素甲烧横酸钢中甲醒的存在不仅加大了药物的毒性，降低的药物的药效，如果检测 不准，甲醒的限量不能保证就不仅仅是劣药，甚至会成为毒药，患者使用之后甚至会危及 生命造成不可挽回的局面，因而为严格控制产品质量，保证产品安全，粘菌素甲烧横酸钢中 甲醒的残留量的检测及其合适有效的检测方法就尤为重要。
【发明内容】
[0005] 本发明为解决粘菌素甲烧横酸钢中甲醒含量的检测，提供了一种基于液相色谱仪 检测粘菌素甲烧横酸钢中甲醒残留量的方法。
[0006] 本发明为实现其目的采用的技术方案是：
[0007] 一种检测粘菌素甲烧横酸钢中甲醒残留量的方法，所述的方法为一种基于液相色 谱仪检测粘菌素甲烧横酸钢中甲醒残留量的方法包括W下步骤：
[0008] a、制备供试品溶液；精密称定粘菌素甲烧横酸钢1. Og置烧杯中，加lOmL无水己 醇，超声lOmin后离屯、分离，精密量取5mL上清液置lOmL容量瓶中，并向容量瓶中精密加 入3mL磯酸水溶液，ImL 2, 4-二硝基苯阱无水己醇溶液，并用无水己醇稀释至刻度，盖好瓶 塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-lOh ;
[0009] b、制备对照品溶液A ;精密称定1. Ig甲醒溶液置100血量瓶中，用无水己醇溶解 定容至刻度，所述的甲醒溶液使用前进行滴定；
[0010] C、制备对照品溶液B ;精密量取1. 0血步骤b制备的对照品溶液A，置200血量瓶 中，用无水己醇定容至刻度；
[OCm] t制备对照品溶液C ;精密量取5. OmL步骤C制备的对照品溶液B，置50mL量瓶 中，用无水己醇定容至刻度；
[0012] e、制备对照品溶液：精密量取5. OmL步骤d制备的对照品溶液C，置lOmL量瓶中， 精密加入3mL磯酸水溶液，ImL 2, 4-二硝基苯阱无水己醇溶液，并用无水己醇稀释至刻度， 盖好瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-lOh ;
[0013] f、制备空白溶液：精密量取5mL无水己醇，置lOmL量瓶中，精密加入3mL磯酸水溶 液，ImL 2, 4-二硝基苯阱无水己醇溶液，并用无水己醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方 式使瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-lOh ;
[0014] g、色谱条件；采用Agilent C184. 6*250mm 5. Oum色谱柱，W磯酸溶液：己膳体积 比为50:50为流动相，色谱柱的柱温控制在25-35°C，流速为1. 0?1. 5血/min,检测波长为 336皿，进样量20yL ;
[0015] h、系统适应性试验：打开液相色谱仪，预热5min，将对照品溶液连续进样3针，要 求甲醒峰峰面积的RSD《2. 0% ;
[0016] i、测定；分别精密量取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液各20 注入液相色 谱仪，按步骤g的色谱条件进行测定，记录色谱图；
[0017] j、按外标法计算出粘菌素甲烧横酸钢中甲醒的残留量。
[001引步骤a、步骤e和步骤f中加入的磯酸水溶液按如下方法制备：精密量取85%磯酸 1血至50血容量瓶中，精密加水稀释至刻度，即得。
[0019] 步骤a、步骤e和步骤f中加入的2, 4-二硝基苯阱无水己醇溶液按如下方法制备： 称取2, 4-二硝基苯阱0. 05g至烧杯中，加无水己醇溶解，将溶解后的溶液转移至lOOmL容 量瓶中并加无水己醇溶解定容至刻度，即得。
[0020] 步骤g流动相所用的磯酸溶液按如下方法制备；精密称定磯酸5. 75g至烧杯中，力口 水溶解，将溶解后的溶液移至lOOOmL容量瓶中并加水稀释容定至刻度，调节抑值至2-3,即 得。
[0021] 所述的步骤a中最佳温度为30°C，最佳放置时间为化。
[0022] 所述的步骤e中最佳温度为30°C，最佳放置时间为化。
[0023] 所述的步骤g中色谱柱的最佳柱温为30°C，最佳流速为1. 0血/min。
[0024] 所述的步骤g流动相所用的磯酸溶液的最佳抑为2. 85。
[0025] 步骤k中外标法的计算公式如下；
[0026]
【主权项】
1. 一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在于，所述的方法为一种 基于液相色谱仪检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，包括以下步骤： a、 制备供试品溶液：精密称定粘菌素甲烷磺酸钠1.Og置烧杯中，加10mL无水乙醇，超 声lOmin后离心分离，精密量取5mL上清液置10mL容量瓶中，并向容量瓶中精密加入3mL 磷酸水溶液，lmL2, 4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用 倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-10h; b、 