一种川芎指纹图谱的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药指纹图谱领域，特别涉及一种川写指纹图谱的测定方法。
【背景技术】
[0002] 川写是中国药典收载的一味中药。川写是伞形科植物川写（Ligusticum chuanxiong)的干燥根茎。川写中含有多种化学成分；（1)生物碱，川写嗦（四甲 基化嗦，Tetramethyl-pyrazine)、黑麦草灵（Perlolyrine)亮氨醜苯丙酸内醜胺 (Leucylphenylalanine anhydri-de)、腺嚼 口產(Adenine)、S 甲胺（Trimethylamine)、 胆碱间loline)等；似挥发油，十五酸己醋巧pentadecanoate)、十六酸己 醋巧palmitate)、十走酸己醋巧heptadecanoate)、异十走酸己醋巧 isoheptadecanoate)、十八酸己醋巧octadecanoate)等；（3)内醋类化合物， 下基駄内醋炬u^bhtha-lide)、下帰基駄内醋炬ut^idene phthalide)、蔓本内醋 (Ligustilide)、新蛇床内醋（Neocnidilide).洋川写内醋（senkyunolide)A、B、C、E、F、I 等；（4)有机酸，如阿魏酸（Ferulic acid)、瑟丹酸（Sedanonic acid)、叶酸（Folic acid)、 香草酸（Vanillic acid)、咖啡酸（Caffeic acid)、原儿茶酸（Protocatechuic acid)、踪搁 酸（Palmitic acid)、亚油酸(Xinolenic acid)、4-轻基苯甲酸（4-Hy 化 oxybenzoic acid) 等；亦含苯駄类化合物4-轻基-3-下基苯駄（4-Hy化ox厂3-bu^bhthalide) W及苯駄衍 生物，如川写内醋（化idiumlactone)、川写酷烟luanxingol)等W及双苯駄衍生物。
[0003] 川写主要分布区域；四川、云南、贵州、广西、湖北、湖南、江西、浙江、江苏、陕西、甘 肃等功能与主治：活血行气，巧风止痛。用于胸瘍也痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，月经不调，经闭 痛经，癒瘤腹痛，头痛，风湿瘍痛。
[0004] 中国药典2010年版一部川写项下收载了薄层色谱的方法W川写对照药材和欧当 归内醋A为参照物鉴别川写药材；采用液相色谱法测定了川写中成分阿魏酸的含量；近年 来对于川写指纹图谱研究也有报道，如中医药学报2011年第2期报道了刘旭等人采用色谱 技术建立了 8种成分的指纹色谱分析方法；中国药事2011年10期发表了王英婷等对川写 药材HPLC法指纹图谱研究，所建立的方法共分离出12个共有峰。实验中所用药材购自本 地区药店，产地不详，由于药材产地的信息可反映其代表性。南京中医药大学学报2009年2 期报道了徐兰兰等人的研究成果"川写药材的HPLC指纹图谱研究"，文中仅识别出阿魏酸1 个化合物；从上述研究情况可W看出仅从一个成分或一类成分进行监控，尚不能真实反映 其内在质量。川写中所含有的成分不仅含有极性较小的挥发油类化合物，也含有较大极性 的生物碱类化合物，建立一种有效的分离检视测试方法，W全面地识别川写中主要成分。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种川写指纹图谱的测定方法，该方法在控制 川写的质量，有效的指导临床和生产中使用、保证用药的有效、安全和可靠具有积极作用。
[0006] 本发明的一种川写指纹图谱的测定方法，包括：
[0007] (1)取川写药材研细成中粉，精密称定，加入己醇，35KHz超声提取60min，放冷，补 足减失的溶剂重量，过0. 22 y m微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液；
[000引 （2)取盐酸川写嗦对照品、阿魏酸对照品、洋川写内醋I对照品、洋川写内醋A对照 品、蔓本内醋对照品、蛇床子素对照品、欧当归内醋A对照品，精密称定，分别加入甲醇制成 对照品溶液；
[0009] (3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得川写 指纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Kromasil 100-5C18色谱柱；柱温；2(TC ;检测波长： 278nm ;进样体积；lOy 1 ;流速；1ml 'mirTV流动相；流动相A为0. 1%甲酸水，流动相B为己 膳；梯度洗脱程序；〇 ?60min ; 15% B - 40% B，60 ?85min ;40% B - 55% B，85 ?90min : 55% B - 75% B，90 ?lOOmin ;75% B - 80% B。
[0010] 所述步骤（1)中的川写中粉与己醇的比例为0.2g:20ml，川写来源为伞形科植物 川写Ligusticimm chuanxiong化的干燥根茎，受试样品川写产地为四川、云南、贵州、广 西、湖北、湖南、江西、浙江、江苏、陕西、甘肃等区域。
[0011] 所述步骤（1)中的己醇的体积百分数为70%。
[0012] 所述步骤（1)中的微孔滤膜的孔径为0. 22 y m。
[0013] 所述步骤（2)中的对照品溶液具体为：每1ml各含盐酸川写嗦50ng、阿魏酸50ng、 洋川写内醋I 4化g、洋川写内醋A 8化g、蔓本内醋20ng、蛇床子素lOng、欧当归内醋A 3化g 的混合溶液。
[0014] 所述步骤（3)中的Kromasil 100-5C18色谱柱规格为4. 6mmX250mm，填料粒度大 小为5 y m。
[0015] 所述步骤（3)中的川写指纹图谱中18个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照 品保留时间的比较，确定1号为川写嗦、3号为阿魏酸、12号洋川写嗦内醋A、14号为蔓本内 醋，15号为蛇床子素、18号为欧当归内醋A。
