香附药材指纹图谱的构建方法及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种香附药材指纹图谱的构建方法及 其检测方法。
【背景技术】
[0002] 香附为莎草科植物莎草的干燥根茎。性辛，微苦，微甘，平。气香，味微苦。具有疏 肝解郁，理气宽中，调经止痛之功效。用于肝郁气滞，胸肋胀痛，疝气疼痛，乳房胀痛，脾胃气 滞，脘腹痞闷，胀满疼痛，月经不调，闭经痛经等症。
[0003] 香附为干燥根茎入药，目前存在着多种根茎入药的香附已混淆品，例如水香附、竹 节香附等，而现有技术中对于检测香附真伪的方法较为复杂，且结果误差较大。因此，有必 要建立一种全面、直观、快速的检测方法。
【发明内容】
[0004] 基于此，本发明提供了一种香附药材指纹图谱的构建方法。
[0005] 具体的技术方案：
[0006] 一种香附药材指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：
[0007] ⑴对照品溶液的制备：
[0008] 精密称取α -香附酮对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；
[0009] (2)供试品溶液的配制：
[0010] 精密称取香附药材粉末，加入甲醇，超声提取或回流提取20-40min，过滤，即得所 述供试品溶液；
[0011] ⑶测定：
[0012] 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到 由16个共有特征峰构成的香附药材指纹图谱。
[0013] 在其中一个实施例中，步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱 柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为0. 8-1. 2ml/min ;检 测波长为252-256nm ;柱温23-27°C。
[0014] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0_45min，流动相A的体积百分数由 40%变化至80% ;45-60min，流动相A的体积百分数维持80%。
[0015] 在其中一个实施例中，检测波长为254nm，柱温为25°C。
[0016] 本发明的另一目的是提供一种香附药材指纹图谱的检测方法。
[0017] 具体的技术方案如下：
[0018] 一种香附药材指纹图谱的检测方法，包括如下步骤：
[0019] (1)对照品洛液的制备：
[0020] 精密称取α -香附酮对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液；
[0021] (2)供试品溶液的配制：
[0022] 精密称取香附药材粉末，加入甲醇，超声提取或回流提取20_40min，过滤，即得所 述供试品溶液；
[0023] (3)测定：
[0024] 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得。
[0025] 在其中一个实施例中，步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱 柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式；流速为0. 8-1. 2ml/min ;检 测波长为252-256nm ;柱温23-27°C。
[0026] 在其中一个实施例中，所述梯度洗脱方式为：0_45min，流动相A的体积百分数由 40%变化至80% ;45-60min，流动相A的体积百分数维持80%。
[0027] 在其中一个实施例中，步骤（3)中，高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色 谱柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱方式为： 0-45min，流动相A的体积百分数由40%变化至80% ;45-60min，流动相A的体积百分数维 持80%。；流速为1.0 ml/min ;检测波长为254nm ;柱温25°C。
[0028] 本发明的有益效果如下：
[0029] 本发明经发明人的大量实验和研宄，确定了制备供试品溶液和对照品溶液的方 法，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出香附药材的指纹图谱。采用本申 请方法构建的指纹图谱以及检测方法可以准确地鉴定香附药材，精密度高，且节约试剂。
【附图说明】
[0030] 图Ia为溶剂峰比较图；
[0031] 图Ib为标准品α -香附酮HPLC图；
[0032] 图2为不同流动相HPLC图；
[0033] 图3为流动相不同起始梯度HPLC图；
[0034] 图4为流动相不同梯度HPLC图；
[0035] 图5为不同流速HPLC图；
[0036] 图6为不同柱温HPLC图；
[0037] 图7为不同波长HPLC图；
[0038] 图8为不同色谱柱HPLC图；
[0039] 图9为六种提取溶剂HPLC图；
[0040] 图10为不同提取体积HPLC图；
[0041] 图11为不同种提取方法HPLC图；
[0042] 图12为不同提取时间HPLC图；
[0043] 图13为香附样品导出HPLC图谱；
[0044] 图14为香附药材指纹图谱的对照谱图；
[0045] 图15为实施例2待测药材的HPLC谱图。
【具体实施方式】
[0046] 以下通过实施例对本申请做进一步阐述。
[0047] 实施例1香附药材指纹图谱的构建方法
[0048] 一、仪器、试药与材料
[0049] 1、仪器
[0050] KQ - 100B型超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；T-214型电子分析天平 (Denver公司）；Waters e2695高效液相色谱系统，Empower工作站，含四元梯度泵、自动进 样器、紫外检测器（Waters公司）。
[0051] 2、试剂
[0052] 冰乙酸（色谱纯，天津市化学试剂研宄所）；甲醇、乙腈（色谱纯，Honeywell公 司）；水为超纯水。
[0053] 对照品为α-香附酮对照品（供鉴别用，中国药品生物制品检定所，批号 110748200507)
[0054] 3、材料
[0055] 香附药材（广州白云山星群（药业）股份有限公司提供，共8批，批号为 父61405-01、父61307-01、父61104-01、父61111-02、20110501、20111201、广西、广东）
[0056] 二、方法与结果
[0057] 1、色谱条件
