一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法
【专利摘要】本发明涉及一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，包括以下步骤：将海水真空抽滤，然后pH调至2-4，再次真空抽滤得到预处理后的海水；用HLB固相萃取柱，海水过柱，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分2-5次洗脱，洗脱液在氮吹仪内于30-35℃水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，微孔纳滤，滤液备用；使用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。本发明对固相萃取条件进行了优化，使得固相萃取的时间缩短、效率变高，而高效液相色谱方法分析氧氟沙星对映体的浓度精度高，速度快，操作简单、成本较低；检测方法对目标化合物的线性关系好，回收率高，相对偏差小，使用的试剂低毒，使用量少，对环境友好。
【专利说明】
一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法
技术领域
[0001 ]本发明涉及一种快速高效检测海水中氧氟沙星对映体的方法。
【背景技术】
[0002]氧氟沙星是一种人工合成的广谱抗菌药，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、支原体、衣原体和军团杆菌等都有很好的抑制作用，此外，氧氟沙星还具有吸收良好、抑菌浓度低、抗菌活性高、不易产生耐药菌、低毒等优点，目前已在水产养殖中普遍使用。氧氟沙星是一种手性药物，含有一个手性中心两个手性对映体。已有研究表明，氧氟沙星的两个对映体中左氧氟沙星是主要的活性成分，而右氧氟沙星的活性很低;另外，左氧氟沙星的抗菌活性也高于氧氟沙星外消旋体，而且更易溶于水，其水溶性是外消旋体的8倍。由于氧氟沙星的广泛使用，对氧氟沙星的手性研究也较多，如曾苏等以L-苯丙氨酸为配合剂，以Cu2+为配合离子，建立了一种简便的手性配合交换反向高效液相色谱法拆分氧氟沙星对映体，该法已用于人尿中氧氟沙星对映体的分析;俞犄等以环糊精为拆分试剂，建立了一种高效毛细管电泳法拆分氧氟沙星对映体;邵兵等利用手性柱对氧氟沙星对映体进行分离，并将此法应用于水样中氧氟沙星对映体的检测。这些分离方法的建立，为氧氟沙星在生物体内及环境中的选择性行为研究提供了便利。
[0003]目前手性药物对映体的常用分离方法有结晶法、动力学方法、酶拆分法和色谱法等，这些方法应用广泛，促进了手性药物的研究和发展。然而，这些方法也存在一些不足之处，如结晶法操作繁琐、分离时间长、适用性窄，酶拆分法对酶的专一性有较高要求，分离成本较高，而色谱拆分法是目前应用最广泛的一种方法。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于为了解决现有结晶法检测氧氟沙星对映体成本高、分离时间长，适用性窄，操作复杂，精度不高的缺陷而提供一种快速、精度高，操作简单、成本较低的检测海水中氧氟沙星对映体的方法。
[0005]为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案:
一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，包括以下步骤:
1)预处理:将海水真空抽滤，然后pH调至2-4，再次真空抽滤，0-4°C下保存，得到预处理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_对甲基二苯甲酰酒石酸，含柠檬酸铵的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步骤I)预处理后的海水过柱，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分
2-5次洗脱，洗脱液在氮吹仪内于30-350C水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，微孔纳滤，滤液备用；
3)检测:将步骤2)得到的滤液定量检测氧氟沙星对映体的浓度。在本技术方案中，本发明所用的萃取方法效果好，时间短，降低了试剂的消耗量。
[0006]作为优选，步骤2)中草酸水溶液中草酸的质量分数为5-6.5%，梓檬酸钱的质量分数为 0.2-0.33 %。
[0007]作为优选，步骤2)中海水过柱的流速为6-9mL/min。
[0008]作为优选，步骤2)中洗脱液流速为1.2-1.5mL/min。
[0009 ] 作为优选，步骤2)中洗脱液为含体积分数10-13 %的甲醇溶液。
[0010]作为优选，步骤3)是采用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。
[0011 ]作为优选，高效液相色谱的条件为:色谱柱:CHIRALCEL 0D-H;流动相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有体积比为0.4 %的冰乙酸和0.5 %的三乙胺)；流速:0.7mL/min ；检测波长:294nm ；进样量:20yL ；柱温:25 °C。
[0012]本发明的有益效果是本发明对固相萃取条件进行了优化，使得固相萃取的时间缩短、效率变高，而高效液相色谱方法分析氧氟沙星对映体的浓度精度高，速度快，操作简单、成本较低;检测方法对目标化合物的线性关系好，回收率高，相对偏差小，使用的试剂低毒，使用量少，对环境友好。
【附图说明】
[0013]图1为对比试验的色谱图。
[0014]图中，A为S-(-)-0FL色谱图；BSR-( + )-0FL色谱图；C为空白海水色谱图；D为氧氟沙星消旋体色谱图。
【具体实施方式】
[0015]下面通过【具体实施方式】对本发明做进一步的描述。
[0016]在本发明中，若非特指，所有设备和原料均可从市场购得或是本行业常用的，下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域常规方法。
[0017]高效液相色谱仪AgiIent 1200购自安捷伦(中国)科技有限公司；水浴氮吹仪WD-12购自河南天驰仪器设备有限公司；固相萃取仪HSE-12B购自天津市恒奥科技发展有限公司；固相萃取柱Waters Oasis HLB购自杭州伽钛科学仪器有限公司；冰乙酸(分析纯)、三乙胺(分析纯)购自国药集团化学试剂有限公司；S-(-)-0FL、R-( + )-0FL购自大赛璐药物手性技术(上海)有限公司。
[0018]高效液相色谱的条件为:色谱柱:CHIRALCEL OD-H;流动相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有体积比为0.4%的冰乙酸和0.5%的三乙胺)；流速:0.7mL/min;检测波长:294nm ；进样量:20yL ；柱温:25 °C。
[0019]实施例1
