一种水产品中敌百虫手性对映体的检测方法
【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种检测水产品中敌百虫手性对映体的方法。
【背景技术】
[0002] 敌百虫[0,0-二甲基-(2,2,2-三氯-1-羟基乙基）膦酸酯]属于手性有机磷杀虫 剂，具有一个手性碳原子，一对手性对映体，是一种低毒的有机磷农药，广泛应用于渔业养 殖中，是防止鱼体内寄生虫的首选药物，在浙江省及舟山海域的海水养殖中使用也较多，然 而,海水中的敌百虫会积存于养殖鱼体内，即使鱼类在食用前还要经过水煮、浸泡等工艺， 但带有敌百虫残留的鱼类仍然令人担忧，敌百虫中毒后会引起血液胆碱酯酶活性下降，威 胁人体健康。
[0003] 目前，针对敌百虫外消旋体在水产品的残留检测研究不少，但是尚没有针对敌百 虫对映体残留进行分析的，那么水产品中敌百虫药物残留的风险评估所依据的数据则不完 全真实。因此开展手性药物对映体拆分技术的研究，针对水产养殖中常用的敌百虫的选择 性残留行为进行系统研究，将大大推进水产养殖用手性药物研究的进展和应用，下面为敌 百虫对映体结构式：
[0005] 本发明采用高效液相色谱法手性固定相法检测水产品中敌百虫对映体的残留量， 为养殖水体中手性药物残留检测提供理论依据。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种水产品中敌百虫手 性对映体的检测方法，该方法能够成功实现敌百虫手性对映体的拆分，从而检测水产品中 敌百虫对映体的残留量，为水产品中手性药物残留检测提供理论依据。
[0007] 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种水产品中敌百虫手性对映体 的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
[0008] (1)称取3. Og鱼肉组织绞碎，放入50mL离心管中，加入乙腈10~15mL、去离子水 5~10mL，组织匀浆15000~20000r/min，30s后加入3. Og氯化钠继续匀质30s，之后放入 离心机以3500~5000r/min离心5min，静置后取上清液代用；
[0009] (2)将步骤⑴中的上清液经无水硫酸钠处理，取5mL过C18与PSA串联小柱，待 流完后加入2X4mL乙腈溶液淋洗，自然流速，收集至IOmL容量瓶，氮气吹至近干，用正己烷 +异丙醇的流动相定容至2mL，过0. 22有机滤膜，得到待测液A，流动相的正己烷和异丙醇体 积比例为85~95:15~5 ;
[0010] (3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL IC手性 柱，该手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯];所述 手性柱的柱温为20°C~35°C ;检测时的流速为0. 7mL/min~1.0 mL/min，波长为207nm。
[0011] 作为优选，所述步骤2和3)的流动相还含有乙醇，它以正己烷、异丙醇与乙醇体积 比为90:8~9. 5:2~0. 5做为流动相对敌百虫对映体和水样中的杂质进行分离。
[0012] 再优选，所述步骤2和3)的正己烷、异丙醇与乙醇的体积比为90:8. 5:1.5。
[0013] 优选，所述步骤（3)中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时的流速为 lmL/min〇
[0014] 优选，采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时所述手性柱的柱温为25°C。
[0015] 最后，所述步骤2)中的C18与PSA串联小柱提前用6~8mL乙腈溶液淋洗。
[0016] 与现有技术相比，本发明用于检测水产品中敌百虫手性对映体，成功实现了敌百 虫手性对映体的拆分，从而对水产品中敌百虫对映体的残留量进行检测，其中，对映体及在 0. 5 μ g/g~60 μ g/g浓度范围内与其响应值呈良好的线性关系，回归方程及相关系数分别 为 Y = (λ 462X-0. 005, R2 = 0· 9995 ;Υ = (λ 573X-0. 008, R2 = 0· 9997,样品平均回收率分 别为87. Ol %和82. 95%，日间精密度分别为6. Ol %和6. 98%，定量限分别为0. 33 μ g/g和 0.27 μ g/g〇