[0058] 色谱柱：Kromasil 100-C18, 250X4. 6mm，以甲醇（A)-水⑶为流动相系统梯度洗 脱（0_45min，40 % - 80 % A ;45_60min，80 % A)，流速为 1.0 mT, · mirf1，检测波长 254nm ;柱 温25°C，进样量10yL。
[0059] 2、对照品溶液的制备
[0060] 用微量进样器吸取α -香附酮对照品约50 μ 1，加甲醇适量，配制每1ml含10 μ 1 的溶液，作为对照品溶液。
[0061] 3、供试品溶液的制备
[0062] 取香附药材粉末（过60目筛）约lg，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇10ml，密塞，称重，超声处理（功率160W，频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
[0063] 4、方法学考察
[0064] 4. 1溶剂峰的考察
[0065] 取香附药材粉末（过60目筛）约lg，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 10ml，密塞，称重，超声处理（功率160W，频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补 足减失的重量，摇匀，0.22 μπι微孔滤膜滤过，取续滤液，HPLC分析香附药材样品和甲醇溶 剂空白，得图1。
[0066] 由图Ia可知，通过比较甲醇和香附药材图谱，可以发现，溶剂对主要的色谱峰无 太大影响。
[0067] 图Ib为α -香附酮对照品的标准HPLC谱图。
[0068] 4. 2流动相组成的选择
[0069] 取香附药材粉末（过60目筛）约lg，精密称定，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入 甲醇10ml，密塞，称重，超声处理（功率160W，频率59kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲 醇补足减失的重量，摇匀，〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，取续滤液HPLC分析，流动相组成及梯度 见表1，得图2。
[0070] 表1四种流动相组成信息
[0071]
【主权项】
1. 一种香附药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 对照品洛液的制备： 精密称取a-香附酮对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液； (2) 供试品溶液的配制： 精密称取香附药材粉末，加入甲醇，超声提取或回流提取20-40min，过滤，即得所述供 试品溶液； (3) 测定： 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由16 个共有特征峰构成的香附药材指纹图谱。
2. 根据权利要求1所述的香附药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，步骤（3)中，高 效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，采 用梯度洗脱方式；流速为〇. 8-1. 2ml/min;检测波长为252-256nm;柱温23-27°C。
3. 根据权利要求2所述的香附药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱 方式为：〇-45min，流动相A的体积百分数由40%变化至80% ;45-60min，流动相A的体积百 分数维持80%。
4. 根据权利要求2或3所述的香附药材指纹图谱的构建方法，其特征在于，检测波长为 254nm，柱温为 25°C。
5. -种香附药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 对照品洛液的制备： 精密称取a-香附酮对照品，加甲醇稀释，得对照品溶液； (2) 供试品溶液的配制： 精密称取香附药材粉末，加入甲醇，超声提取或回流提取20-40min，过滤，即得所述供 试品溶液； (3) 测定： 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，即得。
6. 根据权利要求5所述的香附药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤（3)中，高 效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，采 用梯度洗脱方式；流速为〇. 8-1. 2ml/min;检测波长为252-256nm;柱温23-27°C。
7. 根据权利要求6所述的香附药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱 方式为：〇-45min，流动相A的体积百分数由40%变化至80% ;45-60min，流动相A的体积百 分数维持80%。
8. 根据权利要求5所述的香附药材指纹图谱的检测方法，其特征在于，步骤（3)中， 高效液相色谱仪的条件为：色谱柱为C18色谱柱；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B， 采用梯度洗脱方式，所述梯度洗脱方式为：〇-45min，流动相A的体积百分数由40%变化至 80% ;45-60min，流动相A的体积百分数维持80%。；流速为I.Oml/min;检测波长为254nm; 柱温25°C。
【专利摘要】本发明公开了一种香附药材指纹图谱的构建方法及其检测方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备；(2)供试品溶液的配制；(3)测定：分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪中进行测定，得到由16个共有特征峰构成的香附药材指纹图谱。本发明经大量实验和研究，确定了制备供试品溶液和对照品溶液的方法，及高效液相色谱仪的色谱条件的最优参数，由此构建出香附药材的指纹图谱。采用本申请方法构建的指纹图谱以及检测方法可以准确地鉴定香附药材，精密度高，且节约试剂。
【IPC分类】G01N30-02, G01N30-06
【公开号】CN104777255
【申请号】CN201510188904
【发明人】姚江雄, 许招懂, 蒋莉娟, 方铁铮
【申请人】广州白云山星群(药业)股份有限公司
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年4月20日