一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物方法
【技术领域】
[0001]一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物方法，属于食品检测技术领域。
【背景技术】
[0002]氧氟沙星(OFL)是一种主要的氟喹诺酮类抗生素，主要应用于动物的细菌感染性疾病的防治工作。由于该药物在动物体内代谢时间较长，环境中不易降解等特点，于是氟喹诺酮类药物(FQs)不可避免地给我们食品安全带来了潜在的危害。世界各国为保证食品安全，对氟喹诺酮类药物(FQs)的使用和在食品中的安全限量进行了限制，目前仅在我国、欧盟、日本和中国香港等国家和地区允许有药物残留存在。其中欧盟规定:氟喹诺酮类药物(FQs)在动物肌肉、肝脏和肾脏中残留量不得超过30yg kg-1。为适应国内外的发展，建立灵敏而高效的氟喹诺酮类药物(FQs )检测方法是当务之急。同时由于氟喹诺酮类药物(FQs)在食品中的残留主要以痕量形式存在，因此需要利用富集材料来提高它的浓度，使其在检测样本中的含量达到富集和浓缩的效果，从而用现有的检测手段检测出来就显得非常重要。然而氟喹诺酮类药物(FQs)在水中溶解性很低，在常见的商业ODS固相萃取柱上富集效果不太理想，因此研制出对氟喹诺酮类药物(FQs)具有高吸附容量和高选择性的吸附剂意义重大。
【发明内容】
[0003]为保证食品安全适应国内外的发展需要，建立灵敏而高效的氟喹诺酮类药物(FQs)检测方法是当务之急，本方法以纳米硅球为基质并牺牲该基质，以氧氟沙星为模板的中空印迹材料合成并将中空印迹材料作为快速吸附剂，结合高效HPLC-UV对氟喹诺酮类药物(FQs)的残留检测，应用到牛奶样品中得到了令人满意的富集效果和理想的重现性和回收率。
【具体实施方式】
[0004]1、首先合成粒径均一的二氧化硅微球作为单分散性的基质，之后通过在其表面做修饰形成以氧氟沙星(OFL)为模板的分子印迹聚合物，然后通过刻蚀硅氧化物形成中空结构聚合物:
①量取0.92 mL (860 mg)四乙氧基硅烷(TEOS)溶于54 mL无水乙醇中，缓慢滴加1.00 mL浓氨水(NH3浓度25%-28%)，再加入1.00 mL超纯水，保持250 rpm搅拌速度，室温搅拌4 h，静置。15000 rpm离心三次除去上清液中未反应物质，收集沉淀重新分散于乙醇中，4000 rpm离心去除大块颗粒，留下上清液，得到分散均一的二氧化硅微球备用；②表面聚合反应称取1.0 g 二氧化硅微球，分散于无水乙醇中，加入0.50 mL 3-(异丁烯酰氯)丙基三甲氧基硅烷(MATMS)，室温搅拌24 h，离心弃去未反应的硅烷偶联剂，(记做Si02@MATMS)，干燥至恒重；③称取500 mg Si02@MATMS，超声分散于20.0 mL乙腈溶液中，搅拌下依次加入0.1 mmol模板分子氧氟沙星(OFL) (36.18 mg) ,0.4 mmol (35 μ L)甲基丙烯酸(MAA),冰浴搅拌8 h,使之预聚合完全；加入2.0 mmol (0.38mL)二甲基丙烯酸乙二醇酯(EGDMA)作为交联剂，41 UL (40.0 mg)邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)作为聚合物塑化剂，超声使完全分散后，冰水浴下搅拌30 !1^11，之后加入20.0 mg偶氮二异丁腈(AIBN)作为引发剂，氮气鼓泡除氧5 min，密封，隔绝空气，溶液置于油浴中60°C恒温磁力搅拌24 h.聚合后冷却得到氧氟沙星表面印迹聚合物(记做Si02@0.1MDP MIP)。④中空印迹材料的合成取100 mg氧氟沙星表面印迹聚合物置于4.0 mL聚四氟乙烯离心管中，加入浓氢氟酸(HF40%水溶液)至浸没为止,涡旋震荡15 min,静置2 h,离心水洗至中性,干燥至恒重,用乙醇离心洗涤三次以上，再用甲醇-乙酸溶液(80:20，v/v)索氏提取48 h，至提取液中氧氟沙星(OFL)在λ =300 nm吸收峰高度不变为止，之后甲醇提取24 h以除尽乙酸，真空干燥至恒重得到中空印迹材料(MIP )。
[0005]2、分析检测:取保存于4°C新鲜纯牛奶10.0 mL，加入1.0 mL乙腈，加入等质量的OFL，NOR和ENR溶于其中，再加入若干体积5 mol L-1HCl水溶液，涡旋震荡3 min，而后12000 rpm下离心10 min。收集上清液，滴加若干乙腈，若有浑浊出现，则继续上述操作至无浑浊出现为止；取20.0 mg MIP加入到上清液中，涡旋震荡15 min使其吸附完全，静置，离心，弃上清液；用洗脱液对上述沉淀进行解吸附作用:加入一定体积的洗脱液，涡旋，离心，取上清液。为使样品进一步的富集，我们将洗脱溶液N2挥干，0.5 mL流动相重新溶解，用0.45 μ m尼龙膜过滤后进样，高效液相色谱法HPLC-UV分析，即可准确快速检测氟喹诺酮类药物(FQs)在牛奶中残留。
【主权项】
1.一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物方法，其特征在于以纳米硅球为基质并牺牲该基质，以氧氟沙星为模板的中空印迹材料合成并将中空印迹材料作为快速吸附剂，结合高效液相色谱法(HPLC-UV)对氟喹诺酮类药物(FQs)的残留检测，应用到牛奶样品中得到了令人满意的富集效果和理想的重现性和回收率。
【专利摘要】一种检测牛奶中氟喹诺酮类药物方法，属于食品检测技术领域，为适应国内外的食品安全的需求，建立灵敏而高效的氟喹诺酮类药物（FQs）在牛奶中的残留检测方法，本方法以纳米硅球为基质并牺牲该基质，以氧氟沙星为模板的中空印迹材料合成并将中空印迹材料作为快速吸附剂，结合高效液相色谱法HPLC-UV对氟喹诺酮类药物（FQs）的残留检测，应用到牛奶样品中得到了令人满意的富集效果和理想的重现性和回收率。
【IPC分类】G01N30-02
【公开号】CN104698095
【申请号】CN201310660374
【发明人】周春红, 汤万进, 张海霞
【申请人】甘肃省产品质量监督检验中心
【公开日】2015年6月10日
【申请日】2013年12月10日