裸花紫珠药材中三种有效成分含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及裸花紫珠药材中三种有效成分含量的测定方法，具体涉及裸花紫珠药 材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的 测定方法，属于医药领域。
【背景技术】
[0002] 裸花紫珠（i7aJ7ica/77a Hook. Et A rn.)为马鞭草科紫珠属植物。黎 药名补阀，主产于海南、广东和广西。其叶味微苦、涩，性平；有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消 肿的功能。用于化脓性炎症、急性传染性肝炎、呼吸道及消化道出血、血小板减少性紫癜；外 用治烧、烫伤及外伤出血，是海南黎族医生常用药材之一。
[0003] 国内外对裸花紫珠化学成分的研究报道较少，从中分离的成分主要有黄酮类、萜 类、挥发油和酚类等。裸花紫珠中黄酮类化合物主要有木犀草素及其配糖体；从裸花紫珠叶 中分离得到酚类化合物主要有酚苷类如毛蕊花糖苷、samioside，连翘酯苷等。
[0004] 裸花紫珠质量研究常用的方法有显微鉴别法、薄层色谱（TLC)法、紫外分光光度计 法，高效液相色谱（HPLC)法等。对裸花紫珠药材或其中药制剂的有效成分含量测定方法报 道中主要有黄酮类、萜类及酚苷类。目前对于裸花紫珠药材及其制剂中有效成分的含量测 定方法多采用高效液相色谱法对其中某一有效成分如木犀草素、毛蕊花糖苷、齐墩果酸等 进行含量测定，文献报道很多，专利如中国专利"裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量的测定方 法"（【申请号】201010289134. 1)。这种采用单一有效成分含量控制药材及其制剂的质量标 准不能全面控制药材质量，而采用不同测定方法测定两种以上有效成分的含量，事必使得 测定工作繁重，测定周期延长，不利于实际工作特别是企业大生产中推广及操作。目前采用 一种测定条件同时测定两种以上有效成分的测定方法鲜有报道。
[0005] 本发明提供了一种测定方法，采用高效液相色谱可以同时测定裸花紫珠药材中毛 蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羟基_3,7,3'-三甲氧基黄酮三种有效成分的含量。这 种同时测定裸花紫珠药材中多个有效成分含量的分析方法，不仅完善了裸花紫珠药材质量 控制的方法，而且方法可靠，易操作。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种同时测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及 5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的测定方法。
[0007] 实现本发明目的的技术方案如下： 采用高效液相色谱测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5,4'-二羟 基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分含量。色谱条件与系统适用性为：用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，流动相为有机溶剂一酸性溶液，采用梯度洗脱，如下 ： O-IOmin有机溶剂比例为10%~50% ; 10-20min有机溶剂比例为20%~60% ; 20-30min有机溶剂比例为25%~70% ; 30-40min有机溶剂比例为30%~80% ; 40-50min有机溶剂比例为35%~80% ; 50-60min有机溶剂比例为40%~80%， 酸性溶液浓度为〇-〇. 3%，检测波长320-360nm，柱温25°C -40°C。
[0008] 所述流动相中的有机溶剂包括甲醇或乙腈中的一种，甲醇和乙腈均为色谱纯；酸 性溶液的酸包括磷酸、乙酸或甲酸中的一种，磷酸、乙酸和甲酸均为分析纯。
[0009] 所述色谱条件与系统适用性优选为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相 为甲醇一0. 15%磷酸水溶液，采用梯度洗脱，如下： 0-5min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一 0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35111丨11甲醇一0.15%磷酸水溶液75:25， 检测波长350nm，柱温40°C。
[0010] 对照品溶液制备：取毛蕊花糖苷，木犀草素和5, 4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基 黄酮对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶解分别约制成每I mL各含毛蕊花糖苷1. 48啤、 木犀草素0.05 mg和5,4'-二羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮0.13 mg的混合对照品溶液， 微孔滤膜（0.22 μ m)过滤即得。
[0011] 供试品溶液制备：取干燥裸花紫珠药材粉末约I. 〇g，精密称定，置于100 mL具塞 锥形瓶，精密加入75%甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用 75%甲醇补足减失的重量，摇匀，0. 45 μ m滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0012] 分别吸取对照品溶液、供试品溶液各5 μ L，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0013] 该方法能够准确有效的测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素及5, 4'-二 羟基-3, 7, 3'-三甲氧基黄酮三种有效成分的含量，可进一步提高裸花紫珠药材的质量标 准，确保裸花紫珠药材的质量和临床疗效。 1.线性关系考察 分别精密量取毛蕊花糖苷，木犀草素和5,4'-二羟基_3,7,3'-三甲氧基黄酮对照 品混合溶液为0. 2mL、0. 5mL、l. 0mL、2. 0mL、5. OmLUO. OmL置于10 mL容量瓶，加75%甲醇稀 释至刻度，摇匀即得系列对照品混合液①，②，③，④，⑤，⑥。在上述色谱条件下测定，精密 吸取5PL进样，测定峰面积，以浓度（X，Pg. mL-Ι)为横坐标，峰面积（Y)为纵坐标进行线性 回归，绘制标准曲线。结果表明，在该浓度范围内，3成分浓度与峰面积呈良好的线性关 系。
[0014] 表1线性关系试验结果
【主权项】
1. 裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4'-二羟基-3, 7,3'-三甲氧基黄酮 三种有效成分含量的测定方法，采用高效液相色谱法，其特征在于：色谱条件与系统适用性 为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为有机溶剂一酸性溶液，采用梯度洗脱，如 下： O-IOmin有机溶剂比例为10%~50% ; 10-20min有机溶剂比例为20%~60% ; 20-30min有机溶剂比例为25%~70% ; 30-40min有机溶剂比例为30%~80% ; 40-50min有机溶剂比例为35%~80% ; 50-60min有机溶剂比例为40%~80%， 酸性溶液浓度为〇-〇. 3%，检测波长320-360nm，柱温25°C -40°C。
2. 如权利要求1所述测定方法，其中流动相中有机溶剂为甲醇或乙腈，酸性溶液为磷 酸或乙酸或甲酸。
3. 如权利要求1所述测定方法，其中酸性溶液浓度为0. 15%。
4. 如权利要求1所述测定方法，其色谱条件与系统适用性优选为以下条件：用十八烷 基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇一0. 15%磷酸水溶液，采用梯度洗脱，如下： 0-5min甲醇一0. 15%磷酸水溶液38:62 ; 5-14min甲醇一0. 15%磷酸水溶液45:55 ; 14-23min甲醇一0. 15%磷酸水溶液60:40 ; 23-30min甲醇一0. 15%磷酸水溶液70:30 ; 30-35min甲醇一0. 15%磷酸水溶液75:25， 检测波长350nm，柱温40°C。
【专利摘要】本发明涉及裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷、木犀草素、5,4′-二羟基-3,7,3′-三甲氧基黄酮三种有效成分含量的测定方法，属于医药领域。采用高效液相色谱法，其色谱条件与系统适用性为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为有机溶剂—酸性溶液，采用梯度洗脱，酸性溶液浓度为0-0.3%，检测波长320-360nm，柱温25℃-40℃。本发明建立采用HPLC法同时测定裸花紫珠药材中多个有效成分含量的分析方法，方法可靠易操作，进一步提高裸花紫珠药材的质量标准，确保裸花紫珠药材的质量和临床疗效。
【IPC分类】G01N30-36
【公开号】CN104634903
【申请号】CN201310555020
【发明人】刘明生, 盛琳, 关薇薇, 董琳, 蔡金平
【申请人】海南医学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2013年11月11日