[0016] 所述步骤（3)中的梯度洗脱具体为从15vol%己膳开始W线性洗脱方式经60min 洗脱达到40vol%，W线性洗脱的方式经15min达到55vol%己膳，W线性洗脱的方式经 15min达到75vol%己膳，W线性洗脱的方式经lOmin达到80vol%己膳，最后W 80vol%己 膳等度洗脱lOmin。
[0017] 有益效果
[001引本发明对制剂指纹图谱进行了研究，建立了液相色谱指纹图谱测定条件，并进行 了方法学考察，根据采自于川写主要产地10个批次的样本，制订了川写相色谱指纹图谱 标准，在临床应用和生产过程中可有效的指导用药和投料、规范生产操作，W确保用药的安 全、有效、可靠，对所测得的指纹图谱的辨认，采用国家药典委员会提供的中药色谱指纹图 谱相似度评价系统（2012. 130723版本）计算，操作方便、快捷，W其得出的相似度结果，对 指纹图谱进行评价，结论较为客观、准确。
【附图说明】
[0019] 图1为对照品指纹图谱；其中，1为盐酸川写嗦；2为阿魏酸；3为洋川写内醋I ;4 为洋川写内醋A ;5为蔓本内醋；6为蛇床子素；7为欧当归内醋A ;
[0020] 图2为10个批次川写指纹图谱；
[002。 图3为川写标准指纹图谱；其中，1为盐酸川写嗦；3为阿魏酸；7为洋川写内醋I ; 12为洋川写内醋A ; 14为蔓本内醋；15为蛇床子素；18为欧当归内醋A。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，该些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可W对本发明作各种改动或修改，该些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 1、名称
[0025] 名称；川写
[0026] 2、供试品采集信息；见下表：
[0027] 川写采集信息表
[0028]
[0029]
[0030] 3、供试品溶液的制备
[0031] 取川写中粉0.2旨，精密称定，分别加入70%己醇201111超声（351(化，280胖）提取 30min，放冷，补足减失的溶剂重量，过0. 22 y m微孔滤膜，取续滤液，即得。
[0032] 4、对照品溶液的制备
[003引川写中主要含有的成分为洋川写内醋A(Senkyunolide A)、洋川写内醋 USenkyunolide I)、川写嗦、阿魏酸、蔓本内醋对照品、蛇床子素、欧当归内醋A。经过试验
【主权项】
1. 一种川芎指纹图谱的测定方法，包括： (1)取川芎药材研细成中粉，精密称定，加入乙醇，35KHz超声提取60min，放冷，补足减 失的溶剂重量，过微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液； ⑵取盐酸川芎嗪对照品、阿魏酸对照品、洋川芎内酯I对照品、洋川芎内酯A对照品、 藁本内酯对照品、蛇床子素对照品、欧当归内酯A对照品，精密称定，分别加入甲醇制成对 照品溶液； (3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得川芎指 纹图谱；其中，色谱条件为：色谱柱：Kromasil 100-5C18色谱柱；柱温：20°C ;检测波长： 278nm ;进样体积：10iil ;流速：1ml 流动相：流动相A为0. 1%甲酸水，流动相B为乙 腈；梯度洗脱程序：〇 ?60min : 15% B - 40% B，60 ?85min :40% B - 55% B，85 ?90min : 55% B - 75% B，90 ?lOOmin :75% B - 80% B。
2. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（1) 中的川芎中粉与乙醇的比例为〇. 2g:20ml。
3. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（1) 中的乙醇的体积百分数为70 %。
4. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（1) 中的微孔滤膜的孔径为〇. 22 ii m。
5. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（2) 中的对照品溶液具体为：每lml各含盐酸川芎嗪50ng、阿魏酸50ng、洋川芎内酯I 40ng、洋 川芎内酯A 80ng、藁本内酯20ng、蛇床子素10ng、欧当归内酯A 30ng的混合溶液。
6. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（3) 中的Kromasil 100-5C18色谱柱规格为4. 6mmX250mm，填料粒度大小为5iim。
7. 根据权利要求1所述的一种川芎指纹图谱的测定方法，其特征在于：所述步骤（3) 中的川芎指纹图谱中18个色谱峰被确定为共有色谱峰，通过与对照品保留时间的比较，确 定1号为川弯嗪、3号为阿魏酸、12号洋川弯嗪内酯A、14号为藁本内酯、15号为蛇床子素、 18号为欧当归内酯A。
【专利摘要】本发明涉及一种川芎指纹图谱的测定方法，包括：(1)取川芎药材研细成中粉，精密称定，加入乙醇，超声提取，放冷，补足减失的溶剂重量，过微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液；(2)制备对照品溶液；(3)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定，即得川芎指纹图谱。本发明对于指导在临床用药及生产过程中对于原料药有效的投料指导、确保质量的可靠具有积极作用；操作方便、快捷，以其得出的相似度结果，对中药材川芎质量进行评价，结论较为客观、准确。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104597153
【申请号】CN201410852038
【发明人】张宁, 李强
【申请人】上海现代中医药股份有限公司
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2014年12月30日