一种皮革奶水解蛋白l-羟脯氨酸的快速检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于分光光度技术领域，涉及一种检测方法，特别涉及到一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法。
【背景技术】
[0002]所谓“皮革水解蛋白”，就是利用皮革下脚料或是动物的皮毛、脏器等，经水解技术而生成的一种蛋白粉。和三聚氰胺一样，把它掺入牛奶或奶粉中可提高蛋白质的含量。农业部对生鲜乳制品中是否含有“皮革水解蛋白质”的检测并非今年才开始的。“三聚氰胺奶”事件后，农业部于2009年开始在全国范围内进行生鲜乳质量安全监测工作，监测的内容包括三聚氰胺、皮革水解蛋白质”和碱类物质。2011年I月5日，农业部下发了《2011年度生鲜乳制品质量安全监测计划》，其中要求监测的项目并无变化。其检测方法包括比色法、电泳法高效液相色谱法等。目前常用的比色法(colorimetry)是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法检测试剂毒性高，操作相对繁琐。
【发明内容】
[0003]针对上述不足，本发明的目的在于提供一种避免使用毒性高的试剂，将繁琐操作简单化，能有效快速的检测出样品的含量，该项目检测方法取样量少，检测时间不长，工艺简单。
[0004]为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的:
[0005]—种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，依次包括下述步骤:
[0006]I)对需检测的产品加前处理试剂处理；
[0007]2)取步骤I)中的上清溶液，加入氧化缓冲溶液及显色剂显色；
[0008]3)将步骤2)中溶液放入比色皿中，采用比色法对其中的L-羟脯氨酸进行测定从而获得相关结果。
[0009]进一步地，步骤I)所述的前处理试剂为219g/L乙酸锌+30mL/L冰乙酸和106g/L亚铁氰化钾。
[0010]进一步地，所述的氧化缓冲溶液为PBS和氯胺T，氯胺T浓度为1.2?1.7g/100mL。
[0011]进一步地，所述显色剂为对二甲氨基苯甲醛。
[0012]本发明的有益效果是:提供一种避免使用毒性高的试剂，将繁琐操作简单化，能有效快速的检测出样品的含量，该项目检测方法取样量少，检测时间不长，工艺简单。
【具体实施方式】
[0013]实施例
[0014]本实施例重点介绍本发明中用到的溶液和试剂的配制方法以及检测操作的流程方法。
[0015]I)、配制前处理试剂:准确称取219g乙酸锌和30mL冰乙酸，用蒸馏水定容到lOOOmL，搅拌溶解。准确称取106g亚铁氰化钾，用蒸馏水定容到lOOOmL，搅拌溶解。
[0016]2)、配制氧化缓冲液:分别称取6.95g无水磷酸氢二钠、8g磷酸二氢钠二水、7.05g氯胺T，用蒸馏水定容到500mL，搅拌溶解。
[0017]3)、配制显色剂:准确量取10mL浓盐酸缓慢加入10mL水中；称取50g对二甲氨基苯甲醛，量取上述稀释后的175mL浓盐酸溶液，搅拌溶解，然后再加入325mL异丙醇，搅拌使其混匀。此试剂易氧化，需密闭低温保存。
[0018]4)、标准溶液配制:取0.1g的L-羟脯氨酸于10mL的容量瓶中加蒸馏水溶解，滴加一滴3mol/L的硫酸溶液混匀，用蒸馏水定容到lOOmL，为100ppm的标液。(此标液应放在4°C冷藏保存)
[0019]5)、检测方法:取2-5g样品加入30mL /K，60°C水浴加热20min ;冷却至室温；分别加入ImL乙酸锌溶液和ImL亚铁氰化钾溶液，用水定容至50mL，离心，取上清液待测(若溶液浑浊，过滤后取滤液待测)。取一个2mL的离心管，加入ImL样品液。加入500 μ L氧化缓冲液，盖盖上下颠倒三次使其均匀，反应2min后再加入500 μ L显色剂，盖盖摇匀。在70°C水浴中加热7分钟，取出后冷却至室温。以蒸馏水为空白，536nm测定吸光度。将吸光度代入回归方程求出羟脯氨酸含量。
[0020]最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
【主权项】
1.一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，其特征在于，依次包括下述步骤: 1)对需检测的产品加前处理试剂处理； 2)取步骤I)中的上清溶液，加入氧化缓冲溶液及显色剂显色； 3)将步骤2)中溶液放入比色皿中，采用比色法对其中的L-羟脯氨酸进行测定从而获得相关结果。2.根据权利要求1所述的一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，其特征在于，步骤I)所述的前处理试剂为219g/L乙酸锌、30mL/L冰乙酸和106g/L亚铁氰化钾。3.根据权利要求1所述的一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，其特征在于，所述的氧化缓冲溶液为PBS和氯胺T，氯胺T浓度为1.2?1.7g/100mL。4.根据权利要求1所述的一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，其特征在于，所述显色剂为对二甲氨基苯甲醛。
【专利摘要】本发明公开一种皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，特别是一种牛奶中非法添加皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的检测牛奶中非法添加皮革奶水解蛋白L-羟脯氨酸的快速检测方，其技术要点：1)对需检测的牛奶及奶制品加入试剂，水浴加热，对牛奶及奶制品中蛋白质进行沉淀处理，静置分层；2)将步骤1)收集的上层溶液加入氧化剂及显色剂，反应一定时间后采用比色法对其中的L-羟脯氨酸进行测定从而获得相关结果。
【IPC分类】G01N21/31, G01N1/28, G01N1/38
【公开号】CN105203478
【申请号】CN201510585318
【发明人】刘海静, 李涛, 马魁, 乔蓉霞, 林芳, 王宇, 冯润东, 裴小龙, 王一欣
【申请人】陕西省食品药品检验所, 西安中润生物科技有限公司
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月15日