【附图说明】
[0017] 图1为本发明实施例中敌百虫的色谱图；
【具体实施方式】
[0018] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0019] -种水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，包括以下步骤：
[0020] ⑴称取3. Og鱼肉组织绞碎，放入50mL离心管中，加入乙腈10~15mL、去离子水 5~10mL，组织匀浆（15000~20000r/min) 30s后加入3. Og氯化钠继续匀质30s，之后放入 离心机以3500~5000r/min离心5min，静置后取上清液代用；
[0021] (2)将步骤（1)中的上清液经无水硫酸钠处理，取5mL过C18与PSA串联小柱（提 前用6~8mL乙腈溶液淋洗），待流完后加入2 X 4mL乙腈溶液淋洗，自然流速，收集至IOmL 容量瓶，氮气吹至近干，用正己烧、异丙醇和乙醇的比例为90:8. 5:1. 5 (v:v:v)定容至2ml 过0. 22 μ m有机滤膜，得到待测液A ;
[0022] (3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL IC手性 柱，该手性柱的填料为5 μ m硅胶表面涂布纤维素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯];所述 手性柱的柱温为20°C~35°C ;检测时的流速为0. 7mL/min~1.0 mL/min，波长为207nm。
[0023] 作为优选，所述步骤（3)流动相中正己烷、异丙醇与无水乙醇的体积比为 90:8. 5:1. 5〇
[0024] 在本实施例中，步骤（2和3)中分别使用正己烷与异丙醇体积比为95:5、90:10和 85:15的流动相对敌百虫进行手性拆分，拆分结果如表1所示，可以看出，随着流动相中异 丙醇比例的增大，流动相极性增强，分离度减小因此，所使用流动相的最佳组成为正己烷与 异丙醇的体积分数分别为90与10,在该流动相配比条件下对映体分离效果良好。
[0028] 由于检测时流速不同拆分效果可能不同，本实施例在选用体积分数分别为90与 10的正己烧与异丙醇作为流动相的前提下，分别检测了流速为0. 7mL/min、0. 8mL/min、 0. 9mL/min、l. OmL/min时对映体之间的拆分情况，拆分结果如表2所示，当流速为lmL/min 时分离所需时间最短。因此本实施例检测时的流速优选为lmL/min。
[0031] 保持其它的色谱条件不变，本实施例还考察了柱温对敌百虫对映体手性分离的影 响。表3为不同柱温下敌百虫及内标的拆分结果，可以看出，随着柱温升高，分离度有下降 趋势，但在下列温度下敌百虫对映体及内标均可达到基线分离，由于柱温过高会使色谱柱 的寿命缩短，因此，本实施例优选接近室温的25°C作为最佳柱温。
[0034] 在进行样品测定时，由于右敌百虫色谱峰与水产品中杂质的色谱峰不能实现基线 分离，故在流动相中添加一定比例的乙醇，使其可以实现基线分离，结果如表4所示。当正 己烷：异丙醇：乙醇为90:8. 5:1. 5时右敌百虫可与水产品中的杂志分离，同时也可以保证 实验在较短的时间内完成。
[0035]表 4
[0038] 取空白鱼血浆，分别加入敌百虫系列对照品，配置成相当于S-(+)-trichl〇rf〇n 及 R-(-)-trichlorfon 血浆浓度分别是 0· 5、1、10、20、30、40、50、60μ g/g，制备标 准曲线。以血浆中的待测物浓度作为横坐标，以峰面积作为纵坐标，得到标准曲线。 S-(+)-trichlorfon在0. 5 μ g/g~60 μ g/g范围内与其响应值呈良好的线性关系，以X表 示浓度，Y表示峰面积。左旋对映体的回归方程和相关系数分别为Y = 〇. 462X-0. 005,R2 = 0. 9995 ;R-㈠ -trichlorfon浓度在0. 5 μ g/g~60 μ g/g范围内与其响应值呈良好的线性 关系，以Y表示浓度，X表示右敌百虫峰面积。回归方程及相关系数为Y = 0. 573X-0. 008， R2 = 0.9997。在血浆空白样品中添加 O^yg/gdl·! g/g和8μ g/g这3个浓度的敌百虫 标准溶液，按本法进行回收率实验。每个添加浓度平行操作3次，计算回收率和精密度， S-(+)_敌百虫及R-(-)_敌百虫的样品平均回收率分别为87. 01 %和82. 95%，日间精密度 分别为6. 01 %和6. 98%，定量限分别为0. 33 μ g/g和0. 27 μ g/g。
