一种植物组织的石蜡切片方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物领域，特别涉及一种植物组织的石蜡切片方法。
【背景技术】
[0002] 石蜡切片是组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法，主要用于观察细胞组织 的形态，制成的装片经过封片后可制成永久装片，并长期保存。
[0003] 常规的石蜡切片制作程序包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片染色等步骤，涉 及到的程序和环节繁多，周期长。并且不同组织材料所用的试剂、浓度、时间各不相同，并且 制作过程中容易出现切片弯曲、组织破碎等问题，造成制片失败。
[0004] 造成制片的失败的原因可以追溯到石蜡切片制作过程中的许多不足，包括脱水、 透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡及封片等等，如脱水不彻底，则会造成透明不彻底，从而使得石 蜡浸入组织不够充分，导致组织变形、切片失败等，所以整个石蜡切片制作过程需要大量的 时间摸索处理时间、试剂条件、处理方式等。
【发明内容】
[0005] 有鉴于此，本发明针对现有的石蜡切片方法中存在的上述问题和荞麦果皮材料特 点，提供一种新型荞麦果皮切片方法，通过"含水式"包埋的方法可以替代常规石蜡切片的 脱水、透明、浸蜡等步骤，同时在展片时用解剖针剥去石蜡替代脱蜡步骤，大大减少了切片 过程的时间和操作。该方法切出10~16ym厚度的荞麦果皮组织切片，组织完整、各部位 显示清晰，明显增强切片和观察效果。
[0006] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0007] 本发明提供了一种植物组织的石蜡切片方法，包括如下步骤：
[0008] 步骤1 :获得具有缺口、除去多余部位的目的植物组织；
[0009] 步骤2 :取所述目的植物组织浸泡，获得含水率为20 %~40 %的含水植物组织；
[0010] 步骤3 :将所述含水植物组织多余水分吸干，获得待包埋植物组织，经包埋、切片、 展片、分蜡、染色、封片。
[0011] 本发明中所述含水率指绝对含水率（果皮中水分的质量/果皮干重*100)。
[0012] 在本发明的一些具体实施方案中，所述植物组织为荞麦果皮。
[0013] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤1所述缺口的切割方式为在 所述植物组织距顶部和/或底部1/4~2/5处环形横切。
[0014] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤2所述浸泡采用65~70°C的 水浸泡所述目的植物组织5~lOmin。
[0015] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤3所述包埋为将盛有60~ 65°C的石蜡的包埋底模置于0°C冰浴15~25s后将所述待包埋植物组织的缺口朝上，转移、 浸入到盛有融化的石蜡的包埋底模，在所述包埋底模上架好包埋框，加入融化的石蜡以浸 没包埋框底部。
[0016] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤3所述融化的石蜡为60~ 65 °C的石蜡。
[0017] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤3所述切片获得的组织切片 的厚度为10~16 y m。
[0018] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤3所述展片是将所述组织切 片在45~50°C的水中展片；所述分蜡为将所述组织切片中待包埋植物组织四周的石蜡分 离。
[0019] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法步骤3所述染色为番红~固绿 染色，具体为：将展片、分蜡后的组织切片置于滴有一滴番红的凹形载玻片中染色15~ 2〇min，置于水中洗涤20~30min，每隔5min震荡一次，直至无红色染液从组织中渗出，然后 依次浸入50%、75%、85%的乙醇中，各2min;
[0020] 按照番红的染色方式，对番红染色后的组织切片进行固绿染色，时间10s，置于无 水乙醇中lOmin，二甲苯lOmin。
[0021] 在本发明的一些具体实施方案中，石蜡切片方法所述封片具体为吸取一滴二甲苯 于载玻片中央，将染色后的切片置于二甲苯中，展开，弃去多余的二甲苯，滴加一滴中性树 胶，用载玻片进行封片。
[0022] 具体的，本发明提供的植物组织石蜡切片方法包括以下步骤：
[0023] (1)利用双面刀片采用横切的方式，横切区域为种子最宽处与种脐之间部分；
[0024] (2)将（1)步骤中得到的果皮置于温水中浸泡；
