建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物分析技术领域，具体地，涉及建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及 其应用，更具体地，涉及建立健肝乐制剂指纹图谱的方法、检测健肝乐制剂的方法以及建立 健肝乐制剂指纹图谱的方法在检测建立健肝乐制剂质量或真伪中的用途。
【背景技术】
[0002] 健肝乐颗粒出自东汉张仲景《伤寒论》中"芍药甘草汤"，由甘草和白芍两味中药 组方而成，临床上用于改善各类肝炎临床症状的作用，是武汉康乐药业股份有限公司独家 生产品种。2012年仅湖北省地区的销售就已经超过1000万元。但随着科学技术的快速发 展及中药研宄的不断深入，仅用芍药苷这一种活性成分来说明健肝乐制剂的内在质量，具 有一定的片面性，因此必须从该复方的物质群整体上有效的表征中药质量。指纹图谱作为 中草药及其提取物的质量控制方法，目前已经成为国际共识。现在对白芍中活性成分如芍 药苷、芍药内酯苷等的测定方法较多，对甘草中活性成分如甘草苷、甘草酸等的测定方法较 多，但如何能从更宏观的角度以健肝乐制剂中化学成分为指标建立宏观指纹图谱的方法却 未见报道。
[0003] 因而，目前关于建立健肝乐制剂指纹图谱的方法仍有待改进。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的 一个目的在于提出一种建立健肝乐制剂指纹图谱的方法。
[0005] 在本发明的第一方面，本发明提供了一种建立健肝乐制剂指纹图谱的方法。根据 本发明的实施例，该方法为高效液相色谱法，包括：将10微升含有健肝乐制剂的供试品溶 液注入高效液相色谱仪，以便获得所述健肝乐制剂的指纹图谱，其中，色谱条件为：填充剂 为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%甲酸水溶液（V/V)，洗脱方 式为梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：
【主权项】
1. 一种建立健肝乐制剂指纹图谱的方法，其特征在于，所述方法为高效液相色谱法，包 括： 将10微升含有健肝乐制剂的供试品溶液注入高效液相色谱仪，W便获得所述健肝乐 制剂的指纹图谱，其中，色谱条件为： 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶， 流动相A为己膳， 流动相B为0. 05%甲酸水溶液（V/V)， 洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为;_
检测波长为232纳米， 柱温为30摄氏度。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流速为1.OmL/min。
3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，W巧药巧峰计，理论塔板数不低于2000。
4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液是按照W下步骤制备的： 利用50体积％己醇水溶液，将所述健肝乐制剂配成浓度为lOmg/mL的溶液。
5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，色谱柱为WatersSymmetryC18色谱柱 (4. 6mmX250mm，5ym)。
6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括： a) 利用50体积％己醇水溶液，将所述健肝乐制剂配成浓度为lOmg/mL的溶液，并将所 得到的溶液超声处理lOmin，W便获得所述供试品溶液； b) 色谱条件： 色谱柱为WatersSymmetiTC18 色谱柱（4. 6mmX250mm，5ym)， 流动相A为己膳， 流动相B为0. 05%甲酸水溶液（V/V)， 洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱条件为：
检测波长为232纳米，
柱温为30摄氏度， 流速为 1.OmL/min， W巧药巧峰计，理论塔板数不低于2000 ; C)测试法：将10微升所述供试品溶液注入所述高效液相色谱仪，记录80分钟内的色 谱图，W便获得所述健肝乐制剂的指纹图谱。
7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述指纹图谱至少具有12个特征峰，W巧 药巧的色谱峰为参照，得到的保留时间依次为： 1号峰相对保留时间为；〇. 661 ±5%，相对峰面积为；0. 039 + 5%， 2号峰相对保留时间为；0. 798 + 5%，相对峰面积为；0. 514 + 5%， 3号峰相对保留时间为；1. 000 + 5%，相对峰面积为；1. 000 + 5%， 4号峰相对保留时间为；1. 461 ±5%，相对峰面积为；0. 402 + 5%， 5号峰相对保留时间为1. 640 + 5%，相对峰面积为；0. 188 + 5%， 6号峰相对保留时间为；2. 226 + 5%，相对峰面积为；0. 233 + 5%， 7号峰相对保留时间为；2. 315 + 5%，相对峰面积为；0. 089 + 5%， 8号峰相对保留时间为；2. 841 ±5%，相对峰面积为；0. 040 + 5%， 9号峰相对保留时间为；3. 344 + 5%，相对峰面积为；0. 038 + 5%， 10号峰相对保留时间为；3. 859 + 5%，相对峰面积为；0. 037 + 5%， 11号峰相对保留时间为；3. 925 + 5%，相对峰面积为；0. 023 + 5%， 12号峰相对保留时间为；4. 827 + 5%，相对峰面积为；0. 056 + 5%。
8. -种健肝乐制剂的检测方法，其特征在于，包括： (1) 利用权利要求1-7中任一项所述的方法建立合格健肝乐制剂的指纹图谱； (2) 利用权利要求1-7中任一项所述的方法建立待测健肝乐制剂的指纹图谱； (3) 将步骤（2)中得到的指纹图谱和步骤（1)中得到的指纹图谱进行比对，计算相似 度，所述相似度不低于0. 9为合格。
9. 权利要求1-7中任一项所述的方法在检测健肝乐制剂质量或真伪中的用途。
【专利摘要】本发明提供了建立健肝乐制剂指纹图谱的方法及其应用，其中，该方法为高效液相色谱法，包括：将10微升含有健肝乐制剂的供试品溶液注入高效液相色谱仪，并按照如下色谱条件进行检测：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相A为乙腈，流动相B为0.05％甲酸水溶液(V/V)，洗脱方式为梯度洗脱，检测波长为232纳米，柱温为30摄氏度。发明人发现，利用该方法能够快速有效地获得健肝乐制剂的指纹图谱，能够全面反映出健肝乐制剂的质量信息，具有良好的系统性、特征性和稳定性。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104849384
【申请号】CN201510184336
【发明人】王学海, 江书银, 许勇, 曹儒宾, 李莉娥, 秦和平, 黄璐, 杨仲文, 刘世勇, 余通, 黄天赐, 杨成兵, 何水英, 尹海龙, 冯芸, 杨婷, 谢长, 于静, 肖强
【申请人】武汉康乐药业股份有限公司, 湖北生物医药产业技术研究院有限公司, 人福医药集团股份公司
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年4月17日