含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物分析领域，涉及一种B族维生素片中维生素队、B3、B6含量的测定 方法，尤其是一种高效液相色谱法B族维生素片中维生素队、B3、B6含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] B族维生素是维持人体正常机能与代谢活动不可或缺的水溶性维生素，人体无法 自行制造合成，必须额外补充。而紧张的生活、工作压力中，不当的饮食习惯或因某些特定 药物的使用，加上B族维生素本身溶于水的属性，均会使人体内的B族维生素快速被消耗。 因此我公司开发了B族维生素片应该有广阔的市场前景。本品为维生素B1、维生素B6、维生 素B3等组成的多种维生素B补充剂，其成分均在国家食品药品监督管理局《营养素补充剂 申报与审评规定（试行）》中规定的"维生素、矿物质种类和用量"规定的范围内，因此可作 为B族维生素营养素补充剂的功效成分，具有补充多种维生素的保健功能。但是目前的测 定方法不能实现维生素B的同时测定，因此提供一种利用高效液相色谱法测定维生素B的 显得尤为重要。
【发明内容】
：
[0003] 本发明的目的在于克服现有含量测定方法的不足，提供一种操作简便，准确度高 的多种维生素B含量测定方法。
[0004] 为了实现上述目的，本发明提出的B族维生素片中维生素队、B3、B6含量的测定方 法，主要是利用高效液相色谱法同时测定B族维生素片中维生素含量，其具体步骤 为：
[0005] (1)混合对照品溶液的配制
[0006]a)对照品溶液1的配制：在避光的条件下，精密称取维生素B1对照品和维生素B6 对照品，置于50ml棕色容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成维生素B1和维生素B6 的混合溶液；
[0007] b)对照品溶液2的配制：在避光的条件下，精密称取维生素&对照品适量，置IOml 棕色容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成维生素4的溶液；
[0008] C)混合对照品溶液的配制：在避光的条件下，精密量取对照品溶液1及对照品溶 液2各5ml，置同一 50ml棕色容量瓶中，加流动相定容至刻度，即得混合对照品溶液。
[0009] (2)供试品溶液的配制
[0010] 在避光的条件下，取B族维生素片50片，研细，精密称取适量，置200ml棕色容量 瓶中，加流动相适量，振摇10分钟，定容至刻度，摇匀，离心10分钟，转速为2500转/分，取 上清液过滤，作为供试品溶液。
[0011] (3)色谱条件
[0012] 本发明采用高效液相色谱法条件如下：
[0013] 检测器为紫外检测器，
[0014] 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
[0015] 以0.06 %己烷磺酸钠、0.04 %庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺= 800 : 190 : 10 : 0.5 为流动相，
[0016] 检测波长276nm，
[0017]流速为0? 8ml/min，
[0018]柱温：35°C，
[0019] 理论塔板数以维生素&峰计算应不低于3000,拖尾因子应不大于2. 0。
[0020] 本发明的有益效果为：与现有药典资料相比，本方法准确度高，操作简便，能同时 检测B族维生素片的含量，省去不同测定方法的步骤，适用于生产厂家用于成品和中间体 监控。
【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。
[0022] 实施例
[0023] B族维生素片中维生素B1、维生素&和维生素B6含量测定（避光操作）。
[0024] (1)试验色谱条件：
[0025]色谱柱：SMA-AQC18 100A色谱柱（250mmX4. 6mm, 5um)
[0026] 检测波长：276nm
[0027]柱温：35°C
[0028] 流动相：0. 06 %己烷磺酸钠、0. 04 %庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺= 800 ： 190 ： 10 ： 0. 5〇
[0029] (2)试验溶液配制方法：
[0030]a)供试品溶液的配制：
[0031] 在避光的条件下，取B族维生素片50片，研细，精密称取2. 0g，置200ml棕色容量 瓶中，加流动相适量，振摇10分钟，定容至刻度，摇匀，离心10分钟，转速为2500转/分，取 上清液过滤，作为供试品溶液。
[0032]b)混合对照品溶液的配制：
[0033] 对照品溶液1的配制：在避光的条件下，精密称取12mg维生素队对照品和维生素 B6对照品，置于50ml棕色量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成维生素Bi和维生素B6 的浓度都约为〇. 24mg/ml的混合溶液。
[0034] 对照品溶液2的配制：在避光的条件下，精密称取14mg维生素B3对照品适量，置 10.Oml棕色容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成浓度约为I. 4mg/ml的溶液。
[0035] 混合对照品溶液的配制：在避光的条件下，精密量取对照品溶液1及对照品溶液2 各5. 〇ml，置于同一 50ml棕色量瓶中，加流动相定容至刻度，即得混合对照品溶液。
[0036] (3)辅料干扰试验
[0037] 按处方量称取适量辅料，置50ml量瓶中，加流动相适量，振摇10分钟，定容至刻 度，摇匀，离心10分钟，取上清液过滤，注入色谱仪，在此测定条件下，辅料的峰位为直线， 结表明辅料存在的不干扰本品测定。
[0038] (4)线性实验
[0039] 精密称取维生素队约26mg、维生素B3约140mg和维生素B6约25mg，置100mL棕 色量瓶中，加流动相适量，振摇10分钟，加流动相定容至刻度，摇匀，离心，再分别取上述溶 液3. 0ml、4. 0ml、5. 0ml、6. 0ml、7.Oml至50ml量瓶中，用相同溶剂稀释至刻度，摇匀，离心， 取上清液20ul，注入色谱仪，记录峰面积。结果见表1、2、3。
