一种三叶橡胶叶片气孔观察的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物生理生态学研究技术领域，特别涉及叶片气孔观察的方法。
【背景技术】
[0002]叶片是植物进行光合作用和蒸腾作用的主要器官，叶片光合作用所需要CO2是通过气孔从大气中进人叶片内部的。与此同时，植物体内的水分通过叶片的蒸腾作用从气孔散失到大气中，因此，叶表皮气孔的形态、数量以及分布与叶片的生理功能密切相关。另外，也与植物的生长环境密切相关。
[0003]在种质资源的评价中，气孔作为重要的植物学性状之一，可作为观察记载项目。气孔是在自然选择和人工选择下保留下来的重要器官，具有较大的稳定性，因而它可以用来研究植物的亲缘关系、演化过程、生态型、染色体特性和地理起源。同属不同种的植物间一般气孔密度及气孔长度的变化相对较小，而不同属的植物则变化较大。气孔密度、气孔保卫细胞叶绿体数目与倍性相关。由此可见，气孔观察方法的研究是植物学研究中的一项重要内容。
[0004]在植物研究中，经常进行叶片气孔的观察。而观察的方法有多种，一是印模法，即用火棉胶涂到叶背面，使其形成一层薄膜，待膜干燥后用镊子将其撕下，至于显微镜下进行观察。另一种方法是用镊子直接将其背面的下表皮组织撕下，经一定处理后即可进行观察。此外，还有吡啶溶液法，将叶片浸入吡啶溶液中，然后取出进行观察。以上几种方法，在进行三叶橡胶叶片气孔观察时，火棉胶印模法虽然可看到气孔，但膜容易破碎且雨天不能进行，橡胶叶的表皮往往花费很长时间才能取下，浪费人力时间。吡啶溶液法，虽然也能看到气孔，但图像不够清晰，又不能进行拍摄。
【发明内容】
[0005]针对现有技术中存在的问题与缺陷，本发明提供了一种在田间试验活体条件下，可以实现无损伤、大量取样的研究橡胶树气孔特征的技术方法。
[0006]为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案:
一种三叶橡胶叶片气孔观察的方法，包括下列步骤:
O取样；取下采样叶片，并放入水中；
2)碱液处理；按照质量比为1:1?2分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成5°/『7.5%的碱液，待混合物溶解完毕，得到混合溶液，将混合溶液加热至沸腾后将采样叶片放入，继续加热，待表皮开始浮离，将采样叶片捞起放入清水中；
3)观察；用镊子夹住经过碱液处理的采样叶片的下表皮在水中来回摆动或者用自来水冲洗，即得表皮薄膜，将表皮薄膜经过染色处理后放在载玻璃上摊平，然后在显微镜下观察气孔。
[0007]对本发明的进一步说明，所述步骤(2)中继续加热的过程中，采样叶片的叶色由绿转黄，叶内气泡鼓起，10?15min后表皮开始浮离。
[0008]对本发明的进一步说明，所述表皮薄膜经过以下步骤染色处理:
1)在醋酸洋红中染色8?12min；
2)在70%酒精中浸0.5?2min ；
3)在90%酒精中浸0.5?2min ；
4)在无水酒精中浸0.5?2min ；
5)在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸I?2min ;
6)在正丁醇中浸0.5?2min。
[0009]对本发明的进一步说明，在碱液处理前将采样叶片剪成1X2厘米大小。
[0010]对本发明的进一步说明，所述采样叶片为向阳、生长正常的倒数第二蓬叶的中间叶片。
[0011]在碱液处理的加热过程中，火力不可太猛，否则叶片上下翻滚过甚引起表皮脱落，分不清是上表皮还是下表皮，影响到工作效率。
[0012]所述表皮薄膜经过染色处理使图像更加清晰，便于拍摄。
[0013]本发明中若要制成永久片，则应将表皮组织切成约0.5X0.5厘米的小块，然后用正丁醇树胶封片。封片注意勿使气泡进入，以免影响片的质量。
[0014]本发明的优点:
1.通过本发明方法处理的叶块有多大，获得的表皮就有多大，便于选择最清晰的部位进行观察。
[0015]2.采用本发明方法不受到时间和天气的限制，无论晴天、雨天以及上下午均可进行，更加方便、灵活。
[0016]3.采用本发明方法可连续作业，提高工作效率，操作简单，易于掌握。
[0017]4.本发明方法可以用于生物生态学、植物生理学、植物种质资源学、育种学、栽培学等领域的研究与实践，应用广泛灵活。
【附图说明】
[0018]图1为本发明实施例1三叶橡胶树气孔观察图。
[0019]图2为本发明实施例2三叶橡胶树(染色透明处理)气孔观察图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合附图和实施例对本发明进行进一步的说明。
[0021]实例I
选取向阳面正常光合功能叶(第二蓬叶的中间叶片)，先用刀子取下功能叶片后，随即插入水中。将叶片剪成1X2厘米大小，然后放入已沸腾碱液中，所述碱液为按照质量比为I:1分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成5%的碱液，继续加热lOmin，等表皮开始浮离后，将叶片捞起放入清水中，用镊子夹住下表皮在水中来回摆动，取得一块表皮薄膜，放在载玻片上摊平，在200倍显微镜上观察。观察结果如图1所示。
