检测肼含量的试剂盒及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及高选择性检测阱含量的试剂盒及其应用。
【背景技术】
[0002] 阱（NH2NH2)作为一个重要的工业化学品，在很多领域得到广泛的应用，如医药、乳 化剂，染料和纺织，军事、航空航天、工农业设及的催化剂、腐蚀抑制剂和农药。阱具有易燃、 易爆的特点，因为在火箭推进系统中作为高能燃料而非常出名。阱具有较强的还原能力，也 应用于金属的防腐蚀。在提取领域，阱也可作为植物生长调节剂。在制药领域，阱作为抗 菌药物。然而，阱也具有毒理性，随着阱在各个领域中的广泛应用，在生产、使用、运输及处 置过程中很容易引起环境污染。阱容易被皮肤吸收、口腔吸入，运可能导致基因突变和癌 症。近年来，发现阱对肺、肾脏、肝脏和中枢神经系统具有很严重的破坏性。美国环境保护 署巧PA)提出，阱会提高晒齿类动物的肺癌、鼻炎，W及肝肿瘤的发病率。阱已被美国环保 署和世界卫生组织列为人类一个潜在的致癌物质，并且建议较低的阔限值（TLV)l化pb。很 多国家在饮用水中严格管制阱的浓度，要求在低的微摩尔水平。因此，开发高选择灵敏检测 阱的方法是必要的。
[0003] 用于检测阱的传统分析技术包括库仑滴定法、电位滴定法、比色法、色谱法、电化 学W及化学发光方法。近年来，巧光法因其具有高的选择性和灵敏度、操作简单、费用低、W 及实时检测的特点，已被广泛用于各种分析物的检测。虽然用于检测阱的巧光探针已有所 报道，但它们大多都是基于单波长强度下巧光强度的变化来实现定性和定量分析的，运样 的检测方法易于受到探针的分布情况、检测环境W及仪器的稳定性等因素的影响。然而基 于双波长强度比值的变化来实现目标物的定性和定量分析能够有效避免W上因素的干扰。 因此，制备高选择灵敏分析阱的比率巧光探针是本发明的创新之处。
【发明内容】
[0004] 本领域急需一种制备简单的高选择阱比率巧光探针，从而能够有效检测阱。为此， 本发明合成了一类新颖的阱比率巧光探针，其合成简单、稳定性高、和/或选择性高，和/或 能够识别阱。 阳0化]具体而言，本发明合成了一种阱比率巧光探针，其为4-漠下酸醋糞酷亚胺类化合 物。
[0006] 另一方面，本发明提供了一种检测样本中阱含量的试剂盒，其中所述试剂盒含有 本发明的阱比率巧光探针。本发明的试剂盒可与阱进行作用，产生巧光光谱的变化，从而实 现对阱的定性和定量检测。
[0007] 具体而言，本发明的试剂盒中的阱比率巧光探针分别与其他分析物进行作用均不 能导致巧光光谱的明显改变，从而实现对阱的选择性识别，进而可任选地用于排除其他分 析物的存在对阱的定性和定量测定的干扰。
[0008] 可选择地，本发明的试剂盒中的阱比率巧光探针的稳定性好，进而能够长期保存 使用。
[0009] 进一步的，本发明的试剂盒中的阱比率巧光探针是高选择阱比率巧光探针，且合 成简单，有利于商业化的推广应用。
【附图说明】
[0010] 图1是不同浓度阱（0~100μM)对探针巧μM)巧光光谱的影响。 1] 图2是不同分析物巧0μΜ)对探针巧μΜ)巧光光谱的影响。 阳01引图3是不同分析物巧0μΜ)对探针巧μΜ)巧光光谱法定量分析阱巧0μΜ)的影 响。 阳01引 图4是探针巧μΜ)对100μΜ浓度阱响应时间的测试结果。
【具体实施方式】：
[0014] 本发明提出了上述高选择性阱比率巧光探针的合成路线、方法及其光谱性能。
[0015] 本发明的阱比率巧光探针是一类4-漠下酸醋糞酷亚胺类化合物，其具有W下结 构通式
[0016]
