高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及动物饲料的检测领域，特别是一种高精度检测饲料中的莱克多巴胺含 量的方法。
【背景技术】
[0002] 样品前处理是分析检测过程的关键环节，是浓缩被测定的痕量组分，提高方法的 灵敏度，及除去对分析系统有干扰的物质的重要手段。萃取是从样品集体中分离出目标化 合物的一项技术，是样品预处理中最重要的方法之一。目前，液液萃取仍然是应用最广泛的 样品制备方法之一，但是，传统的液液萃取的操作繁琐费时、有机溶剂消耗量大，而且容易 出现乳化现象的缺陷，使得在实际应用中具有一定的局限性。
[0003] 1998年，科学家提出了在传统的液液萃取的基础上，利用一种具有吸附性和较大 的比表面积的惰性多空填料作为介质，建立的一种新型高效样品的制备方法-介质液液萃 取（supportedliquidextraction简称SLE)，SLE萃取技术就是选用一种多孔性惰性材 料-煅烧硅藻土作为介质，取代分液漏斗，增大了两相接触时的作用面积，实现高效、快速 的萃取过程。
[0004] 当水溶液样品加样到固定的聚丙烯注射管中的煅烧硅藻土上后，经过一定时间 (一般分为几分钟），水相溶液以一层薄薄的液膜形式分布在填料表面，之后，将有机溶剂 从柱管上端加入，当互不相溶的两相在硅藻土表面接触的同时萃取立即发生，最后萃取液 在重力作用下流出，必要情况下，可以施加较小的压力，而水相保留在介质中。盛接的流出 液直接将溶剂吹干，复溶后，即可用于下一步分析检测。
[0005] 现有的国标和现有公开的文献并未涉及动物饲料中的莱克多巴胺的分离方法和 检测方法。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度检测饲料中的莱克多 巴胺含量的方法。
[0007] 本发明的技术方案为：一种高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，包括以 下步骤：
[0008] 步骤1 :取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心 处理，取离心处理后的上清液少量；
[0009] 步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟；
[0010] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴 胺的洗脱液；
[0011] 步骤4 :采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色 谱法的具体参数为：
[0012] 色谱柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID
[0013]柱温：室温
[0014]流动相：0. 05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0. 05%磷酸水溶液和乙腈的体 积比为100:12 ;
[0015] 检测器：UV检测器；
[0016]检测波长：226nm;
[0017]进样量：50yL;
[0018] 其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为8.0~10. 0的氨水-氯化铵缓冲液，所述的 二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中异丙醇和乙酸甲酯的重量比为0. 5~1:1。
[0019] 在上述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法中，所述的饲料样品为lg， 缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml，所述的步骤3中，每次洗脱时所用的洗脱 剂为0. 5ml。
[0020] 在上述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法中，所述的步骤1中，漩涡 混合器混合处理的时间为0. 5~1. 5分钟。
[0021] 在上述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法中，所述的步骤1中，所述 的离心处理的具体操作为：将经混合处理的溶液在离心机中以9000~11000转/分钟的速 度离心0? 5~1. 5分钟。
[0022] 在上述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法中，所述的SLE柱为奥秘山 东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱，所述的高效液相色谱法所采用的仪器型号为 LC-2010型高效液相色谱仪。
[0023] 本发明的有益效果如下：
[0024] 采用SLE法分离饲料中的莱克多巴胺分离效率高，本发明的缓冲溶液能够有效的 分离样品中的莱克多巴胺，二元洗脱剂对莱克多巴胺有特别优异的萃取效果，可以应用于 以96孔板结构为代表的高通量体系。结合HPLC法分析，本发明的方案的萃取率为：93.6%， 同时检测方法准确，其误差范围符合相关规定。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合【具体实施方式】，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对 本发明的任何限制。
[0026] 实施例1
[0027] 步骤1 :取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml;离心处理的转速为10000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为9. 0的氨水-氯化铵缓冲液。
[0028] 步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置3分钟；
[0029] 步骤3:采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的 洗脱液；每次消耗的洗脱剂为〇. 5ml，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，异 丙醇和乙酸甲酯的重量比为0. 8:1。
[0030] 实施例2
[0031] 步骤1:取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml;离心处理的转速为10000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为8. 0的氨水-氯化铵缓冲液。
[0032] 步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置4分钟；