制备对照品溶液A:精密称定1.lg甲醛溶液置100mL量瓶中，用无水乙醇溶解定容 至刻度，所述的甲醛溶液使用前进行滴定； c、 制备对照品溶液B:精密量取1.OmL步骤b制备的对照品溶液A，置200mL量瓶中，用 无水乙醇定容至刻度； d、 制备对照品溶液C:精密量取5.OmL步骤c制备的对照品溶液B，置50mL量瓶中，用 无水乙醇定容至刻度； e、 制备对照品溶液：精密量取5.OmL步骤d制备的对照品溶液C，置10mL量瓶中，精密 加入3mL磷酸水溶液，lmL2, 4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好 瓶塞，用倒转的方式使瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-10h; f、 制备空白溶液：精密量取5mL无水乙醇，置10mL量瓶中，精密加入3mL磷酸水溶液， lmL2, 4-二硝基苯肼无水乙醇溶液，并用无水乙醇稀释至刻度，盖好瓶塞，用倒转的方式使 瓶内的液体混合均匀，于30-40°C放置5-10h; g、 色谱条件：采用AgilentC18 4. 6*250mm5.Oum色谱柱，以磷酸溶液：乙腈体积比 为50:50为流动相，色谱柱的柱温控制在25-35°C，流速为1. 0?1. 5mL/min，检测波长为 336nm，进样量 20yL; h、 系统适应性试验：打开液相色谱仪，预热5min，将对照品溶液连续进样3针，要求甲 醛峰峰面积的RSD< 2. 0% ; i、 测定：分别精密量取供试品溶液、对照品溶液、空白溶液各20yL，注入液相色谱仪， 按步骤g的色谱条件进行测定，记录色谱图； j、 按外标法计算出粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛的残留量。
2. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：步骤a、步骤e和步骤f中加入的磷酸水溶液按如下方法制备：精密量取85%磷酸lmL 至50mL容量瓶中，精密加水稀释至刻度，即得。
3. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：步骤a、步骤e和步骤f中加入的2, 4-二硝基苯肼无水乙醇溶液按如下方法制备：称取 2, 4-二硝基苯肼0. 05g至烧杯中，加无水乙醇溶解，将溶解后的溶液转移至100mL容量瓶中 并加无水乙醇溶解定容至刻度，即得。
4. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：步骤g流动相所用的磷酸溶液按如下方法制备：精密称定磷酸5. 75g至烧杯中，加水溶 解，将溶解后的溶液移至l〇〇〇mL容量瓶中并加水稀释容定至刻度，调节pH值至2-3,即得。
5. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：所述的步骤a中最佳温度为30 °C，最佳放置时间为7h。
6. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：所述的步骤e中最佳温度为30 °C，最佳放置时间为7h。
7. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：所述的步骤g中色谱柱的最佳柱温为30°C，最佳流速为1.OmL/min。
8. 根据权利要求4所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：所述的步骤g流动相所用的磷酸溶液的最佳pH为2. 85。
9. 根据权利要求1所述的一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，其特征在 于：步骤k中外标法的计算公式如下：
式中：A# :供试品溶液甲醛峰的峰面积； :对照品溶液甲醛峰的峰面积； W# :供试品的称重，单位为g; :对照品的称重，单位为g; 甲醛对照品的百分含量，单位为％ ;n:稀释倍数（n= 0? 00005)。
【专利摘要】一种检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，所述的方法为一种基于液相色谱仪检测粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛残留量的方法，包括以下步骤：a、制备供试品溶液；b、制备对照品溶液A；c、制备对照品溶液B；d、制备对照品溶液C；e、制备对照品溶液；f、制备空白溶液；g、色谱条件；h、系统适应性试验；i、测定；j、按外标法计算出粘菌素甲烷磺酸钠中甲醛的残留量。本方法能将甲醛峰与干扰峰完全分离，准确度高，重复性好，结果满意。
【IPC分类】G01N30-06, G01N30-88
【公开号】CN104569260
【申请号】CN201410841426
【发明人】周利彩, 苏晓娜
【申请人】河北圣雪大成制药有限责任公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月30日