阳017] 上式中：Ri，R2,Rs，R"Rs，Re为氨原子，直链或支链烷基，直链或支链烷氧基，横酸 基，醋基，簇基；Ri，Rz，R3,R4,Rs，Re可W相同或不同。
[001引该类阱比率巧光探针的合成路线和方法如下：
[0019]
[0020] 本发明的高选择性识别阱比率巧光探针的显著特征是能够高选择性地识别阱，和 /或在其他高浓度分析物的存在下能够准确对阱进行定性和定量分析。重要的是，本发明的 阱比率巧光探针还能够用比率巧光法进行定性和定量分析。
[0021] 下面将通过借助W下实施例来更详细地说明本发明。W下实施例仅是说明性的， 应该明白，本发明并不受下述实施例的限制。 阳0巧实施例1
[0023]
[0024] (方案 1)将 4-径基-1，8-糞酷亚胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（166mg， 1.0mmol)、4-二甲氨基R比晚（122mg，1.0mmol)和二环己基碳二亚胺（412mg，2.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲烧中，室溫反应化后，减压蒸发得到粗产品，然后使用二氯甲烧进行柱 色谱分离，得到淡黄色纯净产品179mg，产率为43 %。 阳0巧](方案。将4-径基-1，8-糞酷亚胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（332mg， 2.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（244mg，2.Ommol)和二环己基碳二亚胺巧18mg，3.Ommol)溶于 20mL干燥的二氯甲烧中，室溫反应化后，减压蒸发得到粗产品，然后使用二氯甲烧进行柱 色谱分离，得到淡黄色纯净产品283mg，产率为68 %。 阳0%](方案扣将4-径基-1，8-糞酷亚胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二环己基碳二亚胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲烧中，室溫反应化后，减压蒸发得到粗产品，然后使用二氯甲烧进行柱 色谱分离，得到淡黄色纯净产品338mg，产率为81 %。
[0027](方案 4)将 4-径基-1，8-糞酷亚胺（269mg，1.Ommol)、4-漠下酸（498mg， 3.Ommol)、4-二甲氨基R比晚（366mg，3.Ommol)和二环己基碳二亚胺巧27mg，4. 5mmol)溶于 25mL干燥的二氯甲烧中，室溫反应1化后，减压蒸发得到粗产品，然后使用二氯甲烧进行柱 色谱分离，得到淡黄色纯净产品367mg，产率为88 %。 阳0巧]1h-NMIU400MHz，CDC!3)δ(*1〇 6) : 1. 04 (S, 9H)，6. 77 化J= 8.OHz, 2H)，7. 29-7. 4 1 (m, 8H)，7. 63 (d,J= 8.OHz, 4H)，7. 72-7. 77 (m, 3H)，7. 94 (d,J= 8.OHz, 1H)，7. 98 (S, 1H); 口C-NMR(100MHz,CDCI3)δ(*l〇 6) : 18. 51，25. 44, 101. 43, 116. 01，119. 70, 120. 61，122. 36, 1 24. 58, 124. 73, 125. 83, 126. 76, 127. 05, 129. 33, 130. 97, 131. 54, 133. 78, 134. 43, 145. 57, 1 52. 62, 158. 56, 162. 43.