[0025] 步骤（2)中的温水是指温度为65~70°C的纯净水，浸泡时间至为5~lOmin;
[0026] (3)用滤纸吸干（2)中浸泡过后的果皮表面以及内侧的水分，然后快速转移、浸入 到装有融化的石蜡的金属包埋底模中，然后在包埋底模上架好包埋框，再次加入适当融化 的石蜡；在步骤（3)中所涉及到的包埋方式为，将果皮切口朝上，缓慢浸入到包埋底模中， 底模中预先装满60~65°C的石蜡，并在冰上放置15~25s后，再将果皮浸入其中；
[0027] (4)切片，展片，染色
[0028] 将剥去石蜡后的组织切片置于滴有一滴番红的凹形载玻片中染色15~20min，然 后置于纯净水中洗涤20~30min，每隔5min震荡一次，直至无红色染液从组织中渗出，然后 依次浸入50 %、75%、85%的乙醇中，各2min，参照本方法中番红的染色方式，对组织切片 进行固绿染色，时间l〇s，然后置于无水乙醇中lOmin，二甲苯lOmin;
[0029] (5)封片
[0030] 吸取一滴二甲苯于载玻片中央，将组织切片置于二甲苯中，用解剖针缓慢将其展 开，用一次性吸管吸去多余的二甲苯，滴加中性树胶，用载玻片进行封片。
[0031] 本发明与常规石蜡切片方法过程对比，见表1。
[0032]表1本发明提供的石蜡切片方法与常规石蜡切片方法过程对比
【主权项】
1. 一种植物组织的石蜡切片方法，其特征在于，包括如下步骤： 步骤1:获得具有缺口、除去多余部位的目的植物组织； 步骤2 :取所述目的植物组织浸泡，获得含水率为20 %~40 %的含水植物组织； 步骤3 :将所述含水植物组织多余水分吸干，获得待包埋植物组织，经包埋、切片、展 片、分蜡、染色、封片。
2. 根据权利要求1所述的石蜡切片方法，其特征在于，所述植物组织为荞麦果皮。
3. 根据权利要求1或2所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤1所述缺口的切割方式 为在所述植物组织距顶部和/或底部1/4~2/5处环形横切。
4. 根据权利要求1至3任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤2所述浸泡采用 65~70°C的水浸泡所述目的植物组织5~lOmin。
5. 根据权利要求1至4任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤3所述包埋为将 盛有60~65°C的石蜡的包埋底模置于0°C冰浴15~25s后将所述待包埋植物组织的缺口 朝上，转移、浸入到盛有融化的石蜡的包埋底模，在所述包埋底模上架好包埋框，加入融化 的石蜡以浸没包埋框底部。
6. 根据权利要求5所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤3所述融化的石蜡为60~ 65 °C的石蜡。
7. 根据权利要求1至6任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤3所述切片获得 的组织切片的厚度为10~16 ym。
8. 根据权利要求1至7任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤3所述展片是将 所述组织切片在45~50°C的水中展片；所述分蜡为将所述组织切片中待包埋植物组织四 周的石蜡分离。
9. 根据权利要求1至8任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，步骤3所述染色为 番红~固绿染色，具体为：将展片、分蜡后的组织切片置于滴有一滴番红的凹形载玻片中染 色15~20min，置于水中洗绦20~30min，每隔5min震荡一次，直至无红色染液从组织中 渗出，然后依次浸入50 %、75 %、85 %的乙醇中，各2min ; 按照番红的染色方式，对番红染色后的组织切片进行固绿染色，时间l〇s，置于无水乙 醇中 lOmin，二甲苯 lOmin。
10. 根据权利要求1至9任一项所述的石蜡切片方法，其特征在于，所述封片具体为吸 取一滴二甲苯于载玻片中央，将染色后的切片置于二甲苯中，展开，弃去多余的二甲苯，滴 加一滴中性树胶，用载玻片进行封片。
【专利摘要】本发明涉及植物领域，特别涉及一种植物组织的石蜡切片方法。本方法中采用荞麦果皮经过温水浸泡后，果皮组织中含有20％～40％水分，然后采用石蜡包裹含水的组织的“含水式”包埋法，通过“含水式”包埋的方法可以替代常规石蜡切片的脱水、透明、浸蜡等步骤，同时在展片时用解剖针剥去石蜡替代脱蜡步骤，大大减少了切片过程的时间和操作。该方法切出10～16μm厚度的荞麦果皮组织切片，组织完整、各部位显示清晰，明显增强切片和观察效果。
【IPC分类】G01N1-28, G01N1-30
【公开号】CN104849110
【申请号】CN201510156195
【发明人】赵钢, 向达兵, 宋超, 万燕, 谭茂玲, 晏林, 宋月, 周鑫
【申请人】成都大学
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年4月3日