[0022]实例2
与实施例1不同之处在于，所述在表皮薄膜观察前先后在醋酸洋红中染色lOmin、在70%酒精中浸lmin、在90%酒精中浸lmin、在无水酒精中浸lmin、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸Imin和在正丁醇中浸lmin。观察结果如图2所示。
[0023]实例3
与实施例1不同之处在于，所述碱液为按照质量比为1:1分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成6%的碱液。
[0024]实例4
与实施例2不同之处在于，所述所述碱液为按照质量比为1:1.5分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成7%的碱液，继续加热12min，等表皮开始浮离后，将叶片捞起放入清水中，用镊子夹住下表皮在水中来回摆动，取得一块表皮薄膜，然后将表皮薄膜先后在醋酸洋红中染色8min、在70%酒精中浸1.5min、在90%酒精中浸1.5min、在无水酒精中浸1.5min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸1.5min和在正丁醇中浸
1.5min后，放在载玻片上摊平，在200倍显微镜上观察。
[0025]实例5
与实施例2不同之处在于，所述所述碱液为按照质量比为1:2分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成7.5%的碱液。继续加热14min，等表皮开始浮离后，将叶片捞起放入清水中，用镊子夹住下表皮在水中来回摆动，取得一块表皮薄膜，然后将表皮薄膜先后在醋酸洋红中染色12min、在70%酒精中浸2min、在90%酒精中浸2min、在无水酒精中浸2min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸2min和在正丁醇中浸2min后，放在载玻片上摊平，在200倍显微镜上观察。
[0026]实例6
与实施例2不同之处在于，所述表皮薄膜观察前先后在醋酸洋红中染色12min、在70%酒精中浸2min、在90%酒精中浸2min、在无水酒精中浸2min、在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸2min和在正丁醇中浸2min。
【主权项】
1.一种三叶橡胶叶片气孔观察的方法，其特征在于:包括下列步骤: (1)取样；取下采样叶片，并放入水中； (2)碱液处理；按照质量比为1:1?2分别称取氢氧化钠和无水碳酸钠，再将它们融入水中制成5°/『7.5%的碱液，待混合物溶解完毕，得到混合溶液，将混合溶液加热至沸腾后将采样叶片放入，继续加热，待表皮开始浮离，将采样叶片捞起放入清水中； (3)观察；用镊子夹住经过碱液处理的采样叶片的下表皮在水中来回摆动或者用自来水冲洗，即得表皮薄膜，将表皮薄膜经过染色处理后放在载玻璃上摊平，然后在显微镜下观察气孔。2.根据权利要求1所述的三叶橡胶叶片气孔观察的方法，其特征在于:所述步骤(2)中继续加热的过程中，采样叶片的叶色由绿转黄，叶内气泡鼓起，10?15min后表皮开始浮离。3.根据权利要求1所述的三叶橡胶叶片气孔观察的方法，其特征在于:所述表皮薄膜经过以下步骤染色处理: (1)在醋酸洋红中染色8?12min； (2)在70%酒精中浸0.5?2min ； (3)在90%酒精中浸0.5?2min ； (4)在无水酒精中浸0.5?2min ； (5)在1:1 (V/V)的酒精和正丁醇的混合溶液中浸I?2min ; (6)在正丁醇中浸0.5?2min。4.根据权利要求1所述的三叶橡胶叶片气孔观察的方法，其特征在于:在碱液处理前将采样叶片剪成1X2厘米大小。5.根据权利要求1-4任一所述的三叶橡胶叶片气孔观察的方法，其特征在于:所述采样叶片为向阳、生长正常的倒数第二蓬叶的中间叶片。
【专利摘要】本发明公开了一种三叶橡胶叶片气孔观察的方法，通过采样、碱液处理、观察等步骤可获得较好的观察样本。通过本发明处理的叶块有多大，获得的表皮就有多大，便于选择最清晰的部位进行观察。同时，不受到时间和天气的限制，无论晴天、雨天以及上下午均可进行。此外，此法可连续作业，提高工作效率，操作简单，易于掌握。可以用于生物生态学、植物生理学、植物种质资源学、育种学、栽培学等领域的研究与实践。
【IPC分类】G01N1/28, G01N21/84
【公开号】CN105067620
【申请号】CN201510457298
【发明人】韦优, 周婧, 卢艳春, 杨志强, 赵静, 罗培四, 黄丽君, 王文林, 陆海生, 卢美瑛, 韦持章, 徐冬英, 蒋娟娟, 孔方南, 李文砚
【申请人】广西南亚热带农业科学研究所
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月30日