【主权项】
1. 一种水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 称取3.Og鱼肉组织绞碎，放入50mL离心管中，加入乙腈10~15mL、去离子水5~ 10mL，组织匀浆15000~20000r/min，30s后加入3. 0g氯化钠继续匀质30s，之后放入离心 机以3500~5000r/min离心5min，静置后取上清液代用； (2) 将步骤（1)中的上清液经无水硫酸钠处理，取5mL过C18与PSA串联小柱，待流完 后加入2X4mL乙腈溶液淋洗，自然流速，收集至10mL容量瓶，氮气吹至近干，用正己烷+异 丙醇的流动相定容至2mL，过0. 22有机滤膜，得到待测液A，流动相的正己烷和异丙醇体积 比例为85~95:15~5 ; (3) 采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL1C手性柱， 该手性柱的填料为5μm硅胶表面涂布纤维素-三[3, 5-二氯苯基氨基甲酸酯];所述手性 柱的柱温为20°C~35°C;检测时的流速为0. 7mL/min~1.OmL/min，波长为207nm。2. 根据权利要求1所述的水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于：所述 步骤2和3)的流动相还含有乙醇，它以正己烷、异丙醇与乙醇体积比为90:8~9. 5:2~ 〇. 5做为流动相对敌百虫对映体和水样中的杂质进行分离。3. 根据权利要求2所述的水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于：所述 步骤2和3)的正己烷、异丙醇与乙醇的体积比为90:8. 5:1. 5。4. 根据权利要求1所述的水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于：所述 步骤（3)中采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时的流速为lmL/min。5. 根据权利要求1或2或3或4所述的水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特 征在于：采用高效液相色谱仪对所述溶液A进行检测时所述手性柱的柱温为25°C。6. 根据权利要求1或2或3或4所述的水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特 征在于：所述步骤2)中的C18与PSA串联小柱提前用6~8mL乙腈溶液淋洗。
【专利摘要】本发明涉及一种水产品中敌百虫手性对映体的检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)称取鱼肉组织绞碎，组织匀浆、继续匀质之后放入离心机离心分离，静置后取上清液代用；(2)将步骤(1)中的上清液经无水硫酸钠处理，过C18与PSA串联小柱，待流完后加入乙腈溶液淋洗，收集至容量瓶，氮气吹至近干，用正己烷+异丙醇的流动相定容至2mL，过0.22有机滤膜，得到待测液A，流动相的正己烷和异丙醇体积比例为85～95:15～5；(3)采用高效液相色谱仪对上述溶液A进行检测；检测时选用CHIRALCEL？IC手性柱；所述手性柱的柱温为20℃～35℃；检测时的流速为0.7mL/min～1.0mL/min，波长为207nm。该方法能够成功实现敌百虫手性对映体的拆分，从而检测水产品中敌百虫对映体的残留量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105319291
【申请号】CN201410379997
【发明人】徐红萍, 聂晶, 高小峰, 欧阳小琨, 王阳光, 杨立业, 吴伟建, 郁迪, 李维, 曾浩, 杜军, 李玄
【申请人】浙江海洋学院
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2014年8月4日