[0033] 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的 洗脱液；每次消耗的洗脱剂为〇. 5ml，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，异 丙醇和乙酸甲酯的重量比为1:1。
[0034] 实施例3
[0035] 步骤1:取饲料样品lg，加入到5ml的缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理处理 1分钟后再经过离心处理，取离心处理后的上清液0. 5ml;离心处理的转速为10000转/分 钟，离心时间1分钟。所述的缓冲溶液为：ph为10. 0的氨水-氯化铵缓冲液。
[0036] 步骤2:将上清液加入到SLE柱后，静置4分钟；
[0037] 步骤3:采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱2次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的 洗脱液；每次消耗的洗脱剂为〇. 5ml，所述的二元洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，异 丙醇和乙酸甲酯的重量比为0. 5:1。
[0038] 标准样的制备
[0039] 称取莱克多巴胺标准品（纯度彡99% )0? 1000g，置于100ml容量瓶中，用重量比 为〇. 8:1的异丙醇和乙酸甲酯的混合物的溶剂溶解定容，其浓度为1000yg/ml;
[0040] 取上述浓度为l〇〇〇μg/ml的莱克多巴胺溶液于100ml容量瓶中，配制成为 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的标准样。
[0041] 对比例1
[0042] 与实施例1大体相同，不同的地方在于，步骤3中，洗脱剂为异丙醇与乙酸乙酯的 混合物，其体积比为40:60。
[0043]分析：
[0044] 检测方法具体为：
[0045] 仪器：LC-2010型高效液相色谱仪（日本岛津）
[0046] 色谱柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID
[0047] 柱温：室温
[0048] 流动相：0. 05%磷酸水溶液：乙腈=100:12 ;
[0049] 检测器：uv检测器；
[0050] 检测波长：226nm;
[0051]进样量：50yL
[0052] 以 0? 100yg/ml、0. 200yg/ml、0. 500yg/ml、1. 000yg/ml、2. 000yg/ml的标准 样进行测试，回归方程为Y= 667X，R2= 0. 9998,X为待测物浓度，Y为峰面积。
[0053] 以实施例1所萃取的样品为待测样品，待测样品的具体组分为70wt%玉米、 3〇wt%蛋白质伺料，其中蛋白质伺料由柏、棉柏和采柏组成，所述柏、棉柏和采柏的重 量比为4 : 1.5 : 0.5。此外，每千克待测组分中还加入有含有10mg莱克多巴胺的莱克多 巴胺溶液。
[0054] 待测样品分为10份，每份lg，采用实施例1的步骤1所述的方法进行操作，每份样 品平行取出2份0. 5ml的溶液，同一样品的所取得的两份0. 5ml的溶液为一组，共10组，每 组的溶液分别按照实施例1的步骤2-3进行操作和按照对比例1的步骤2-3进行操作。共 得到按实施例1所取得的10份洗脱液A，编号为A1-A10,和按照对比例1所取得的10份洗 脱液B，编号为B1-B10。
[0055] 按照上述检测方法进样检测，得到如下的检测结果：
[0056]
[0057]
【主权项】
1. 一种高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1:取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处 理，取离心处理后的上清液少量； 步骤2 :将上清液加入到SLE柱后，静置2~4分钟； 步骤3 :采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的 洗脱液； 步骤4 :采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测，所述的高效液相色谱法 的具体参数为： 色谱柱：C18 柱，150mm*3. 9mmID 柱温:室温 流动相：〇. 05%磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0. 05%磷酸水溶液和乙腈的体积比 为 100:12 ; 检测器：uv检测器； 检测波长：226nm; 进样量：50yL; 其中，所述的缓冲溶液为：Ph范围为8. 0~10. 0的氨水-氯化铵缓冲液，所述的二元 洗脱剂为异丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中异丙醇和乙酸甲酯的重量比为〇. 5~1:1。
2. 根据权利要求1所述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，其特征在于， 所述的饲料样品为lg，缓冲溶液为5ml，步骤2中所取的上清液为0. 5ml，所述的步骤3中， 每次洗脱时所用的洗脱剂为0. 5ml。
3. 根据权利要求1所述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，其特征在于， 所述的步骤1中，漩涡混合器混合处理的时间为〇. 5~1. 5分钟。
4. 根据权利要求3所述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，其特征在 于，所述的步骤1中，所述的离心处理的具体操作为：将经混合处理的溶液在离心机中以 9000~11000转/分钟的速度离心0? 5~L5分钟。
5. 根据权利要求1至4任一所述的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，其特 征在于，所述的SLE柱为奥秘山东科技有限公司生产的介质液液萃取SLE柱，所述的高效液 相色谱法所采用的仪器型号为LC-2010型高效液相色谱仪。
【专利摘要】本发明公开了一种高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法，包括以下步骤：步骤1：取饲料样品，加入到缓冲溶液中，经过漩涡混合器混合处理后再经过离心处理，取离心处理后的上清液少量；步骤2：将上清液加入到SLE柱后，静置2～4分钟；步骤3：采用二元洗脱剂对SLE柱洗脱至少两次，接收洗脱液，得到含有莱克多巴胺的洗脱液，步骤4：采用高效液相色谱法对步骤3得到的洗脱液进行检测。本发明的目的在于提供一种分离效率高、操作简单的高精度检测饲料中的莱克多巴胺含量的方法。
【IPC分类】G01N30-06, G01N30-02
【公开号】CN104820038
【申请号】CN201510240041
【发明人】陈学松, 吴岚, 邓水德, 赖秀梅, 蔡姬灵
【申请人】广西壮族自治区梧州食品药品检验所
【公开日】2015年8月5日
【申请日】2015年5月12日