一种α-岩藻糖苷酶测定液体单一试剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及医学检验技术领域，具体设及一种a-岩藻糖巧酶测定液体单一试 剂。
【背景技术】
[0002] a-岩藻糖巧酶（a-化cosidase，AFU)是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人 体内的各种组织、细胞及体液中，尤其W肝、肾等组织活性较高。近年来，随着对A即检测方 法及其他肿瘤或非肿瘤性疾病的血A即水平变化的深入研究，A即活力测定已经成为一个 基本诊断指标，并与其他实验室指标相结合，成为肝癌、胃癌、膜腺癌、结肠癌、口腔癌、白血 病、卵巢肿瘤等疾病诊断的重要指标。
[0003] 目前，测定A即活力的方法主要有巧光法、终点比色法、速率法。巧光法是利用岩 藻糖巧化合物在AFU水解后释放出可发射巧光的4-甲基伞型酬，通过检查巧光强度来分析 酶活力，该法的灵敏度高，既能用于血清，也适用于活检组织、细胞、脑脊液等量小的样本， 但该法对仪器要求高，不仅需要凝胶过滤除去干扰物质，而且需要巧光分光光度计，因而不 能实现自动化分析，难W进行普及推广；终点比色法是WPNP-A即为底物，底物被酶分解 后产生的色团在碱性条件下呈黄色，利用分光光度法进行定量分析，本法简便、设备要求不 高，但是酶底物本身的抗干扰性差，不能解决血清黄痘和溶血、脂血等因素对测定结果的影 响，且操作繁琐，所需反应时间长，而且A即需在酸性环境下进行酶促反应，而色团需在碱 性条件下呈色，所W也不适合自动化检测，推广难度大。速率法WA即在适宜反应条件下催 化含呈色基团的特定底物水解，在一定波长下可使吸光度增加，连续监测吸光度值的变化， 可计算出样本中A即的活性，该法操作简单，测定时间短，灵敏度及抗干扰性都较好，并且 适用于各种半/全自动分析仪器，由于速率法具有便于临床推广应用的特点，近年来，速率 法AFU活力测定逐步在临床医学方面得到普遍应用。
[0004] 在日常检验工作中，由于肝癌、肝硬化患者分离血清需要时间长，为了能快速回报 结果，缩短样本周转时间和防止仪器样品针被堵，不少医院使用肝素裡或肝素钢抗凝管采 集血样进行测定，由于肝素为阴离子黏多糖，带有大量负电荷，呈强酸性，易与速率法检测 AFU所用试剂反应形成沉浊使吸光度升高，从而影响检测准确度，因此，AFU测定试剂开发 时需充分考虑样品中肝素干扰的问题，同时，若能制备成单一试剂则可有效节省全自动生 化分析仪试剂盘空间，提高全自动生化分析仪的利用率，更有利于该试剂在临床上的推广 应用。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供一种具有良好的抗肝素干扰性能，良好的稳定 性，且成本较低的A即测定液体单一试剂。
[0006] 为了解决上述问题，本发明采用的技术方案为：一种A即测定液体单一试剂，试剂 中的各组分及组分浓度范围为：
[0007] 缓冲液（pH4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L,
[0008] 抗干扰剂 20-80g/l，
[0009] 2-氯-4-硝基苯-aA-岩藻糖巧（CNP-Afu) 0. 1-lg/L。
[0010] 本发明上述所述的抗干扰剂为可溶性巧盐或儀盐中的一种，进一步优选为氯化巧 或氯化儀或硫酸巧或硫酸儀。
[0011] 其中所述缓冲液可W是磯酸缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、巧樣酸-巧樣酸S钢缓 冲液、棚酸缓冲液、咪挫缓冲液、醋酸-醋酸钢缓冲液，2-吗咐己横酸缓冲液中的一种。
[0012] 本发明试剂的配制方法为常规方法，即试剂所述组分配方用量加入蒸馈水后各自 混合揽匀即可。
[0013] 本发明试剂盒测定样本中的A!^U的测试条件如下；温度；30-37°C;比色杯光径为 1. 0畑1。检测主波长405皿。
[0014] 应用本发明AFU测定试剂盒测定样本中AFU的方法如下；样品（校准管W校准品 做样品）加试剂R混匀后，30-37°C解育2min，连续检测2min吸光度变化，计算AA/min。其 中样本用量25y1，试剂用量225y1。
[0015] 本发明试剂盒测定样本中AFU含量按W下公式进行计算：
[0016]
【主权项】
L 一种a -岩藻糖苷酶测定液体单一试剂，其特征在于：该试剂中的各组分及组分浓 度为： 缓冲液（pH 4. 5 ~5. 5) 50-200mmol/L, 抗干扰剂 20-80g/L， 2-氣-4_硝基苯-a -L-岩澡糖昔 0. 1-lg/L。 其中，所述的抗干扰剂为可溶性钙盐或镁盐中的一种。
2. 根据权利要求1所述的a -岩藻糖苷酶测定液体单一试剂，其特征在于：所述的钙 盐为氯化钙或硫酸钙，所述的镁盐为氯化镁或硫酸镁。
3. 根据权利要求1所述的a -岩藻糖苷酶测定液体单一试剂，其特征在于：所述缓冲 液为磷酸缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、柠檬酸-柠檬酸三钠缓冲液、硼酸缓冲液、咪唑缓冲 液、醋酸-醋酸钠缓冲液，2-吗啉乙磺酸缓冲液中的一种。
【专利摘要】本发明公开一种α-岩藻糖苷酶测定液体单一试剂，该试剂中的各组分及组分浓度为：pH4.5～5.5的缓冲液50-200mmol/L，抗干扰剂20-80g/L，2-氯-4-硝基苯-α-L-岩藻糖苷0.1-1g/L。本发明可有效节省全自动生化分析仪试剂盘空间，提高全自动生化分析仪的利用率，更有利于该试剂在临床上的推广应用。而且，本发明特定的缓冲液可以有效的实现对底物的稳定；此外，本发明抗干扰剂的加入可瞬间将样本中的肝素干扰效应去除，实现降解或屏蔽肝素的作用，从而使本发明液体单一试剂同时具有良好的抗肝素干扰性能，且因加入的抗干扰剂市场价格较为便宜，使得本发明试剂的成本较为低廉。
【IPC分类】G01N21-31
【公开号】CN104865210
【申请号】CN201510267236
【发明人】沃燕波, 邹炳德, 邹继华
【申请人】宁波美康生物科技股份有限公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月22日