一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，包括以下步骤:
1)预处理:将海水真空抽滤，然后pH调至2，再次真空抽滤，0-4°C下保存，得到预处理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_对甲基二苯甲酰酒石酸，含柠檬酸铵的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步骤I)预处理后的海水过柱，过柱的流速为6mL/min，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分2次使用含体积分数10 %的甲醇溶液洗脱，洗脱液流速为1.2mL/min，洗脱液在氮吹仪内于30 0C水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，0.2Ιμπι微孔纳滤，滤液备用;草酸水溶液中草酸的质量分数为5%，朽1檬酸钱的质量分数为0.2%。
[0020]3)检测:使用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。
[0021]实施例2
一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，包括以下步骤:
1)预处理:将海水真空抽滤，然后pH调至3，再次真空抽滤，0-4°C下保存，得到预处理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_对甲基二苯甲酰酒石酸，含柠檬酸铵的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步骤I)预处理后的海水过柱，过柱的流速为7mL/min，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分3次使用含体积分数12 %的甲醇溶液洗脱，洗脱液流速为1.3mL/min，洗脱液在氮吹仪内于33 °C水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，0.22μπι微孔纳滤，滤液备用;草酸水溶液中草酸的质量分数为5.5%,柠檬酸铵的质量分数为0.25 %。
[0022]3)检测:使用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。
[0023]实施例3
一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，包括以下步骤:
1)预处理:将海水真空抽滤，然后pH调至4，再次真空抽滤，0-4°C下保存，得到预处理后的海水；
2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_对甲基二苯甲酰酒石酸，含柠檬酸铵的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步骤I)预处理后的海水过柱，过柱的流速为9mL/min，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分5次使用含体积分数13 %的甲醇溶液洗脱，洗脱液流速为1.5mL/min，洗脱液在氮吹仪内于35 °C水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，0.23μπι微孔纳滤，滤液备用;草酸水溶液中草酸的质量分数为6.5%,柠檬酸铵的质量分数为0.33%。
[0024]3)检测:使用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。
[0025]分别称取Img S-(-)-0FL、R-( + )-0FL和氧氟沙星消旋体，置于10mL容量瓶中，用空白海水定容，超声摇匀后，实施例1的步骤经高效液相色谱仪检测后，所得色谱图示于图1；结果表明，S-(-)-OFL和R-( +)-OFL的色谱峰峰形良好，二者达到了基线分离，S_( -)-OFL和1?-( + )-0?1^的保留时间分别为11.21^11和15.11^11，分离度为1.56，海水中的杂质不干扰氧氟沙星对映体的测定。对比图1中A、B和D，确定图D中的峰I为S-(-)-0FL，峰2为lH + )-0FL。
[0026]S-(- )-0FL 和R-( + )-0FL 的标准曲线分别为y= 127.672x+4.27841 和y= 126.5752x+4.76896，R2分别为0.99908和0.99847，在0.05mg/L至5mg/L浓度范围内线性良好。
【主权项】
1.一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)预处理:将海水真空抽滤，然后pH调至2-4，再次真空抽滤，0-4°C下保存，得到预处理后的海水； 2)萃取:依次用甲醇、L-(-)_对甲基二苯甲酰酒石酸，含柠檬酸铵的草酸水溶液活化的HLB固相萃取柱，取步骤I)预处理后的海水过柱，萃取完成后用去离子水淋洗，负压抽干，分2-5次洗脱，洗脱液在氮吹仪内于30-350C水浴中，氮气吹干，残余物用乙醇复溶，微孔纳滤，滤液备用； 3)检测:将步骤2)得到的滤液定量检测氧氟沙星对映体的浓度。2.根据权利要求1所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，步骤2)中草酸水溶液中草酸的质量分数为5-6.5%，朽1檬酸钱的质量分数为0.2-0.33%。3.根据权利要求1所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，步骤2)中海水过柱的流速为6-9mL/min。4.根据权利要求1所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，步骤2)中洗脱液流速为1.2-1.5mL/min。5.根据权利要求1所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，步骤2)中洗脱液为含体积分数10-13%的甲醇溶液。6.根据权利要求1所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，步骤3)是采用高效液相色谱仪检测氧氟沙星对映体的浓度。7.根据权利要求6所述的一种检测海水中氧氟沙星对映体的方法，其特征在于，高效液相色谱的条件为:色谱柱:CHIRALCEL OD-H;流动相:正己烷-乙醇(20:80，v/v，乙醇中含有体积比为0.4%的冰乙酸和0.5%的三乙胺)；流速:0.7 mL/min ；检测波长:294 nm;进样量:20(L;柱温:25 °C。
【文档编号】G01N30/06GK105823851SQ201510938597
【公开日】2016年8月3日
【申请日】2015年12月15日
【发明人】欧阳小琨, 杨立业, 王艳飞, 王阳光, 高小峰
【申请人】浙江海洋学院