[0040] 表1维生素4含量测定线性试验结果
[0041]
[0042] 回归方程：C= 7. 7299XKT5A-L8207;相关系数：r=0. 9997;说明维生素&在 浓度0~196. 98yg/ml之间，线性关系关系良好。
[0043] 表2维生素B6^量测定线性试验结果
[0044]
[0045] 回归方程：C= 2. 9296XKT5A+0. 05786;相关系数：r=0. 99999;说明维生素B6 在浓度0~34. 92yg/ml之间，线性关系良好。
[0046] 表3维生素队含量测定线性试验结果
[0047]
[0048] 回归方程：C=3. 3144Xl(T5A+0.06885;相关系数：r= 0?99998;说明维生素B1 在浓度0~37. 548yg/ml之间，线性关系良好。
[0049] (5)回收率实验
[0050] 精密称取维生素队约24mg、维生素B3 140mg、维生素B6 24mg置同一100mL棕色 量瓶中，加流动相适量，振摇10分钟，用流动相定容，摇勾。分别加入上述溶液4ml、5ml、6ml 各3份，置50ml棕色量瓶中，加入处方量辅料，加流动相适量，振摇溶解，定容，离心，取上清 液进行测定并计算回收率，试验结果表明准确度良好，结果见表4、5、6。
[0051] 表4维生素B3含量测定回收率试验结果
[0052]
良好，结果见表7。
[0059] 表7维生素B3、维生素B6和维生素B1含量测定重复性试验结果
[0060]
[0061] (7)溶液稳定性试验
[0062] 取标志性成分含量测定项下的同一对照品和样品溶液，分别放置24小时，并于0、 4、8、12、24小时进行测定，表明样品溶液在24小时内稳定，结果见下表8。
[0063] 表8标志性成分含量测定稳定性试验结果
[0064]
[0065] (8)精密度试验
[0066] 取同批样品，称样6份按含量测定项下方法进行测定，试验结果表明精密度良好， 结果见表9。
[0067] 表9标志性成分含量测定精密度试验 [0068]
[0069] 以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明的技术方案作任何形式 上的限制。凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修 饰，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
【主权项】
1. B族维生素片中维生素队、83、86含量的测定方法，其特征在于，主要是通过高效液相 色谱法同时测定B族维生素片中维生素队、B 3、B6含量，其具体步骤为： (1) 混合对照品溶液的配制 a) 对照品溶液1的配制：在避光的条件下，精密称取维生素B1对照品和维生素B6对照 品，置于50ml棕色容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成维生素匕和维生素B 6的混 合溶液； b) 对照品溶液2的配制：在避光的条件下，精密称取维生素B3对照品适量，置IOml棕 色容量瓶中，加流动相溶解并定容至刻度，制成维生素4的溶液； c) 混合对照品溶液的配制：在避光的条件下，精密量取对照品溶液1及对照品溶液2 各5ml，置同一 50ml棕色容量瓶中，加流动相定容至刻度，即得混合对照品溶液； (2) 供试品溶液的配制 在避光的条件下，取B族维生素片，研细，精密称取，置200ml棕色容量瓶中，加流动相， 振摇10分钟，定容至刻度，摇匀，离心10分钟，转速为2500转/分，取上清液过滤，作为供 试品溶液。2. 根据权利要求1所述的B族维生素片中维生素B 量的测定方法，其特征在 于，利用高效液相色谱仪进行检测，记录色谱图，进行含量的测定，高效液相色谱仪的色谱 条件为： 检测器为紫外检测器， 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 以己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺混合溶液为流动相， 检测波长276nm， 流速为 〇. 8ml/min， 柱温：35°C。3. 根据权利要求2所述的B族维生素片中维生素B 量的测定方法，其特征在 于，以0. 06%己烷磺酸钠、0. 04%庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺混合溶液为流 动相。4. 根据权利要求2所述的B族维生素片中维生素B p B3、B6^量的测定方法，其特 征在于，以0. 06 %己烷磺酸钠、0. 04 %庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺= 800 : 190 : 10 : 0.5配比混合为流动相。
【专利摘要】本发明属于药物分析领域，提供一种B族维生素片中维生素B1、B3、B6含量的测定方法，主要是利用高效液相色谱法同时测定B族维生素片中维生素B1、B3、B6含量，其具体步骤为：在避光的条件下，取B族维生素片，研细，精密称取适量，置棕色容量瓶中，加适量流动相，振摇，定容至刻度，摇匀，离心10分钟，转速为2500转/分，取上清液过滤，利用高效液相色谱仪进行检测测定，以0.06％己烷磺酸钠、0.04％庚烷磺酸钠水溶液-甲醇-冰醋酸-三乙胺＝800∶190∶10∶0.5为流动相。与现有药典资料相比，本方法准确度高，操作简便，能同时检测B族维生素片的含量，省去不同测定方法的步骤，适用于生产厂家用于成品和中间体监控。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105067721
【申请号】CN201510452666
【发明人】姜起栋, 赵洪霞, 黄薇, 杨渤, 宗育娟, 赵婷婷
【申请人】天津医药集团津康制药有限公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2015年7月28日