[0029] 实施例2
[0030] 本发明的发明人进行了如下测试：（a)不同浓度阱（0~100μM)对探针巧μM)巧 光光谱的影响；插入图是547nm处巧光强度与452nm处巧光强度的比值与加入的阱浓度之 间的线性关系。上述测定是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸盐缓冲溶液（PBS)，抑值 7. 4的体系中，且所有光谱测试都是在25°C下阱加入作用15min后测得的。结果参见图1。
[0031] 从图1可W看出，伴随着探针溶液中阱浓度的增加，452nm处的巧光发射峰逐渐降 低，同时547皿处产生新的发射峰并逐渐升高，且在0~50μΜ阱浓度范围内和547皿处巧 光强度与452nm处巧光强度的比值成良好的线性关系。因此，本发明的探针能较精确地确 定待测样本中阱的含量。 阳0巧实施例3 阳03引不同分析物（50μM)对探针巧μM)巧光光谱的影响。分析物包括：乙二胺邸A、 二甲胺DMA、S乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸锭ΑΑ、硫离子S2、氯离子C1、漠离子化、舰离子 I、硫酸根离子S〇42、硫氯酸根离子SCN、谷脫甘肤G甜和阱，它们的浓度均为50μΜ。所有 测试条件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸盐缓冲溶液（PBS)，pH值7. 4的体系中完 成，且所有光谱都是在25°C下分析物加入作用15min后测得的。移取25μΙ的探针储备液 (ImM)放进5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取25μΙ上述分 析物储备液（lOmM)加入比色管内，然后用超纯水定容至5血。摇匀，静置15min，即可测定。 结果如图2所示。
[0034] 从图2可W看出，探针对阱具有很高的选择性，能够专一性地和阱进行反应。其原 因可能是腊首先与漠原子发生分子间的亲核取代反应，然后阱上的另外一个氮原子又发生 了分子内亲核取代反应胺解掉了醋基导致的。 阳0对实施例4
[0036] 不同分析物（50μM)对探针巧μM)巧光光谱法定量分析阱（50μM)的影响。分 析物包括：乙二胺邸Α、二甲胺DMA、Ξ乙胺TEA、正下胺ηΒΑ、乙酸锭ΑΑ、硫离子S2、氯离子 C1、漠离子化、舰离子I、硫酸根离子S〇42、硫氯酸根离子SCN、谷脫甘肤G甜和阱，它们的 浓度均为50μM。所有测试条件是在乙醇和水（3:7,V/V)含有5mM憐酸盐缓冲溶液（PBS)， pH值7. 4的体系中完成，且所有光谱都是在25°C下分析物加入作用15min后测得的。结果 如图3所示。
[0037] 从图3可W看出，生物体内存在的其他常见分析物不会明显干扰探针对阱的定性 与定量检测。 阳0測 实施例5
[0039] 探针巧μM)对100μΜ浓度阱响应时间的测试结果。首先，移取25μL的探针储 备液（ImM)放进5血比色管中，然后加入1.5血乙醇，250μΙlOOmMPBS，再移取50μΙ阱 储备液（lOmM)加入比色管内，然后用超纯水定容至5mlV陕速摇匀，计时测定。结果如图4 所示。
[0040] 从图4中可W看出，当阱加入探针溶液反应后，其巧光光谱即发生明显变化，15分 钟后巧光光谱趋于稳定。运种巧光光谱变化的快速性与明显性说明此探针完全可W用于阱 的即时检测。
【主权项】
1. 用于检测样本中阱含量的试剂盒，其中所述的试剂盒含有具有如下结构的化合物：其中：Ri，R2,R3,R4,Rs，Re为独立地选自由氨原子、直链或支链烷基、直链或支链烷氧基、 横酸基、醋基和径基组成的组；且其中的Ri，R2,R3,R4,Rs和Re可W相同或不同。2. 根据权利要求1的试剂盒，其中的试剂盒含有具有如下结构的化合物：3. 根据权利要求1或2的试剂盒，其中所述的样本为血液。4. 根据权利要求1或2的试剂盒，其中所述的试剂盒还包括使用说明书。5. 根据权利要求1或2的试剂盒，其中所述试剂盒还包括用于检测样本中阱含量的缓 冲剂。6. 权利要求1-5中任一项中所定义的化合物在制备用于检测样品中阱含量的试剂盒 中的用途。7. 根据权利要求6的用途，其中所述的样品为血液。8. 根据权利要求6的用途，其中所述的试剂盒还包括使用说明书。9. 根据权利要求6-8中任一项的用途，其中所述试剂盒还包括用于检测样本中阱含量 的缓冲剂。10. 用于检测血液中阱含量的制剂，其包含具有W下结构的化合物：
【专利摘要】本发明涉及高选择性检测肼含量的试剂盒及其应用。这类探针不仅能够高选择性地识别肼而且能够用荧光法对肼进行灵敏的定量和定性分析。这类探针可以快速对肼实现响应，可以实现对肼的即时检测。这类探针性质稳定，可以长期保存使用。此外，这类探针还能够使用比率荧光法对肼进行准确的定量分析，且具有较强的抗干扰能力。这类探针的合成条件相对温和，只需一步反应，合成简单。
【IPC分类】G01N21/64
【公开号】CN105403546
【申请号】CN201510755955
【发明人】叶龙武, 张艳
【申请人】晋江尚京富本环保科技有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年11月9日